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實驗材料從組織培養收獲的細胞在組織培養中的細胞凍存的整個組織試劑、試劑盒磷酸鹽緩沖液（PBS）TRIzol 試劑乙醇乙酸鈉EDTANaOHTris-ClTE 緩沖液固定化的 oligo-dT 引物儀器、耗材組織勻漿器熱循環儀熒光掃描儀實驗步驟實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材」具體見「其他」1a. 若從收獲的組織培養細胞開始：用 PBS 將細胞沉淀洗滌兩次。1b. 若從組織培養的細胞開始：每 2×107 細胞加入 1 ml TRIzol 再晃動混勻。1c. 若從組織開始：每 100 mg 冰凍組織直接加入 4 ml TRIzol，用旋轉刀片式組織勻漿器勻漿。2. 加入 1/5 體積氯仿，搖振 15 s，靜置 3 min。4℃ 12 000 g 離心 15 min。3. 將上清輕輕轉移到一個 15 ml 聚丙烯管內，記下體積。4. 邊混勻邊逐滴加入等體積的 70％ 乙醇（終濃度 35％）。5. 把從 2×107～1×10......閱讀全文
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。 3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單
RNA 足跡和修飾干擾分析（RNA footprinting and modification interference analysis）是用來研究 RNA 與蛋白質相互作用的技術。RNA 測序及其結構分析的原理是 RNA 足跡試驗的理論基礎，它們都是建立在變性、半變性或自然條件下采用堿基特異性
實驗方法原理 RNA 足跡和修飾干擾分析（RNA footprinting and modification interference analysis）是用來研究 RNA 與蛋白質相互作用的技術。RNA 測序及其結構分析的原理是 RNA 足跡試驗的理論基礎，它們都是建立在變性、半變性或
實驗方法原理 RNA 足跡和修飾干擾分析（RNA footprinting and modification interference analysis）是用來研究 RNA 與蛋
凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA）可以：（1）研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用；（2）可用于DNA定性和定量分析；（3）用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。實驗方法原理一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術最初
實驗方法原理 凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA-electrophoretic mobility shift assay）是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白，目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列
生物谷： RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。 3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存
以下問題是以Promega公司試劑盒為例。凝膠遷移實驗1)什么是凝膠遷移或電泳遷移率實驗？凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA）是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白，目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互
（1）什么是凝膠遷移或電泳遷移率實驗？凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA）是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白，目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常將純化的蛋白和細胞粗提液和32P同位素標記
凝膠遷移實驗以下問題是以Promega公司試劑盒為例。[InstallDir_ChannelDir]mob/72360.shtml1)什么是凝膠遷移或電泳遷移率實驗？凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA）是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術最初
芯片實驗操作流程包括樣本DNA或RNA制備、標記、雜交及洗滌等步驟基因芯片實驗操作流程圖 1．樣本DNA或RNA制備 芯片實驗中核酸的抽提沒有特殊之處，參照常規的分子生物學實驗手冊
（一）實驗程序如不謹慎操作，外源性RNA酶可以通過下述途徑污染RNA制品：（１）玻璃制品、塑料制品和電泳槽 滅菌的一次性使用的塑料制品基本上無RNA〈, /SPAN〉酶，可以不經預處理直接用于制備和貯存RNA。實驗室用的普通玻璃器皿和塑料制品經常有RNA酶法染，使用前必須于180℃干烤８小時或更
