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離子交換純化是利用離子交換劑上的可解離基團（活性基團）對各種離子的親和力不一樣人達到分離的目的的一種分離技術。離子交換劑是含有若干活性基團 的不溶性物質，即在不溶性母體上引入若干可解離基團而成，根據引入解離基團的不同，可以分為陽離子交換劑和陰離子交換劑。各種離子對離子交換劑的親和力各 不相同，親和力隨離子的價數與原子序數增加而增加，而隨離子水化膜半徑的增加而降低。對具體離子交換純化，需要主要離子交換劑的選擇和處理。洗脫不同蛋白 的最恰當的離子強度液不一定一樣，通常采用濃度梯度和PH梯度相結合的方式洗脫，純化不同的蛋白最好先摸一摸洗脫液的離子濃度和PH值……......閱讀全文
超高效液相色譜洗脫技術的質量取決于什么?如何利用QbD評判色譜儀洗脫質量，它除關注關鍵性的鄰近雙峰外也考慮了洗脫的穩定性。 圖1 色譜洗脫技術的經驗模型。模型中的影響因素有梯度時間(tG)、溫度(T)、有機洗脫劑B的初始濃度(%Bs)及最終濃度(%Be)、
⑥元素分析：如果配體中含有某種特別的元素，通過元素分析就可以確定配體結合量。⑦放射性分析法：偶聯中加入一定量帶有同位素的配體，通過放射性分析確定配體結合量，這是一種非常靈敏的方法。影響配體結合量的因素很多，包括基質和配體的性質、基質的活化方法及條件、基質和配體偶聯反應的條件等等。例如通常溴化氰活化的
配體與基質偶聯后，通常要測定配體的結合量以了解其與基質的偶聯情況，同時也可以推斷親和層析過程中對待分離的生物大分子吸附容量。配體結合量通常是用每毫升或每克基質結合的配體的量來表示。測定配體結合量的方法很多，下面簡單介紹幾種：1) 差量分析：根據加入配體的總量減去配體與基質偶聯后洗滌出來的量即可大致推
1.上樣親和層析純化生物大分子通常采用柱層析的方法。親和層析柱一般很短，通常10cm左右。上樣時應注意選擇適當的條件，包括上樣流速、緩沖液種類、 pH、離子強度、溫度等，以使待分離的物質能夠充分結合在親和吸附劑上。一般生物大分子和配體之間達到平衡的速度很慢，所以樣品液的濃度不易過高，上樣時流速應比較
親和層析 一般用于純化蛋白質和核酸等大分子物質的方法的主要依據是各種大分子物質之間理化特性的差異性。下面我們來分析一下親和層析過程中的注意事項。 1.上樣 親和層析純化生物大分子通常采用柱層析的方法。親和層析柱一般很短，通常10cm左右。上樣時應注意選擇適當的條件，包括上樣流速、緩沖液種類、
黃柏為常用中藥, 始載于《神農本草經》, 原名“檗木”, 具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡的功效[1]。黃柏的主要藥效成分為生物堿[2], 包括黃柏堿、藥根堿、巴馬丁和小檗堿, 臨床上常用于降血壓、抗心律失常、抗血小板聚集、降血糖、逆轉腫瘤耐藥性、抗氧化等[3,4]。細胞藥理實驗是研究中藥藥效物質的
[摘要]以麥麩酶法降解液為原料，采用D201大孔樹脂對阿魏酸進行分離提純，探討了上柱工藝條件和洗脫條件，確定最佳離子交換操作工藝：室溫下，料液阿魏酸濃度在20OOmg／L-3000mg／L之間，pH值9．0，上柱流速1 mE／min，洗脫劑配比(V／V)為無水乙醇：水：鹽酸=60：36：4，洗脫
（一）原理 凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能
