細胞器分離和細胞脫核技術
一、破碎細胞的方法 1.桿狀玻璃勻漿器法 ?該勻漿器由一根端部表面磨砂的玻璃桿和一個內壁磨砂的玻璃套管組成。使用時，先用鋒利的刀片把組織塊切碎，然后把碎塊加入套管中，用力使玻桿移動使組織細胞破碎。 2.高速組織搗碎機法 ?使用時將4℃預冷的組織碎塊或細胞懸液加入搗碎機的梅花玻璃杯中，至杯體積的1/3即可蓋好玻璃杯蓋，固定好帶桿葉片刀，緩慢調整旋轉速度，一般開機數十秒后，組織細胞即可被高速旋轉的葉片刀破碎。但不宜時間過長，以防高速旋轉產生熱而導致分離物中的活性物降解，用冷卻水降溫更好。 3.超聲波處理法 ?超聲波發生器能產生高強度的超聲信號，經換能器傳送至與之接觸的溶液中，由聲波形成沖擊和振動而產生剪力，致使細胞破碎，動物組織肝、腎、胸腺、淋巴結、腹水細胞、紅細胞、體外培養的細胞均可在短時間內破碎，因超聲時可產熱，應注意冰浴冷卻，生物大分子如核酸和酶對超聲敏感，一般不宜采用 4.化學裂......閱讀全文
細胞器分離和細胞脫核技術
一、破碎細胞的方法 1.桿狀玻璃勻漿器法 ?該勻漿器由一根端部表面磨砂的玻璃桿和一個內壁磨砂的玻璃套管組成。使用時，先用鋒利的刀片把組織塊切碎，然后把碎塊加入套管中，用力使玻桿移動使組織細胞破碎。 2.高速組織搗碎機法 ?使用時將4℃預冷的組織碎塊或細胞懸液加入搗碎機的梅
細胞組分和細胞器——細胞器分離
Labeling Microtubules?(Molecular Dynamics Inc.??)Microtubules are involved in many aspects of cell motion including propulsion, mitosis, growth, and o
細胞器分離原理
細胞器的分離,一般采用差速離心法,此法是利用細胞各組分質量大小不同,在離心管不同區域沉降的原理,分離出所需組分,分離得到的細胞器,其純度可采用電子顯微鏡法、免疫學法或測定標志酶活力法進行鑒定.細胞器（organelle）一般認為是散布在細胞質內具有一定形態和功能的微結構或微器官。但對于“細胞器”這一
單個核細胞的分離
實驗概要外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)主要指淋巴細胞和單核細胞，是免疫學實驗最常用的細胞，也是進行T細胞和B細胞分離純化的重要環節。本實驗介紹了兩種單個核細胞的分離方法。實驗原理PBMC的密度與血液中的其他成分不同。紅細胞和粒細胞的密
如何分離各種各樣的細胞器
細胞器的分離主要用到的是離心技術。主要用到：（一）、差速離心在密度均一的介質中由低速到高速逐級離心，用于分離不同大小的細胞和細胞器。在差速離心中細胞器沉降的順序依次為：核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內質網與高基體、最后為核蛋白體。由于各種細胞器在大小和密度上相互重疊，而且某些慢沉降顆粒常常被快沉
細胞、細胞器及組分的分離與觀察1
葉綠體的分離與熒光觀察一、實驗目的了解葉綠體分離的一般原理和方法,并熟悉應用熒光顯微鏡方法觀察葉綠體熒光現象。二、實驗原理葉綠體是植物細胞中較大的一種細胞器,能發生特有的能量轉換。利用低速離心機可以分離葉綠體,其分離在等滲溶液（0.35mol/L氯化鈉或0.4mol/L蔗糖溶液）中進行,目的是為了防
細胞、細胞器及組分的分離與觀察2
細胞器標記酶的測定是評價細胞器內膜組分和分離純度的主要依據,如線粒體內膜上分布有細胞色素氧化酶,該酶使詹納斯綠B染料保持在氧化狀態呈現藍綠色,從而使線粒體顯色,而胞質中的染料被還原成無色。詹納斯綠B是一種活體染料,能對動植物的細胞或組織在活體狀態下進行無毒害的染色。由于染料（堿性染料）的膠粒表面帶有
用淋巴細胞分離液分離單個核細胞
用淋巴細胞分離液分離單個核細胞1）分離外周血中的單個核細胞（PBMC）1．抽取正常人靜脈血加到肝素抗凝管中，加等量含5～10IU/ml肝素的無血清緩沖液懸浮細胞。將細胞懸液小心加在與血液等量的淋巴細胞分離液上，室溫中，水平離心500×g 20分鐘。此時離心管中形成5層：最上面是血漿，血漿層和淋巴細胞
鼠肝細胞器的超速分離方法舉例
