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實驗方法原理 主瓊脂板上和覆蓋于另一塊瓊脂板表面的硝酸纖維濾膜或尼龍膜上的細菌克隆可以被定位， 經過一段時間，已經在濾膜上生長的克隆可以被原位裂解以備雜交之用。同時，主瓊脂板可置于 4℃ 保存，直到篩選的結果出來為止。 實驗材料 E.coli 試劑、試劑盒 LB 或 SOB 瓊脂板 儀器、耗材 硝酸纖維素膜 注射器 針頭 防水黑色墨汁 木制牙簽或接種環 ......閱讀全文
檢測抗體的方法應根據抗原的性質、抗體的類型不同，選擇不同的篩選方法，一般以快速、簡便、特異、敏感的方法為原則。 常用的方法有: 1. ELISA用于可溶性抗原蛋白質、細胞和病毒等McAb的檢測。 2. RIA用于可溶性抗原、細胞McAb的檢測。 3. FACS熒光激活細胞分類儀用于檢查細胞
（一）一般光學顯微鏡術應用一般光學顯微鏡（簡稱光鏡）觀察組織切片是組織學研究的最基本方法。取動物或人體的新鮮組織塊，先用固定劑（fixative）固定（fixation），使組織中的蛋白質迅速凝固，防止細胞自溶和組織腐敗。常用的固定劑如灑精、甲醛、醋酸、苦味酸、四氧化鋨等，一般常將幾種固定劑配制成混
PCR克隆主要有TA克隆法, 限制性酶切與連接法，雜交法和近期開發出來的特異性重組法等。但因為TA克隆法操作最簡單，快速和高效的原因，成為Taq聚合酶PCR產物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen發明，并擁有全球TA Cloning商標的專利權。TA克隆方法（Original TA Cl
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展，新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展，新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
實驗方法原理 試劑、試劑盒 甲酸銨 寡核苷酸雜交溶液 寡核苷酸預雜交
實驗材料 載體和酵母菌 試劑、試劑盒 緩沖液和溶液 SD
酵母三雜交系統（yeast three-hybrid system）可用于分析蛋白質與 RNA 間的相互作用。在酵母三雜交系統中，RNA 蛋白質相互作用導致報道基因的轉錄，可以通過細胞生長、克隆顏色或特異的酶活性檢測蛋白質與 RNA 的相互作用。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方
實驗步驟 一、桿狀病毒表達載體 最簡單的經典桿狀病毒表達載體是一個重組的桿狀病毒，其基因組含有一段外源核酸序列，通常為編碼目標蛋白質的dDNA，在多角體蛋白啟動子控制下進行轉錄。這個嵌合的基因由多角體蛋白啟動子和外源蛋白編碼序列組成
本方案使用克隆在 BAC 載體上的一段 500kb 的人基因組 DNA 連續序列，直接篩選與其互補的的 cDNA。但本方法也可適用于任意大小的基因組靶 DNA。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）上冊，作者：黃培堂。試劑、試劑盒擴增緩沖液DNA 聚合酶 DNaseI限制性內切核酸酶ATP鏈霉親和素
可利用合成雙鏈寡核苷酸篩選構建于λ噬菌體的 cDNA 表達文庫，以鑒定與特異 DNA 結合蛋白質相對應的克隆（Singhetal.1988,Vinsonetal.1988)。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒ATP結合緩沖液變性溶
一、核酸提取技術的改進進行分子生物學研究的前提是取得高數量和高質量的核酸，即DNA和RNA。由于隱球菌細胞壁外有一層厚厚的莢膜，為破除真菌細胞壁造成很大困難。可靠地提取隱球菌DNA的方法建立于20世紀80年代后期，研究者先后建立了玻璃珠方法、超聲粉碎、液氮冷凍研磨等破壁技術。后來，發展酶學方法取代物
