質粒DNA的提取
實驗概要 通過本實驗學習和掌握堿裂解法提取質粒。實驗原理 堿裂解法提取質粒是根據共價閉合環狀質粒DNA與線性染色體DNA在拓撲學上的差異來分離它們。在pH值介于12.0～12.5這個狹窄的范圍內，線性的DNA雙螺旋結構解開而被變性，盡管在這樣的條件下，共價閉環質粒DNA的氫鍵會被斷裂，但兩條互補鏈彼此相互纏繞，仍會緊密地結合在一起。當加入pH4.8的乙酸鉀高鹽緩沖液恢復pH 至中性時，共價閉合環狀的質粒DNA的兩條互補鏈仍保持在一起，因此復性迅速而準確，而線性的染色體DNA的兩條互補鏈彼此已完全分開，復性就不會那木迅速而準確，它們纏繞形成網狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩定的大分子RNA，蛋白質－SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。主要試劑1． 溶液Ⅰ50 mmol/L &......閱讀全文
質粒DNA提取實驗
堿解法SDS堿裂解法（試劑盒提取）實驗方法原理堿裂解法是基于DNA的變性與復性差異而達到分離目的的。堿性使質粒DNA變性，再將pH值調至中性使其復性，復性的為質粒DNA，而染色體DNA不會復性，纏結成網狀物質，通過離心除去。實驗材料大腸桿菌 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
質粒DNA的純化
聚乙二醇沉淀法質粒DNA氯化銫-溴化乙錠梯度平衡離心法純化閉環DNA(一)聚乙二醇沉淀法提取質粒DNA1)將核酸溶液所得]轉入15mlCorex 管中，再加3ml 用冰預冷的5mol/L LiCl溶液，充分混勻，用合適轉頭于4℃下以10 000轉/分離心10分鐘。LiCl可沉淀高分子RNA。2)將上
質粒DNA的轉化
實驗概要本實驗將人Bcl-2重組質粒轉化DH5α擴增菌，轉化后在含Amp的培養基上進行篩選，生長的菌落即為含重組質粒的工程菌。含人Bcl-2重組質粒的DH5α菌用于質粒DNA的擴增，獲得的質粒將作為限制性內切酶的酶切底物DNA。實驗原理轉化是將外源DNA分子導入到受體細胞，使之獲得新的遺傳特性的一種
質粒DNA提取技術
實驗概要通過本實驗，學習和掌握堿裂解法提取質粒的方法和技術。實驗原理質粒是基因工程中常用的載體之一。質粒是染色體外小型雙鏈環狀的DNA，大小在1～200kb之間。堿裂解法提取質粒是根據共價閉合環狀DNA與線性染色體DNA在拓撲學上的差異來分離它們的。在pH值介于12.0～12.5這個狹窄的范圍內，線
質粒DNA提取實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 堿裂解法是基于DNA的變性與復性差異而達到分離目的的。堿性使質粒DNA變性，再將pH值調至中性使其復性，復性的為質粒DNA，而染色體DNA不會復性，纏結成網狀物質，通過離心除去。
質粒DNA的提取
實驗概要? ? ? ? 通過本實驗學習和掌握堿裂解法提取質粒。實驗原理? ? ? ? ?堿裂解法提取質粒是根據共價閉合環狀質粒DNA與線性染色體DNA在拓撲學上的差異來分離它們。在pH值介于12.0～12.5這個狹窄的范圍內，線性的DNA雙螺旋結構解開而被變性，盡管在這樣的條件下，共價閉環質粒DNA
質粒DNA提取實驗
實驗方法原理?質粒多為一些雙鏈、環狀的DNA分子，是獨立于細菌染色體之外進行復制和遺傳的輔助性遺傳單位。質粒是進行分子生物學實驗操作，進行遺傳工程改良物種等工作時最主要的DNA載體。?提取質粒的基本步驟分為三步：①細菌的培養和質粒的擴增②細菌菌體的裂解③質粒DNA的純化實驗材料?大腸桿菌試劑、試劑盒
質粒DNA電泳鑒定
1．目的學會常用的DNA瓊脂糖凝膠電泳。2．原理DNA雙螺旋分子骨架兩側帶有含負電荷的磷酸根，在電場中會向正極方向移動。不同長度的DNA由于受到凝膠介質的阻力不同，表現為不同的遷移率而被分開。3．器材電泳儀，水平凝膠電泳槽和梳子及其制膠模塊，250ml三角瓶，微波爐，臺式離心機，旋渦混合器，凝膠成像
質粒DNA提取時質粒為何會丟失
