高爾基復合體的蛋白質糖基化
N-連接的糖鏈合成起始于內質網，完成于高爾基體。在內質網形成的糖蛋白具有相似的糖鏈，由Cis面進入高爾基體后，在各膜囊之間的轉運過程中，發生了一系列有序的加工和修飾，原來糖鏈中的大部分甘露糖被切除，但又被多種糖基轉移酶依次加上了不同類型的糖分子，形成了結構各異的寡糖鏈。糖蛋白的空間結構決定了它可以和哪一種糖基轉移酶結合，發生特定的糖基化修飾。 許多糖蛋白同時具有N-連接的糖鏈和O-連接的糖鏈。O-連接的糖基化在高爾基體中進行，通常的一個連接上去的糖單元是N-乙酰半乳糖，連接的部位為Ser、Thr和Hyp的OH基團，然后逐次將糖基轉移到上去形成寡糖鏈，糖的供體同樣為核苷糖，如UDP-半乳糖。糖基化的結果使不同的蛋白質打上不同的標記，改變多肽的構象和增加蛋白質的穩定性。在高爾基體上還可以將一至多個氨基聚糖鏈通過木糖安裝在核心蛋白的絲氨酸殘基上，形成蛋白聚糖。這類蛋白有些被分泌到細胞外形成細胞外基質或粘液層，有些錨定在膜上。......閱讀全文
高爾基復合體的蛋白質糖基化
N-連接的糖鏈合成起始于內質網，完成于高爾基體。在內質網形成的糖蛋白具有相似的糖鏈，由Cis面進入高爾基體后，在各膜囊之間的轉運過程中，發生了一系列有序的加工和修飾，原來糖鏈中的大部分甘露糖被切除，但又被多種糖基轉移酶依次加上了不同類型的糖分子，形成了結構各異的寡糖鏈。糖蛋白的空間結構決定了它可
蛋白質糖基化的檢測
試劑、試劑盒 磷酸鈉緩沖液蛋白溶液β-巰基乙醇NP-40 溶液儀器、耗材 SDS-PAGE實驗步驟 一、用 PNGaseF（N-多糖酶）處理1. 以 0.1 mol/L 磷酸鈉（或 Tris-HCl，而不用檸檬酸）緩沖液，pH 7.4 ( 7.0~8.0 ) 配制高達 2 mg/ml 的蛋白溶液，并
蛋白質糖基化的過程
N-連接的糖鏈合成起始于內質網，完成于高爾基體。在內質網形成的糖蛋白具有相似的糖鏈，由Cis面進入高爾基體后，在各膜囊之間的轉運過程中，發生了一系列有序的加工和修飾，原來糖鏈中的大部分甘露糖被切除，但又被多種糖基轉移酶依次加上了不同類型的糖分子，形成了結構各異的寡糖鏈。糖蛋白的空間結構決定了它可以和
蛋白質糖基化的檢測實驗——化學脫糖基化
實驗材料蛋白樣品試劑、試劑盒TFMS苯甲醚儀器、耗材玻璃器皿實驗步驟1. 在冰上預冷干凈、干燥的玻璃器皿。用帶有 Teflon-絲帽的玻璃試管混合試劑。2. 打開或混合試劑前，在冰上預冷所有的溶液。從冰冷的原液中，TFMS:苯甲醚 ( Sigma) 以 2:1 (v/v) 的比例混合。緩慢的向試管內
蛋白質糖基化的檢測實驗——酶脫糖基化
實驗方法原理用酶或化學脫糖基化、通過選擇性標記或通過凝集素親和層析法是檢測蛋白糖基化常用方法。實驗材料蛋白樣品試劑、試劑盒磷酸鈉緩沖液蛋白溶液β-巰基乙醇NP-40 溶液儀器、耗材SDS-PAGE玻璃器皿植物凝集素柱實驗步驟一、用 PNGaseF（N-多糖酶）處理1. 以 0.1 mol/L 磷酸鈉
蛋白質糖基化分類
根據糖苷鏈類型，蛋白質糖基化可以分為四類，即以絲氨酸、蘇氨酸、羥賴氨酸和羥脯氨酸的羥基為連接點，形成-O-糖苷鍵型。以天冬酰胺的酰胺基、N一末端氨基酸的 α - 氨基以及賴氨酸或精氨酸的ω - 氨基為連接點，形成-N-糖苷鍵型;以天冬氨酸或谷氨酸的游離羧基為連接點，形成脂糖苷鍵型以及以半胱氨酸為連接
蛋白質糖基化的案例研究
蛋白質糖基化是一種生命活動中普遍存在的翻譯后修飾，賦予蛋白質不同的生物功能和增強的物理化學穩定性。糖基化的類型根據糖苷鍵中涉及的特定原子進行分類：O-糖基化將糖連接到絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸殘基的羥基氧上；N-糖基化將糖與天冬酰胺的酰胺氮連接；S-糖基化將糖添加到半胱氨酸的硫醇硫中，這類糖基化不太常見
糖基化蛋白質的基本信息
中文名稱糖基化蛋白質英文名稱glycosylated protein定 義帶有共價連接糖鏈的蛋白質。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），糖類（二級學科）
蛋白質的糖基化修飾主要分為