Stem-loop實時定量RT PCR 傳統實時定量RT PCR只能檢測到miRNA前體，而Stem-loop實時定量RT PCR技術可以解決這一問題。Stem loop實時定量RT PCR是一項高特異度、敏感度的檢測miRNA表達的實驗技術，包括設計具有莖環（stem loop）結構的
未來要解決的問題miRNAs在多個物種中廣泛被發現，而且在進化上高度保守。這些“小玩意兒”留給我們一大堆謎團：miRNA的確切功能是什么？它的目標靶是什么？作用機制是什么？也許需要對植物或者線蟲的基因組進行miRNAs突變株的篩選，在果蠅中可以用targeted-disruption缺失miRNA序
Stem-loop實時定量RT PCR傳統實時定量RT PCR只能檢測到miRNA前體，而Stem-loop實時定量RT PCR技術可以解決這一問題。Stem loop實時定量RT PCR是一項高特異度、敏感度的檢測miRNA表達的實驗技術，包括設計具有莖環（stem loop）結構的反
實驗方法原理 一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白，目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的
分子雜交技術 互補的核苷酸序列通過Walson-Crick 堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA 分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DN
Fe（II）-EDTA 能夠催化 RNA 或 DNA 的斷裂，是 RNase 保護分析的一個補充方法，其優點是很少或沒有堿基序列的特異性，其沿著整個長度的 RNA 或 DNA 鏈的剪切幾乎是一致的，它可被用于解釋一些 RNA 的較高級的折疊方式。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方
未來要解決的問題miRNAs在多個物種中廣泛被發現，而且在進化上高度保守。這些“小玩意兒”留給我們一大堆謎團：miRNA的確切功能是什么？它的目標靶是什么？作用機制是什么？也許需要對植物或者線蟲的基因組進行miRNAs突變株的篩選，在果蠅中可以用targeted- disruption缺失miR
Northwestern 篩選蛋白表達文庫的方法是通過構建 IPTG 可誘導的融合蛋白表達文庫（融合蛋白的 N 端由載體序列編碼，C 端由克隆到載體的 cDNA 文庫編碼），進而誘導融合蛋白表達，并將蛋白質固定于硝酸纖維素濾膜上，以標記的 RNA 探針進行篩選，最終獲取能與靶 RNA 分子特異性結合
為了獲得高質量的真核細胞mRNA， 必須使用RNA酶的抑制劑或采用下述的破碎細胞和滅活RNA酶同步進行的方法，最大限度地降低細胞破碎過程中所釋放的RNA酶的活性。同時，避免偶然引入實驗室內其他潛在的痕量RNA酶也很重要。下面列舉避免RNA酶法染問題的一些注意事項。大多數有經驗的研究者并不拘泥于這些注
為了獲得高質量的真核細胞mRNA， 必須使用RNA酶的抑制劑或采用下述的破碎細胞和滅活RNA酶同步進行的方法，最大限度地降低細胞破碎過程中所釋放的RNA酶的活性。同時，避免偶然引入實驗室內其他潛在的痕量RNA酶也很重要。下面列舉避免RNA酶法染問題的一些注意事項。大多數有經驗的研究者并不拘泥于這些注
實驗方法原理 在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因的表達，還有一部分則起著調控基因表達的作用。實驗材料 寡核
前接體是真核細胞核內剪接 mRNA 前體的大分子核糖核蛋白復合體，它由 5 種 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白組成，每一種 snRNP 由一個 snRNA 和幾種蛋白質構成。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理前接體是真核細胞核內剪接 mRNA 前體的大分子核糖核蛋
在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起著非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 維持著基因的表達，還有一部分則起著調控基因表達的作用。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主
實驗方法原理 在細胞中表達的 RNA 除了我們所熟悉的 mRNA 以外，還有大量不編碼蛋白質的非編碼 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非編碼 RNA 在細胞中起
生物谷： RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變
實驗材料 對數生長期的 HcLa 細胞與所使用啟動子相對的 RNA 聚合酶酵母 tRNA經超盧斷裂鮭精 DNAS1 核酸酶 KlenowDNA 聚合酶儀器、耗材 MWCO3500(1 ml cm) 透析袋Dounce 勻漿器 Gorrex 離心管15 mlFalcon 或 Corning 離心管Ec
實驗材料 對數生長期的 HcLa 細胞 與所使用啟動子相對的 RNA 聚合酶 酵母 tRNA 經超盧斷裂鮭精 DNA
實驗方法原理 前接體是真核細胞核內剪接 mRNA 前體的大分子核糖核蛋白復合體，它由 5 種 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白組成，每一種 snRNP 由一個 snRNA 和