Ⅰ.前處理：鼠肝勻漿，臺式離心機1,000xg，10分，取上清，沉淀稀釋后再1,000xg，10分，取上清，再重復一次取上清，三次上清液合并用于超速離心。Ⅱ. 密度梯度離心：日立超速離心機（各種型號）轉頭：P45AT（6×94ml，實際容量85ml）不連續蔗糖梯度：10％，20％，30％，40％，5
差速離心法分離各種細胞器的原理
解析： 差速離心是指低速與高速離心交替進行，使各種沉降系數（不同的細胞器有不同的沉降系數）不同的顆粒先后沉淀下來，達到分離的目的。沉降系數差別在一個或幾個數量級的顆粒，可以用此法分離。樣品離心時，在同一離心條件下，沉降速度不同，通過不斷增加相對離心力，使一個非均勻混合液內的大小、形狀不同的粒子分部沉
細胞核的預先分離
實驗材料細胞試劑、試劑盒PBSRSB 緩沖液儀器、耗材醫用臺式離心機Dounce 勻漿器實驗步驟1. 在 4℃ 用 PBS 清洗細胞，用一醫用臺式離心機低速離心。然后用含 Tween 40 和 DOC 的 RSB 緩沖液懸浮沉淀。每 107?個細胞用 1 ml 緩沖液。用 0.002 英寸間隙的 D
如何分離外周血單個核細胞
外周血單個核細胞即外周血中具有單個核的細胞，包括淋巴細胞和單核細胞。體外檢測淋巴細胞首先要分離外周血單個核細胞，目前主要的分離方法是Ficoll-hypaque（葡聚糖－泛影葡胺）密度梯度離心法，因為血液中各有形成分的比重存在差異最多12天，但需要刺激。 PBMC（外周血單個核細胞）是原代細胞，單純
人單個核細胞的分離
實驗概要人單個核細胞的分離主要試劑DPBS、0.5%甲基纖維素、人淋巴細胞分離液、人HSCs培養液主要設備離心機，超凈臺，體視鏡，倒置顯微鏡，96孔培養板，T75培養瓶，25mL/10mL/5mL移液管實驗材料臍帶血100 mL，取自醫院，并和產婦簽知情同意書實驗步驟（1）用血袋從醫院取臍帶血100
單個核細胞的分離純化
外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）主要指淋巴細胞和單核細胞，是免疫學實驗最常用的細胞，也是進行T細胞和B細胞分離純化的重要環節。1．原理PBMC的密度與血液中的其他成分不同。紅細胞和粒細胞的密度較大，為1.092左右；淋巴細胞和單核細胞的
如何用淋巴細胞分離液分離單個核細胞？
淋巴細胞分離液可用于體外分離外周淋巴血細胞，也可以從其他來源中分離單核細胞，包括臍帶血細胞和骨髓細胞，適用于從血液及組織勻漿中分離所需細胞，在醫療和醫學生物中廣泛應用。其他人及動物多種比重細胞分離液。 如何用淋巴細胞分離液分離單個核細胞？ 1）分離外周血中的單個核細胞 1．抽取正常人靜脈血加
從單個核細胞中分離T細胞
從單個核細胞中分離T細胞1）用玫瑰花結形成試驗分離E＋細胞1．制備AET-綿羊紅細胞1）在刻度離心管中，用無菌的含5％小牛血清的Hanks液洗滌綿羊紅細胞3次，每次離心500×g 10分鐘。2）吸凈上清液，測量紅細胞比容。輕擊試管分散紅細胞，加入4倍紅細胞比容量、新鮮制備的AET溶液，混勻。室溫中反
單抗制備、血細胞純化、細胞器分離的離心條件選擇
通用離心機在各行業應用得非常廣泛。目前在科研單位應用比較多的離心機產品有高速離心機、血液離心機、細胞離心機等，種類繁多，功能也不盡相同。不同試驗需要不同的離心條件，經常需要對細胞懸液離心，以增加細胞濃度或洗除有關試劑，可調節的臺式離心機就能滿足大多試驗的需求，那么本文簡單介紹一下在單抗制備、血細胞純
外周血單個核細胞怎么進行分離？
外周血中單個核細胞(淋巴細胞和單核細胞)的比重介于1.075～1.090 之間，紅細胞及粒細胞在1.092左右，血小板在1.030～1.035之間，因而可利用一種比重介于1.075～1.092之間而近于等滲的溶液作密度梯度離心，使一定比重的細胞按相應密度梯度分布而加以分離。對分離介質的基本要
分離人腸黏膜單個核細胞
實驗步驟基 本 方案 離 人 腸 黏 膜 單 個 核 細 胞材 料新鮮的大腸或小腸樣本，外科手術后分離獲得H B S S ，不含鈣和鎂， p H 7. 2D T T - H B S S 溶液： 75m g D T T 溶于 50 ml H B S S ，新鮮配制E D T A - H B S S 溶