實驗步驟一、親和介質的選擇親和純化的成功取決于是否選擇了合適的固相載體和配基。理想的親和介質 (如吸附配基的固相載體)應該具備孔隙大、理化性質高度穩定的特征。親和介質可以選擇性的捕獲相應耙標，既保證較弱的非特異性吸附，又可以在整個過程中維持良好的流動特征。優選介質應具備便宜、易獲取和使用簡便的特點。
實驗步驟 一、親和介質的選擇 親和純化的成功取決于是否選擇了合適的固相載體和配基。理想的親和介質 (如吸附配基的固相載體)應該具備孔隙大、理化性質高度穩定的特征。親和介質可以選擇性的捕獲相應耙標，既保證較弱的非特異性吸附，又可以在整個過
免疫球蛋白（Immunoglobulin Ig）的含量代表著機體體液免疫的水平，并進一步代表著B細胞的功能，因此測定血清Ig含量可以推知機體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。 隨著免疫學的發展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。純化的方法很
離子交換層析在純化蛋白質的層析手段中使用最為廣泛。它對蛋白質的分辨率高，操作簡易，重復性好，成本低。按照離子交換原理，蛋白質可從大量緩沖性溶液中被分離，所以此方法尤適于蛋白質粗提物的初始純化。在分離蛋白質時，速度往往是很重要的。 如蛋白酶的初始分離和不穩定蛋白質的純化。離子交換層析提供了很多加速分離
實驗方法原理 可進行離子交換的蛋白質在實驗條件下必須有單一電荷。溶液中單一電荷的蛋白質可被離子交換樹脂上的小離子置換（指與蛋白質末端離子的交換）；固定在樹脂上。通過提高溶液中相反離子濃度或降低蛋白質所帶電荷數等方法可將蛋白質從樹脂上洗脫下來。利用此法，可根據不同蛋白質電荷性質不同而將其分離開來。若已
離子交換層析法 實驗方法原理 可進行離子交換的蛋白質在實驗條件下必須有單一電荷。溶液中單一電荷的蛋
灌注凝膠時要求將均勻的凝膠一直加到所需柱床高度，不能時斷時續，否則將出現分層或“紋路”等毛病。若中途出現這些現象，可以用玻璃棒將已形成的柱床逐步攪起，直至出毛病的部分再讓凝膠重新沉降或繼續加入攪勻的凝膠懸液。若在灌好膠后才發現“紋路”、分層等現象時，要重新裝柱，以免影響層析效果。在做大型的凝膠柱時，
鎳(Ni)是一種常見的過渡元素, 也是人類、動植物新陳代謝過程中必需的微量元素。水中鎳是環保水質監測的分析項目, 我國 GB 5749-2006《生活飲用水衛生標準》中鎳的最高允許量為0. 02 mg / L[1]目前，
灌注凝膠時要求將均勻的凝膠一直加到所需柱床高度，不能時斷時續，否則將出現分層或“紋路”等毛病。若中途出現這些現象，可以用玻璃棒將已形成的柱床逐步攪起，直至出毛病的部分再讓凝膠重新沉降或繼續加入攪勻的凝膠懸液。若在灌好膠后才發現“紋路”、分層等現象時，要重新裝柱，以免影響層析效果。在做大型的凝膠柱時，
5. 正相色譜與反相色譜 正相色譜是指固定相的極性高于流動相的極性，因此，在這種層析過程中非極性分子或極性小的分子比極性大的分子移動的速度快，先從柱中流出來。 反相色譜是指固定相的極性低于流動相的極性，在這種層析過程中，極性大的分子比極性小的分子移動的速度快而先從柱中流出。&
凝膠層析法脫鹽和分離蛋白質（附凝膠過濾法原理及基本操作）-3（2）裝柱將層析劑裝入柱中進行層析的方法稱柱層析法。作層析用的柱子稱層析柱。層析柱有玻璃和透明塑料的兩種。柱子的一端為進口，另一端為出口，出口端底部有燒結玻璃砂板或尼龍布，能阻止層析劑流出，溶劑則可流過。如果沒有市售的層析柱，可以選用粗細均
離子交換劑的總交換容量通常以每毫克或每毫升交換劑含有可解離基團的毫克當量數（meq / mg或meq / ml）來表示。通常可以由滴定法測定。陽離子交換劑首先用HCl處理，使其平衡離子為H?。再用水洗至中性，對于強酸型離子交換劑，用NaCl充分置換出H?，再用標準濃度的NaOH滴定生成的HCl，
