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細胞融合是一個隨機的物理過程.在小鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞混合細胞懸中,經融合后細胞將以多種形式出現.如融合的脾細胞和瘤細胞、融合的脾細胞和脾細胞、融合的瘤細胞和瘤細胞、未融合的脾細胞、未融合的瘤細胞以及細胞的多聚體形式等.正常的脾細胞在培養基中存活僅5～7天,無需特別篩選,細胞的多聚體形式也容易死去.而未融合的瘤細胞則需進行特別的篩選去除.細胞DNA合成一般有兩條途徑.主途徑是由糖和氨基酸合成核苷酸,進而合成DNA,葉酸作為重要的輔酶參與這一合成過程.另一輔助途徑是在次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情況下,經次黃嘌呤磷酸核糖轉化酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）的催化作用合成DNA.細胞融合的選擇培養基中有三種關鍵成分：次黃嘌呤（hypoxanthine,H）、氨甲蝶呤（aminopterin,A）和胸腺嘧啶核苷（thymidine,T）,所以取三者的字頭稱為HAT培養基.氨甲蝶呤是葉酸的拮抗劑,可阻斷瘤細胞利用正常途徑合......閱讀全文
3.2 免 疫 B 細胞的制備血清效價有意義(>1 : 1000)的免疫后動物可以提供抗原反應性B 細胞用于融合。這些細胞可以從脾臟或淋巴結中獲得。動物用吸人CO2 處死，在無菌操作下取組織，放 在 4°C無血清培養基中，最多可放lh 。用懾子或針頭輕輕打開組織脾臟或淋巴結的外包膜獲得
1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。 制備單克隆抗體包括動物免疫
單克隆抗體的制備實驗可以用于：（1）將產生抗體的單個B淋巴細胞同骨髓腫瘤細胞雜交， 獲得既能產生抗體， 又能無限增殖的雜種細胞，并以此生產抗體；（2）該技術是僅由一種類型的細胞制造出來的抗體，對應于多克隆抗體、多株抗體——由多種類型的細胞制造出來的一種抗體。實驗方法原理單克隆抗體技術(monoclo
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術 實驗方法原理 1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨
實驗方法原理1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。 制備單
實驗方法原理 1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤
3 免疫策略不同實驗室使用的免疫策略是不同的，很多免疫策略都同樣有效。 目的是擴大宿主體內抗原反應性 B 細胞的數量。體內每次接觸到蛋白質抗原，都會增加抗原反應性B 細胞的數量。在對抗原的再次應答中，產生的抗體量會增加，總的免疫球蛋白類別會從以IgM 為主轉變為以IgG 為主，特異性抗體
一、雜交瘤技術的誕生 淋巴細胞雜交瘤技術的誕生是幾十年來免疫學在理論和技術兩方面發展的必然結果，抗體生成的克隆選擇學說、抗體基因的研究、抗體結構與生物合成以及其多樣性產生機制的揭示等，為雜交瘤技術提供了必要理論基礎，同時，骨髓瘤細胞的體外培養、細胞融合與雜交細胞的篩選等提供了技術貯備。19
（二）細胞融合 1．細胞融合前準備 （1）骨髓瘤細胞系的選擇：骨髓瘤細胞應和免疫動物屬于同一品系，這樣雜交融合率高，也便于接種雜交瘤在同一品系小鼠腹腔內產生大量McAb。常用的骨髓瘤細胞系見表2-4。表2-4用于融合試驗的主要骨髓瘤細胞系名 稱來 源耐 受 藥 物Ig鏈H LP3/X63-Ag
檢測抗體的方法應根據抗原的性質、抗體的類型不同，選擇不同的篩選方法，一般以快速、簡便、特異、敏感的方法為原則。 常用的方法有: 1. ELISA用于可溶性抗原蛋白質、細胞和病毒等McAb的檢測。 2. RIA用于可溶性抗原、細胞McAb的檢測。 3. FACS熒光激活細胞分類儀用于檢查細胞
1986年，美國FDA批準了第一個單克隆抗體藥物上市，距今已快30年。目前，全世界共有超過40個治療用抗體藥物被批準上市，每年實現超過600億美元的銷售額。在國際及國內形成了抗體藥物開發熱潮。巨大的市場前景和現存的技術問題及壁壘并存的現實不可避免地引發抗體藥物新一輪技術革命。而其結果又將毫無疑問地改
免疫動物 （1）抗原：免疫動物是制備抗血清的第—步。免疫所用的抗原可用病毒、細菌或者其他蛋白質抗原，如果使用半抗原如小分子激素等，必須與大分子載體連接。抗原的用量視抗原種類及動物而異，—次注射小鼠可以少至幾個微克，免、羊甚至更大的動物每次注射的量就相應增加，從幾百μg/次至幾mg/次。 〔2
骨髓瘤細胞的培養可用一般的培養液，如RPMI1640，DMEM培養基。小牛血清的濃度一般在10%～20%，細胞濃度以104～5×105/ml為宜，最大濃度不得超過106/ml。當細胞處于對數生長的中期時，可按1：3～1：10的比例傳代。每3～5天傳代一次。細胞在傳代過程中，部分細胞可能有返祖現象，