小鼠單個核細胞的分離實驗
實驗步驟基 本 方 案 從 脾 臟 、胸腺和淋巴結制備細胞懸液材 料RPMI-5 或 DMEM-5 完全培養基新鮮分離的小鼠器官： < 6 周齡的小鼠胸腺； 6 周 至 6 個月齡的小鼠脾臟和淋巴結60 mmX 15 mm 培養皿剪 刀 和 鑷 子（保 存 在 7 0 % 乙醇的燒杯中）裝 有 19
小鼠單個核細胞的分離實驗
基 本 方 案 從 脾 臟 、胸腺和淋巴結制備細胞懸液材 料RPMI-5 或 DMEM-5 完全培養基新鮮分離的小鼠器官： < 6 周齡的小鼠胸腺； 6 周 至 6 個月齡的小鼠脾臟和淋巴結60 mmX 15 mm 培養皿剪 刀 和 鑷 子（保 存 在 7 0 % 乙醇的燒杯中）裝 有 19 G 針
外周血單個核細胞分離的原理
外周血單個核細胞包括淋巴細胞和單核細胞，其比重為1.070左右，而紅細胞和多核白細胞的比重超過1.080。這樣利用介于兩者比重之間的溶液(稱為分層液)做密度梯度離心，就可得到單個核細胞。最常用的分層液為聚蔗糖和泛影酸鈉混合比重為1.070±0.001的溶液，國內常用泛影葡胺代替泛影酸鈉。
外周血單個核細胞的分離實驗
實驗方法原理體外測定免疫細胞的數量和功能常需將某種免疫細胞首先分離出來。本實驗是采用密度梯度離心法分離單個核細胞（mononuclear cell）。單個核細胞包括淋巴細胞和單核細胞（monocyte）。 血液中各種細胞的大小和比重不同，因此，可用不同比重（密度）的分離液使不同比重的細胞在離心沉降過
外周血單個核細胞的分離實驗
實驗方法原理 體外測定免疫細胞的數量和功能常需將某種免疫細胞首先分離出來。本實驗是采用密度梯度離心法分離單個核細胞（mononuclear cell）。單個核細胞包括淋巴細胞和單核細胞（monocyte）。 血液中各種細胞的大小和比重不同，因此，可用不同比重（密度）的分離液使不同比重的細胞在
特定細胞類型標記的細胞核分離
從大量的植物或動物組織中分離出特異性的細胞類型是費力和棘手的。為了研究表觀遺傳學上的改變和在不同細胞系中不同表達的基因，如癌細胞與正常細胞，或者擬南芥中兩種類型的表皮細胞(epidermal cell)，人們通常必須采用激光捕獲顯微切割(laser capture microdissection,
密度梯度分離法分離單個核細胞（MNCs）
試劑和材料：1. 合適的培養基或冷凍液；2. PBSA；3. Ficoll-Hypague；4. 巴氏吸管；5. 50ml離心管；實驗方法：1. 將臍血樣品用PBSA按1：1比例稀釋；2. 將15ml Ficoll-Hypague吸入50ml離心管；3. 將30mlPBSA稀釋的臍血樣品緩慢地加到F
脫核的概念和方法
又稱脫核。是指人工將核從細胞中除去。（1）利用離心力使海膽卵的核或變形蟲的核靠向一邊，然后把細胞從中心部切成兩段，再用微量吸管將核吸出；（2）用紫外線或射線照射核的部位，把核殺死；（3）對于傘藻（Acet－alularia）那種的大形細胞，因核位于細胞的一端，所以可把核所在的那一端的細胞部分切去。去
細胞核的分級分離實驗
實驗材料小白鼠試劑、試劑盒蔗糖氯化鈣溶液甲苯胺蘭染液詹納斯綠B染液NaCl溶液儀器、耗材玻璃勻漿器離心機天平光學顯微鏡載玻片蓋玻片離心管滴管量筒燒杯玻璃漏斗解剖剪鑷子實驗步驟1. ?用頸椎脫位的方法處死小白鼠后，迅速剖開腹部取出肝臟，剪成小塊（去除結締組織）盡快置于盛有0.9%NaCl的燒杯中，反復
細胞核的分級分離實驗
實驗材料小白鼠 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒蔗糖 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?氯化鈣溶液 ? ? ?
細胞核的分級分離實驗
實驗材料 小白鼠試劑、試劑盒 蔗糖氯化鈣溶液甲苯胺蘭染液詹納斯綠B染液NaCl溶液儀器、耗材 玻璃勻漿器離心機天平光學顯微鏡載玻片蓋玻片離心管滴管量筒燒杯玻璃漏斗解剖剪鑷子實驗步驟 1. ?用頸椎脫位的方法處死小白鼠后，迅速剖開腹部取出肝臟，剪成小塊（去除結締組織）盡快置于盛有0.9%NaCl的燒杯