中穩定存在，經多次轉接后有可能造成質粒丟失。因此不要頻繁轉接，每次接種時應接種單菌落。另外，檢查篩選 用
質粒DNA的制備方法
有多種分離質粒的方法，如堿裂解法、煮沸裂解法、層析柱過濾法等。
質粒DNA的大量制備
實驗概要本方法用于從細菌中提純大量質粒DNA。主要試劑1. STE 0.1mol/L NaCl 10mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 1mmol/L EDTA(pH8.0) 2. 溶液Ｉ 50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 10mmol/L EDTA(
質粒DNA的小量制備
實驗概要本方法用于從細菌中制備提純少量質粒DNA。主要試劑1. 溶液Ｉ 50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris．Cl(pH8.0) 10mmol/LEDTA(pH8.0) 溶液Ｉ可成批配制，每瓶約100ml，在6.895×104Pa高壓下蒸氣滅菌15分鐘，貯存于4℃。2. 溶液Ⅱ 0.2
耐藥質粒DNA的轉化
實驗概要本實驗介紹了將質粒DNA分子轉入大腸桿菌的方法及如何篩選帶有質粒DNA的細胞克隆，即轉化子。實驗原理受體菌Ecoli RRI ?在低溫條件下經Ca ? 處理，可改變細胞膜的通透性，利于受體菌對DNA的攝取，這種經Ca ? 處理的細菌稱感受態菌。pBR322 ?質粒帶有氨基芐青霉素（Ap）和四
質粒DNA大量制備實驗
實驗方法原理?這一方案科能是最常用的質粒制備方法，該法不僅相當決捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。實驗材料?大腸桿菌試劑、試劑盒?葡萄糖TrisEDTATENaOHSDS異丙醇乙醇乙酸甲儀器、耗材?離心機漩渦混合器水浴鍋實驗步驟?1.? 往2 ml 燒瓶中加入500 ml ，含有適當抗生素的L
質粒－DNA－的轉化實驗
實驗方法原理 轉化活性是檢測質粒生物活性的重要指標，在基因克隆技術中，轉化（transformation）是特指以質粒 DNA 或以它為載體構建的重組質粒 DNA（包括人工染色體）導入細胞的過程， 是一種常用的基本實驗技術。 該過程的關鍵是受體細胞的遺傳學特性及其所處的生理狀態，用于轉化的受
質粒DNA大量制備實驗
堿裂解法 平衡離心法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這一方案科能是最常用的質粒制備方法，該法不僅相當決捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。
耐藥質粒－DNA轉化實驗
耐藥質粒 DNA轉化實驗 本實驗學習將質粒DNA分子轉入大腸桿菌的方法及如何篩選帶有質粒DNA的細胞克隆，即轉化子。 【原理】 受體菌Ecoli RRI 在低溫條件下經Ca++ 處理，可改變細胞膜的通透性，利于受體菌對DNA的攝取，這種經Ca++ 處理的細菌稱感受態菌。pBR322 質粒
質粒DNA是怎樣的
質粒是染色體外能夠進行自主復制的遺傳單位，包括真核生物的細胞器和細菌細胞中染色體以外的脫氧核糖核酸(DNA)分子。現在習慣上用來專指細菌、酵母菌和放線菌等生物中染色體以外的DNA分子。在基因工程中質粒常被用做基因的載體。許多細菌除了染色體外，還有大量很小的環狀DNA分子，這就是質粒(plasmid)
質粒DNA的電泳檢測
實驗概要通過本實驗學習瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的方法和技術。?實驗原理? ? ? ? ?DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電荷在電場中向正極移動。由于糖－磷酸骨架在結構上的重復性質，相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此他們能以相同的
