RNA抽提經驗
對大部分實驗人員來說，RNA 抽提比基因組 DNA 抽提要困難得多。事實上，現有的 RNA 抽提方法/試劑，如果用于從培養細胞中抽提 RNA，比抽提基因組 DNA 更方便，成功率也更高。那為什么同樣的方法用于組織 RNA 的抽提，總會碰到問題呢？ 組織 RNA 抽提失敗的兩大現象是： RNA 降解和組織內雜質的殘留。關于降解問題，首先看一下為什么從培養細胞中抽提 RNA 不容易降解。現有的 RNA 抽提試劑，都含有快速抑制 Rnase 的成分。在培養細胞中加入裂解液，簡單的混勻，即可使所有的細胞與裂解液充分混勻，細胞被徹底裂解。細胞被裂解后，裂解液中的有效成分立即抑制住細胞內的 Rnase，所以 RNA 得以保持完整。也就是說，培養細胞由于很容易迅速與裂解液充分接觸，所以其 RNA 不容易被降解；反過來講，組織中的 RNA 之所以容易被降解，是因為組織中的細胞不容易迅速與裂解液充分接觸所致。因此，......閱讀全文
RNA抽提經驗
對大部分實驗人員來說，RNA 抽提比基因組 DNA 抽提要困難得多。事實上，現有的 RNA 抽提方法/試劑，如果用于從培養細胞中抽提 RNA，比抽提基因組 DNA 更方便，成功率也更高。那為什么同樣的方法用于組織 RNA 的抽提，總會碰到問題呢？ ?組織 RNA 抽提失敗的兩大現象是：
血與淚的RNA抽提抽提經驗
對大部分實驗人員來說，RNA 抽提比基因組 DNA 抽提要困難得多。事實上，現有的 RNA 抽提方法/試劑，如果用于從培養細胞中抽提 RNA，比抽提基因組 DNA 更方便，成功率也更高。那為什么同樣的方法用于組織 RNA 的抽提，總會碰到問題呢？組織 RNA 抽提失敗的兩大現象是： RNA 降解和組
RNA抽提－成功經驗法則
本期專文要來跟大家討論的話題是核糖核酸(RNA)的萃取，看到這里各位心中可能已經起了疑問: RNA 萃取不是很簡單嗎?只要照著標準步驟操作，加一加試劑就完成了，有必要大費周章特地開篇幅來談這件事嗎?其實越簡單的東西遇到困難時就越難解，各位看倌就請耐著性子，聽我們娓娓道來。Lab 的經驗和客戶
RNA抽提－成功經驗法則大公開!
本期專文要來跟大家討論的話題是核糖核酸(RNA)的萃取，看到這里各位心中可能已經起了疑問: RNA 萃取不是很簡單嗎?只要照著標準步驟操作，加一加試劑就完成了，有必要大費周章特地開篇幅來談這件事嗎?其實越簡單的東西遇到困難時就越難解，各位看倌就請耐著性子，聽我們娓娓道來。 Lab 的經驗和
RNA抽提注意事項和經驗指南4
經典抽提小技巧 1： Phenol 純化：將等體積的 1:1 Phenol/Chloroform 加入，劇烈混允 1-2 分鐘。高速離心 2 分鐘。小心取上清 (80-90%)。決不能取到中間層。可以使用等體積的反應液加入 Phenol/Chloroform 中，同樣再取出上清。將兩次的上清
RNA抽提注意事項和經驗指南2
3：裂解液的選擇 – 影響操作方便程度，內源雜質殘留的因素常用的裂解液幾乎都能抑制 Rnase 活性，因此，選擇裂解液的重點是要結合純化方法一起考慮。只有一個例外：高內源酶含量的樣品建議使用含苯酚的裂解液，以增加滅活內源酶的能力。 4：純化方法的選擇 – 影響內源雜質殘留。抽提速度的因素對于干凈的樣
RNA抽提注意事項和經驗指南1
背景介紹實驗前方法/試劑的選擇問題解答 (外源性污染導致的問題不在本解答考慮中)RNA 抽提的“三大紀律八項注意”Rnase 污染的10大來源RNase 和 DEPC 處理RNA 抽提的10大竅門提高 RNA 得率經典抽提小技巧特殊組織的抽提樣品凍融的影響RNA 質量的判斷RNAguard：使降解成
RNA抽提注意事項和經驗指南1
背景介紹實驗前方法/試劑的選擇問題解答 (外源性污染導致的問題不在本解答考慮中)RNA 抽提的“三大紀律八項注意”Rnase 污染的10大來源RNase 和 DEPC 處理RNA 抽提的10大竅門提高 RNA 得率經典抽提小技巧特殊組織的抽提樣品凍融的影響RNA 質量的判斷RNAguard：使降解成
RNA抽提注意事項和經驗指南3
RNA 抽提的“三大紀律八項注意” 紀律一：杜絕外源酶的污染。注意一：嚴格戴好口罩，手套。注意二：實驗所涉及的離心管，Tip 頭，移液器桿，電泳槽，實驗臺面等要徹底處理。注意三：實驗所涉及的試劑/溶液，尤其是水，必須確保 RNase-Free。紀律二：阻止內源酶的活性注意四：選擇合適的勻漿方法。注意