特征 N-連接 O-連接合成部位 粗面內質網 主要在高爾基體合成方式 來自同一個寡糖前體 一個個單糖加上去與之結合的氨基酸殘基 天冬酰氨 絲氨酸、蘇氨酸、羥脯、羥賴最終長度 至少5個糖殘基 1-4個糖殘基第一個糖殘基 N-乙酰葡萄糖胺 N-乙酰半乳糖胺大概清楚了吧！ 蛋白質糖基化是一種蛋白質修飾，作
高爾基體蛋白質糖基化的介紹
N-連接的糖鏈合成起始于內質網，完成于高爾基體。在內質網形成的糖蛋白具有相似的糖鏈，由Cis面進入高爾基體后，在各膜囊之間的轉運過程中，發生了一系列有序的加工和修飾，原來糖鏈中的大部分甘露糖被切除，但又被多種糖基轉移酶依次加上了不同類型的糖分子，形成了結構各異的寡糖鏈。糖蛋白的空間結構決定了它可
陸豪杰：蛋白質糖基化的質譜解析
分析測試百科網訊 2020年9月14日，由中國質譜學會（中國物理學會質譜分會）主辦，分析測試百科網和中國質譜學會網承辦的2020年中國質譜學會質譜網絡研討會（2020 CMSS）正式開幕。本屆質譜網絡研討會正值中國質譜學會成立40周年，按報告內容涉及領域包括生命科學與組學、藥物藥理毒理分析、元素
概述高爾基復合體的功能
高爾基體的主要功能將內質網合成的蛋白質進行加工、分揀、與運輸，然后分門別類地送到細胞特定的部位或分泌到細胞外。 高爾基體是完成細胞分泌物（如蛋白）最后加工和包裝的場所。從內質網送來的小泡與高爾基體膜融合，將內含物送入高爾基體腔中，在那里新合成的蛋白質肽鏈繼續完成修飾和包裝。高爾基體還合成一些分
高爾基復合體的形態組成
高爾基體是由數個扁平囊泡堆在一起形成的高度有極性的細胞器。常分布于內質網與細胞膜之間，呈弓形或半球形，凸出的一面對著內質網稱為形成面（forming face）或順面（cis face）。凹進的一面對著質膜稱為成熟面（mature face）或反面（trans face）。順面和反面都有一些或大
蛋白質糖基化位點檢測實驗步驟
用酶或化學脫糖基化、通過選擇性標記或通過凝集素親和層析法是檢測蛋白糖基化常用方法。 一、用 PNGaseF（N-多糖酶）處理。 1. 以 0.1 mol/L 磷酸鈉（或 Tris-HCl，而不用檸檬酸）緩沖液，pH 7.4 ( 7.0~8.0 ) 配制高達 2 mg/ml 的蛋白溶液，并含 5
細胞培養條件對蛋白質糖基化的影響
糖基化可能會影響蛋白質的半衰期、免疫原性、結合活性和穩定性。蛋白糖基化是一個復雜的過程，包括碳水化合物部分的連接，以及可能通過蛋白質結構中的天冬酰胺（N-連接）或絲氨酸/蘇氨酸（O-連接）氨基酸連接的位置。在哺乳動物細胞培養過程中，使用不同的細胞系培養可能會在可能發生的糖基化類型上產生重大差異。糖基
植物蛋白質組學和糖基化（二）
4. 注釋( 1 ) 每個實驗均使用新鮮的 3 mol/L 甲醇- HCl 和硅烷化試劑。( 2 ) 要仔細識別蛋白質印跡，因為 WGA 既能識別 N-糖苷的 GlcNAc，也能識別 O-GlcNAc。( 3 ) 用于在硝酸纖維素印跡膜上封閉結合位點的溶液應避免糖蛋白污染。所以我們建議在這一步驟中使
植物蛋白質組學和糖基化實驗
實驗材料鏈霉親和素-過氧化物酶 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? 牛胰核糖核酸酶 B ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
植物蛋白質組學和糖基化（一）
?1. 前言與其他真核細胞一樣，植物細胞中，糖基化通常發生在分泌蛋白質上，雖然在細胞質蛋白和核蛋白上也發現一些糖基化反應。根據寡糖部分和蛋白質骨架之間的連接方式，可將糖基化分為兩種類型：N -糖基化和 O-糖基化。植物中 N-糖基化研究最多。1.1 N-糖基化與其他真核細胞一樣，在植物細胞中，N-糖
高爾基復合體的超微結構特征
在電鏡下，高爾基復合體是由一-組 扁平囊和周圍大量大小不等的囊泡組成的膜性立體網狀結構。在大部分細胞中，有明顯極性，-般由 3~ 10層略彎曲的扁平膜囊平行排列形成高爾基堆。主要有三部分:①順面高爾基網:也稱凸面、形成面或順面，囊膜較薄，接受來自于內質網的包含新合成物質的小囊泡，并進行分選，然后將大
PROTEOMICS：OGalNAc糖基化修飾蛋白質的系統發現