質粒DNA提取實驗步驟
質粒DNA提取可以：(1)快速純化質粒;(2)用于測序、體外轉錄與翻譯、限制性內切酶消化、細菌轉化等分子生物學實驗。實驗方法原理質粒多為一些雙鏈、環狀的DNA分子，是獨立于細菌染色體之外進行復制和遺傳的輔助性遺傳單位。質粒是進行分子生物學實驗操作，進行遺傳工程改良物種等工作時最主要的DNA載體。
質粒DNA粘稠正常嗎
需要點樣看一下如果很粘稠但是量很少，則是蛋白質污染如果很濃，則是好的質粒。
質粒－DNA－的轉化實驗
實驗方法原理轉化活性是檢測質粒生物活性的重要指標，在基因克隆技術中，轉化（transformation）是特指以質粒 DNA 或以它為載體構建的重組質粒 DNA（包括人工染色體）導入細胞的過程， 是一種常用的基本實驗技術。 該過程的關鍵是受體細胞的遺傳學特性及其所處的生理狀態，用于轉化的受體細胞一般
堿裂解法提取質粒DNA
實驗目的 ? ? ?1、掌握最常用的提取質粒DNA的方法和檢測方法； ? ? ? 2、了解制備原理及各種試劑的作用。 ? ? ?實驗原理 堿裂解法是基于DNA的變性與復性差異而達到分離目的的。堿性使質粒DNA變性，再將pH值調至中性使其復性，復性的為質粒DNA，而染色體DNA不會復性，纏結成網狀物
質粒DNA的小量制備實驗——
實驗采用國產的質粒小量抽提試劑盒。它是一種新型的離子交換柱，在特定的條件下，使質粒能在離心過柱的瞬間，結合到質粒純化柱上，在一定條件下又能將質粒充分洗脫，從而實現質粒的快速純化。實驗材料DNA試劑、試劑盒LB培養基卵清溶菌酶異丙醇TE儀器、耗材離心機漩渦混合器水浴鍋實驗步驟一、實驗步驟1. ?接種一
質粒DNA的小量快速提取
實驗概要本實驗介紹了質粒DNA小量快速提取的基本原理及操作步驟。實驗原理在堿性條件下，染色體DNA和質粒DNA都發生變性，但質粒DNA的超螺旋共價閉合環狀結構的兩條互補鏈不會完全分離，當用酸性的高鹽緩沖液將pH中和至中性時，變性的質粒DNA又恢復到原來的構型并溶解在溶液中，而染色體DNA不能復性而形
柱離心法純化質粒DNA
實驗概要本實驗介紹了柱離心法純化質粒DNA的原理及操作流程。實驗原理1. 離心柱結構：特殊硅基質吸附材料，特異性吸附DNA，而RNA與蛋白質穿過。在正常情況下，核酸表面覆蓋了一層由水分子組成的親水薄膜，以維持其水溶性。高濃度鹽離子的加入破壞了核酸表面親水薄膜的相對有序排列，形成了疏水環境。在此環境中
質粒DNA的大量制備實驗
實驗方法原理 大量堿裂解方法不僅相當快捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。煮沸法的大量制備也簡單易行，但得到的DNA比較粗制。高純度的質粒DNA可通過氯化銫/溴化乙錠平衡離心法或層析法進一步純化粗制DNA得到。實驗材料 培養基菌株試劑、試劑盒 EDTASDS乙醇乙酸鉀異丙醇儀器、耗材 離心管實驗
質粒DNA的小量制備實驗
實驗方法原理 堿裂解法是最常用的小量制備質粒DNA的方法。實驗材料 培養基試劑、試劑盒 EDTASDS乙醇VTE儀器、耗材 平板實驗步驟 1. ?接種一個單菌落于5 ml無菌LB培養液中，在37°C培養至飽和狀態（過夜）。2. ?取1.5 ml培養液以最大轉速離心20 S。棄上清。3. ?沉淀用10
質粒DNA導入細菌細胞實驗
實驗材料 菌落質粒DNA試劑、試劑盒 CaCl2儀器、耗材 培養基平板實驗步驟 1. ?接種一個單菌落于50 ml LB培養液中，于37°C中速搖床培養過夜（250 r/min)。2. ?往一個2 L的燒瓶中加人400 ml LB培養液，再加入4 ml過夜培養液，于37°C搖床（250 r/min）
質粒DNA的小量制備實驗
實驗方法原理 當菌體在NaOH和 SDS溶液中裂解時，蛋白質與DNA發生變性，當加入中和液后，質粒DNA分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；蛋白質與染色體DNA不變性而呈絮狀，離心時可沉淀下來。堿裂解法是最常用的小量制備質粒DNA的方法。實驗材料 細菌克隆試劑、試劑盒 LB培養基抗生素葡