核酸抽提經驗及原理
1、核酸抽提原理?簡單地講，核酸抽提包含樣品的裂解和純化兩大步驟。裂解是使樣品中的核酸游離在裂解體系中的過程，純化則是使核酸與裂解體系中的其它成分，如蛋白質、鹽及其它雜質徹底分離的過程。 經典的裂解液幾乎都含有去污劑 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等) 和鹽
RNA抽提指南(TRIZOL法)
RNA抽提指南(TRIZOL法)注意事項：* 全程佩戴一次性手套。皮膚經常帶有細菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成為RNA酶的來源。培養良好的微生物實驗操作習慣預防微生物污染。* 使用滅菌的，一次性的塑料器皿和自動吸管抽提RNA，避免使用公共儀器所導致的RNA酶交叉污染。例如，使用RNA探針的實驗室
RNA抽提和標記實驗
實驗方法原理 實驗材料 從組織培養收獲的細胞在組織培養中的細胞凍存的整個組織試劑、試劑盒 磷酸鹽緩沖液（PBS）TRIzol 試劑乙醇乙酸鈉EDTA NaOHTris-ClTE 緩沖液固定化的 oligo-dT 引物儀器、耗材 組織勻漿器熱循環儀熒光掃描儀實驗步驟 實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材
RNA抽提和標記實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 從組織培養收獲的細胞 在組織培養中的細胞 凍存的整個組織
RNA抽提和標記實驗
實驗材料從組織培養收獲的細胞在組織培養中的細胞凍存的整個組織試劑、試劑盒磷酸鹽緩沖液（PBS）TRIzol 試劑乙醇乙酸鈉EDTANaOHTris-ClTE 緩沖液固定化的 oligo-dT 引物儀器、耗材組織勻漿器熱循環儀熒光掃描儀實驗步驟實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材」具體見「其他」1a.
微量RNA的抽提RNeasy－MinElute－Spin－Column
·為了更好地裂解，細胞數不能大于5×105，細胞過多會減低產率和純度。 準備工作： 1.在 24 ml 96－100％乙醇 中加入 6 ml 去RNA酶的水。 2.在每 1 ml Buffer RLT 中加入10 ml β-ME (加入β-ME的Buffer RLT可在室溫下放置1
基本方案2－RNA－抽提和標記
試劑、試劑盒TRIzol 試劑PBS氣仿乙醇乙酸鈉引物Superscript Ⅱ RNase H反轉錄酶10 X low-T dNTP 混合物EDTATE 緩沖液儀器、耗材RNeasy Maxi 試劑盒組織勻漿機圓底離心管圓錐底離心管水平離心機薄壁 PCR 管熱循環儀熒光掃描儀實驗步驟展
哺乳動物組織樣品RNA的抽提
哺乳動物組織樣品RNA的抽提最基本的要素是防止RNA在抽提過程中降解，以及盡可能得到最高的RNA抽提效率。以下介紹我們實驗室認為最符合以上兩個要素的抽提方法。一、實驗材料：Trizol試劑（Invitrogen公司）研缽，勻漿器，鑷子，鋁箔都高溫滅菌即可；二、具體過程：1、樣品在離體后應迅速冷凍在液
樣本抽提中RNA降解的解決方法
從臨床樣本出發進行芯片、測序等高通量生物學研究是最常用的思路，但樣本采集過程受制于病理特征、病例數量等因素，耗時費力。無數期盼等來了期待中的臨床樣本，做個RNA抽提還常常……降解樣本的RNA完整度低，長鏈RNA變成了短鏈，在常規的擴增過程中會發生探針檢測的目的片段的丟失，導致芯片結果的不準確。遇到R
樣本抽提中RNA降解的解決方法
從臨床樣本出發進行芯片、測序等高通量生物學研究是最常用的思路，但樣本采集過程受制于病理特征、病例數量等因素，耗時費力。無數期盼等來了期待中的臨床樣本，做個RNA抽提還常常…… 降解樣本的RNA完整度低，長鏈RNA變成了短鏈，在常規的擴增過程中會發生探針檢測的目的片段的丟失，導致芯片結果的不
DNA抽提
DNA抽提（主要內容如下）·???Working with DNA·???DNA Extraction from Bacteria and Other Organisms·???DNA Extraction from Cell and Tissue·???Mitochondria DNA Isola