近日，上海交通大學系統生物醫學研究院張延課題組在國際知名蛋白質組學研究期刊PROTEOMICS上發表題為《Systematic identification of the protein substrates of UDP-GalNAc: polypeptide N-acetylgalactos
蛋白質糖基化修飾在生命體中的作用
治療性重組蛋白或單克隆抗體是影響細胞、組織、器官乃至生命的外源性重組蛋白，在細胞內成熟過程中幾乎均會發生蛋白質糖基化修飾，而糖基化修飾的質和量的差異，可能會影響相關重組蛋白表達水平、結構及功能。重組蛋白表達服務可以幫助研發人員研發高效、高質量的蛋白質。在生物體中50%以上的蛋白質存在糖基化現象，
植物蛋白質組學和糖基化實驗1
實驗材料鏈霉親和素-過氧化物酶牛胰核糖核酸酶 B甲基比喃甘露糖苷卵清白蛋白試劑、試劑盒DIG 糖鏈檢測試劑TTBS 緩沖液Lectin- biotinTBS 緩沖液實驗步驟3.1 這個蛋白質是糖蛋白嗎只有一種方法能全面的回答“這個蛋白質是糖蛋白嗎?”這個問題。這需要使用能檢測并定量印記上糖蛋白的總糖
植物蛋白質組學和糖基化實驗（四）
3.3 我的糖基化蛋白在哪實驗人員可通過這個方法獲得關于糖苷在蛋白骨架上的分布及糖苷本身的結構信息。這類實驗可在純化的糖蛋白或者從 1D 或 2D 電泳膠上分離出來的蛋白上進行，首先，用蛋白內切酶消化蛋白質，通過高效液相色譜（HPLC) 分離消化后的肽和糖肽混合物。對含有糖苷的收集組分進行糖
植物蛋白質組學和糖基化實驗（二）
刀豆球蛋白 A (ConA)- 過氧化物酶方法（根據參考文獻 20 修改的方法)。( 1 ) 通過 1D 或 2D 電泳分離，并轉移到硝酸纖維素膜上。( 2 ) 用 TTBS 緩沖液浸泡印跡膜 1 h。( 3 ) 將印跡膜在含有 ConA ( 25 μg/ml）的 TTBS 緩沖液中，室溫下溫育 2
植物蛋白質組學和糖基化實驗（一）
實驗材料?鏈霉親和素-過氧化物酶牛胰核糖核酸酶 B甲基比喃甘露糖苷卵清白蛋白試劑、試劑盒?DIG 糖鏈檢測試劑TTBS 緩沖液Lectin- biotinTBS 緩沖液實驗步驟 3.1 這個蛋白質是糖蛋白嗎只有一種方法能全面的回答“這個蛋白質是糖蛋白嗎?”這個問題。這需要使用能檢測并定量印記上糖蛋白
植物蛋白質組學和糖基化實驗（五）
1. 含高甘露糖型 N-糖苷糖蛋白的鑒定本方法是我們實驗室以油菜籽為實驗材料建立的，本方法也適用于其他植物材料。( 1 ) 將 6 g 植物材料放入 4°C 預冷的研缽中，加入 50 ml 預冷的 TBS 緩沖液，研磨萃取蛋白質（見注釋 13)，接著 10000 g 離心萃取物 30 min，去
植物蛋白質組學和糖基化實驗（三）
3. 糖基釋放后的蛋白質分析1 ) 糖基釋放的化學處理方法還原性氨化反可應選擇性的解離糖蛋白上的 O-糖苷（見注釋 10) 。去糖基化的蛋白用 1D SDS-PAGE 分析，將其遷移情況與其糖基化形式的蛋白進行比較，電泳遷移率的增加是 O-連糖苷出現在蛋白上的證據（見注釋 11)。( 1 ) 將 1
蛋白質和脂質，RNA都可以糖基化
眾所周知，糖基化是在各種酶的作用下將糖添加到蛋白質或脂質中的過程。這個過程開始于內質網，結束于高爾基體。例如，糖在糖基轉移酶的作用下轉移到蛋白質上，與蛋白質上的氨基酸殘基形成糖苷鍵，最終形成糖蛋白。最近，一項名為“Small RNAs are modified with N-glycans an
植物蛋白質組學和糖基化實驗2
3. 糖基釋放后的蛋白質分析1 ) 糖基釋放的化學處理方法還原性氨化反可應選擇性的解離糖蛋白上的 O-糖苷（見注釋 10) 。去糖基化的蛋白用 1D SDS-PAGE 分析，將其遷移情況與其糖基化形式的蛋白進行比較，電泳遷移率的增加是 O-連糖苷出現在蛋白上的證據（見注釋 11)。( 1 ) 將 1
高爾基復合體的作用過程介紹
細胞中蛋白質的合成從細胞核中的基因組DNA轉錄合成信使RNA（mRNA）開始，mRNA穿過了細胞核到達核外，在內質網（ER）上合成了蛋白質，此時蛋白質會從內質網上以小囊泡的形式脫離下來，其目的地就是物流中心——高爾基體，就像工廠里面生產出來的商品被輸送到物流中心再向用戶配送一樣。其實，被輸送到高