SDS-PAGE 在確定樣品中多肽的數量和大小方面已被證明是極有用的分析方法。若能熟練運用的話, 它還具有分離許多大小不一的單體蛋白質的能力。許多人在凝膠電泳應用的早期希望可以利用凝膠的高分辨率特性來獲得小量的純凈蛋白質。實驗步驟一、通過擴散來洗脫凝膠中的蛋白質將 SDS 從蛋白質中移除的早期方法由
柱層析的基本裝置及基本操作目前，最常用的層析類型是各種柱層析，下面就簡述柱層析的基本裝置及操作方法，薄層層析的裝置和操作將在后面詳細討論。(1)柱層析的基本裝置柱層析的基本裝置，如圖2－21 。(2)柱層析的基本操作柱層析的基本操作包括以下一些步驟：①裝柱柱子裝的質量好與差，是柱層析法能否成功分離純
實驗步驟 一、通過擴散來洗脫凝膠中的蛋白質 將 SDS 從蛋白質中移除的早期方法由 Weber 和 Kutter(1971) 發表，但當用于微量的蛋白質時，這個方法既麻煩又會造成大部分蛋白質的損失。 這一領域較多的早期方法已經發
ICS 67.100.10X 04GB/T 18980-2003乳和乳粉中黃曲霉毒素M,的測定免疫親和層析凈化高效液相色譜法和 熒 光 光 度 法Determination of aflatoxin M1 content in milk and milk powder-Cleanup by immu
等度洗脫是指實驗過程中(做樣過程)從頭到尾只用一種流動相。也就是只用一個泵，輸送同一種流動相。 梯度洗脫是指在同一個分析周期中隨著時間的變化按一定程序梯度性地改變洗脫液的比例(濃度配比、成 分、離子強度、溶液極性等)或pH，以期將層析柱上不同的組分洗脫出來的方法。從而可以使一個復雜樣
一、通過擴散來洗脫凝膠中的蛋白質將 SDS 從蛋白質中移除的早期方法由 Weber 和 Kutter(1971) 發表，但當用于微量的蛋白質時，這個方法既麻煩又會造成大部分蛋白質的損失。這一領域較多的早期方法已經發表（HagerandBurgess,1980)，但卻需要重新討論 (butbear
等度洗脫是指實驗過程中（做樣過程）從頭到尾只用一種流動相。也就是只用一個泵，輸送同一種流動相。 梯度洗脫是指在同一個分析周期中隨著時間的變化按一定程序梯度性地改變洗脫液的比例(濃度配比、成分、離子強度、溶液極性等)或pH，以期將層析柱上不同的組分洗脫出來的方法。從而可以使一個復雜樣品中性質（極
方案6 計算機輔助方法優化梯度條件的 RP-HPLC 蛋白質分離實驗實驗材料HPLC 肽標準品蛋白質樣品試劑、試劑盒丙酮乙腈（HPLC級）磷酸磷酸二氫鈉硫脲硝酸鈉三氟乙酸儀器、耗材分析型 HPLC 裝置色譜柱洗脫液瓶Hamilton 玻璃注射器氮氣量筒微量離心機流動相過濾裝置實驗步驟一、配制流動相以
溶菌酶,全稱為1,4-β-N-溶菌酶,又稱粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶,屬于α-乳白蛋白家族。人們對溶菌酶的研究始于上世紀初,英國細菌學家Fleming發現人的唾液、眼淚中存在有溶解細菌細胞壁的酶,因其具有溶菌作用,故命名為溶菌酶；此后人們在微生物、植物、無脊椎動物和高等動物中也發現了溶菌酶的存在
實驗材料反相裝填材料試劑、試劑盒緩沖液HPLC 級乙腈HPLC 級甲醇氯化鈣溶液碳酸氫銨溶液儀器、耗材離子講串聯質譜儀實驗步驟3.1 葉片和根組織的取材以及蛋白質沉淀( 1 ) 從植物的中部切取未衰老的綠色葉片，立即放入自封塑料袋中冷凍。如果沒有冷凍設備，可先放在冰上，然后再放到 -20°C 保存。