核酸抽提
最糟糕的心態 - 實驗失敗了，抱怨試劑不好。實驗人員本來是應該擁有修正主義、機會主義、懷疑論等諸多“不完美的”意識，所以一定要用“完美的”自我批評意識來平衡。我為什么沒有一雙慧眼選擇可靠的供應商？我為什么不做預實驗檢測所購試劑？最糟糕的知識 - RNase A 的作用。RNase A 是內切酶，內切
核酸抽提
mRNA的分離?與rRNA和tRNA不同的是，哺乳動物細胞的絕大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纖維素親和層析法從大量的細胞RNA中分離mRNAdmonds等，1971;At Leder，1972）。在構建cDNA文庫時，?必須經上述純化步驟制
血清中－miRNA－抽提和實驗設計經驗談
人體內的血液循環系統猶如印度的圣河 – 恒河，河水中攜帶的養分滋養著古老的大地；洗滌帶走地上的ㄧ切污穢，人們的一生都在河水中完成。如此的恒河可以想象，河水中充斥著各種物質，有廢物有養分，只要你想都可以從河水中撈取。同樣的我們的循環系統如同恒河；流動的血液如同恒河水，身體所需的ㄧ切由血液運送，身體
在抽提RNA時，有色素污染，怎樣去除色
用Trizol法沉淀RNA容易有一些雜質的。部分色素是會和RNA一起沉下來。這種情況可以用75%冷的乙醇多洗幾遍。對后續qRT-PCR多數情況下沒什么影響。另外可以用硅膠柱法純化RNA，色素殘留會少一些。RNase 污染的10大來源1：手指頭 – 手指頭是外源酶的第一來源，所以必需戴手套并且頻繁更換
脂肪抽提儀開展脂肪抽提的四個步驟
脂肪抽提儀是 基于索氏抽提法原理研發生產的一款脂肪測定儀器。由于索氏抽提具有方便快捷的特點，因此脂肪抽提儀采用該原理來測定食品中的脂肪含量等，會更有優勢，應用 會更加廣泛。脂肪抽提儀的工作過程是通過在適當的溫度下試劑對樣品的浸提，最終實現目標物（如脂肪）的分離。應用脂肪抽提儀開展脂肪抽提，主要可以為
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)5
室溫下充分混勻，離心10000g×2min。取上層液置另一0.5 ml離心管中，加入100μl氯仿，混勻，離心10000g×2min。將上層液轉移至另一0.5ml 離心管中，再加入3M NaAc 10μl、預冷無水乙醇250μl，混勻后，-20OC靜置30min。4OC離心13500g×10
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)6
可能問題出在標本的保存：一般四小時之內就應處理，分離出細胞說的是套式PCR,可以在你的第一次PCR兩個引物內,再設計一對引物進行第二次PCR就行了如果你的第一次PCR剛好包括目的片段,那只好設計個更長的了第二次的引物設計要求可以低一點以50μl體系為例引物各1μl第一次PCR產物5μl二次PCR和巢
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)4
3． 由于與反義RNA探針雜交的樣品RNA僅為該RNA分子的部分片段，因此，部分降解的RNA樣品仍可進行分析。4． 步驟較少，耗時短。與Northern雜交相比，省去了轉膜和洗膜的過程。5． RNA-RNA雜交體穩定性高，無探針自身復性問題，無須封閉。6． 一個雜交體系中可同時進行多個探針雜交，無競
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)3
4. 配制的溶液應盡可能的用0.1% DEPC，在37℃處理12hr以上。然后用高壓滅菌除去殘留的DEPC。不能高壓滅菌的試劑，應當用DEPC處理過的無菌雙蒸水配制，然后經 0.22μm濾膜過濾除菌。5. 操作人員戴一次性口罩、帽子、手套，實驗過程中手套要勤換。6. 設置RNA操作專用實驗室，所有器
RTPCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)2
關于平臺期和線性期的問題，實際上線性期是指數期，只不過碰巧2的冥和2的倍數是相同的。看上去任何一個時期都可以，實際上是不對的，因為牽涉到酶促動力學的問題，這個我也不懂，有一些專門的文章，好像，涉及到很多化學的東西。我們學醫的，也沒必要知道那些，但是其中主要是因為模板引物酶原料和buffer之間的關系