獲得穩定的雜交瘤細胞系后，即可根據需要大量生產單抗，以用于不同目的。 一、單抗的大規模制備 目前大量制備單抗的方法主要有兩大系統，一是動物體內生產法，這是國內外實驗室所廣泛采用；另一是體外培養法。 1、動物體內生產單抗的方法 迄今為止，通常情況下均采用動物體內
1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。 制備單克隆抗體包括動物免疫
單克隆是指利用在細胞融合基礎上的B細胞雜交瘤技術。 雜交瘤技術的基本原理是通過融合兩種細胞而同時保持兩者的主要特征。這兩種細胞分別是經抗原免疫的小鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞。被特異性抗原免疫的小鼠脾細胞（B淋巴細胞）的
單克隆抗體(MAb)是針專一的抗原決定簇產生的抗體，單克隆技術又名雜交瘤技術起源于1975年，由G.K?hler和Milstein創立。主要原理是利用產生抗體的B細胞與腫瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞，生產抗體。單克隆抗體制備過程有以下幾個步驟，下面講簡要介紹。1、免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠
2. HAT選擇雜交瘤 一般在融合24 小時后，加HAT選擇培養液。HT和HAT均有商品化試劑50×貯存，用時1 ml加入50 ml20 ％小牛血清完全培養液中。 因為在培養板內已加入飼養細胞、融合后的細胞，200 μl/孔。所以在加選擇培養液時應加3倍量的HAT。我
單克隆抗體自問世以來，以其特有的高度專一性迅速占領醫學的多個領域，在蛋白親和純化、醫學診斷、腫瘤導向治療以及放射性免疫成像技術方面發揮著重要的作用，因此單克隆抗體的制備技術之一——雜交瘤技術也越來越重要。雜交瘤技術是指將骨髓瘤細胞和免疫淋巴細胞融合，形成能分泌高度純一單克隆抗體的雜交瘤細胞的技術。可
（1） 有限稀釋法 材料： a、96孔細胞培養板等； b、HT培養基； c、活力強的雜交瘤細胞； d、小鼠腹腔細胞。 方法： a、制備小鼠腹腔細胞。同“細胞融合”一節中的方法。 b、制備待克隆的雜交瘤細胞懸液
（2）雜交瘤細胞的復蘇 雜交瘤細胞、骨髓瘤細胞或其他細胞在液氮中保存，若無意外情況時，可保存數年至數十年。復蘇時融解細胞速度要快，使之迅速通過最易受損的 -5℃?0℃，以防細胞內形成冰晶引起細胞死亡。 通常情況下，凍存時細胞數量多，生長狀態好的雜交瘤細胞系以及其他細胞的復蘇可采用
抗體的概念 動物機體受到抗原物質的刺激后, 由B淋巴細胞轉化為漿細胞產生的, 能與相應抗原發生特異性結合反應的免疫球蛋白, 這類免疫球蛋白稱為抗體(Antibody,簡稱 Ab)。 免疫球蛋白 免疫球蛋白(Immunogolobulin, 簡稱Ig) 是指存在于人和動物血液(
4）飼養細胞（Feeder cells）的制備 在細胞融合后選擇性培養過程中，由于大量骨髓瘤細胞和脾細胞相繼死亡，此時單個或少數分散的雜交瘤細胞多半不易存活，通常必須加入其他活細胞使之繁殖，這種被加入的活細胞稱為飼養細胞。飼養細胞促進其他細胞增殖的機制尚不明了，一般認為它們可能釋放非種屬特
實驗步驟 附 加 材 料（其他材料見基本方案 2)候 選 雜 交 瘤 系（見輔助方案 2)克隆和擴增用培養基（見輔助方案 4)微 孔 板 觀 察 鏡（由 Flow 實驗室或 Dynatech 公司提供），可選的1.重懸候選雜交瘤所在孔中的細胞（見 輔 助 方 案 2 , 步 驟 4)，用血
細胞雜交瘤技術 雜交瘤技術 雜交瘤技術是1975年Kohler和Milstein用于制備單克隆抗體而創建的一項重要技術，被譽為“免疫學上的一次革命”。此技術被廣泛用于各種單克隆抗體的制備。抗體是由B淋巴細胞分泌的，一個B淋巴細胞只能分泌一種抗體。把B淋巴細胞和骨髓細胞融合，即可形
20世紀90年代末，治療藥物主要由小分子化藥主導。而在近幾十年里，人類生命健康領域基于抗體藥物療法的使用呈現了指數級增長，并成為了治療藥物的一大組成部分。抗體已被證明在治療包括癌癥、自身免疫、傳染病甚至神經退行性疾病在內的多種疾病方面具有廣泛的用途[1]。FDA僅在2018年就批準了59款新藥，
β-內酰胺酶單克隆抗體和多克隆抗體的制備 目前，在我國奶牛養殖業中，青霉素和頭孢菌素等β-內酰胺類抗生素對奶牛乳房炎等疾病的控制起著十分重要的作用。由于一些奶牛養殖商戶濫用抗生素以及未嚴格遵守休藥期，致使牛奶中抗生素殘留超標，乳中殘留的抗生素嚴重危害食品安全和人體健康。我國政府對超過一定限
實驗步驟 一、多羥基反應單克隆抗體 我們最先使用了一類特殊的單克隆抗體, 并將其用于免疫親和層析。這些抗體可以用于溫和的免疫親和層析, 因為洗脫條件只需要聯合使用無離液鹽和低分子質量的多羥基化合物 (多元醇），此條件下蛋白質呈非
ClonePix結合CloneSelect Imager技術加強開發病毒特異性的雜交瘤細胞ClonePix結合CloneSelect Imager技術加強開發 病毒特異性的雜交瘤細胞 雙鏈DNA病毒引起人類大多數疾病。皰疹病毒和腺病毒
（4）融合 ①將骨髓瘤細胞與脾細胞按1：10或1：5的比例混合在一起，在50ml離心管中用無血清不完全培養液洗1次，離心，1200rpm,8min;棄上清，用吸管吸凈殘留液體，以免影響聚乙二醇（PEG）濃度。輕輕彈擊離心管底，使細胞沉淀略松動。 ②90s內加入37℃預溫的