在陸地生態系統中，在土壤中生活有數量龐大的微生物種群，包括原核微生物如細菌、藍細菌、放線菌及超顯微結構微生物, 以及真核生物如真菌、藻類( 藍藻除外) 、地衣等。它們與植物和動物有著明確的分工，主要扮演“分解者”的角色，幾乎參與土壤中一切生物和生物化學反應，擔負著地球C、N、P、S 等物質循環
細菌表達系統有各種各樣的載體和宿主菌可供選擇，大部分工程菌的增殖時間短, 不僅便于快速評價實驗結果，而且降低了技術和設備無菌要求的嚴格性。經過簡單的調整, 許多在實驗室規模下具有的這些內在優點在大規模的自動生產過程中也具有 。實驗步驟一、使用大腸桿菌生產外源蛋白有越來越多的細菌表達系統可用于外源蛋白
實驗方法原理 實驗步驟 一、使用大腸桿菌生產外源蛋白 有越來越多的細菌表達系統可用于外源蛋白的生產。影
一、Southern雜交 Southern雜交可用來檢測經限制性內切酶切割后的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟: (1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶切片段,然后使DNA原位變性。 (2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。&
實驗步驟 ##一、 cDNA 宏陣列的樣品制備培養基： I : 2 (V7 V ) Gamborg B5 培 養 基（GibcoBRL， Rockville, MD), I : 1000(V /V ) Hyponex肥 料（Hypon
試劑、試劑盒 擴增緩沖液 DNA 聚合酶 DNaseI 限制性內切核酸酶 ATP 鏈霉親和素-磁珠結
4 產生RANi 的方法產生RANi 的方法主要有體外合成和體內合成siRNA 法。將siRNA 導入細胞的方法又分為微量注射法、電穿孔法、浸泡法、工程菌喂養法、轉基因法和病毒感染法等。Harborth 等[14 ]設計體外合成21nt siRNA 的方法是：在基因庫中尋找靶向基因的mRNA 序列，
原核表達系統是常被用來研究基因功能的成熟系統，由于原核表達系統具有包涵體蛋白不易純化、蛋白修飾不完整等缺陷，人們也開始利用真核細胞表達系統來研究基因。自上世紀70年代基因工程 技術誕生以來，基因表達技術已滲透到生命科學研究的各個領域。并隨著人類基因組計劃實施的進行，在技術方法上得到了很大發展，時至今
一、目的基因的獲得目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-多聚酶鏈式
一、目的基因的獲得 目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-
（二）細胞融合 1．細胞融合前準備 （1）骨髓瘤細胞系的選擇：骨髓瘤細胞應和免疫動物屬于同一品系，這樣雜交融合率高，也便于接種雜交瘤在同一品系小鼠腹腔內產生大量McAb。常用的骨髓瘤細胞系見表2-4。表2-4用于融合試驗的主要骨髓瘤細胞系名 稱來 源耐 受 藥 物Ig鏈H LP3/X63-Ag
酵母雙雜交系統的實驗步驟 1. 將報告基因p8op-LacZ轉化酵母EGY48菌株，用培養基SD/-Ura篩選。2. 同時構建DNA文庫，并純化足夠的質粒以轉化酵母細胞。3. 構建DNA-BD/靶蛋白質粒pLexA-X，作為釣餌（bait）。4. 將
本文比較分析了國內外李斯特菌的檢測方法、不同標準限量值的差異。介紹了國內外李斯特菌快速檢測技術的應用及存在的問題，對我國微生物快速檢測的現狀進行了概述，探討了李斯特菌快速檢測技術的未來發展方向，對李斯特菌檢驗方法探索及快速檢測技術的發展具有一定的借鑒意義。 李斯特菌(Listeria
基因克隆的常用方法 基因(gene)是遺傳物質的最基本單位,也是所有生命活動的基礎。不論要揭示某個基因的功能,還是要改變某個基因的功能,都必須首先將所要研究的基因克隆出來。特定基因的克隆是整個基因工程或分子生物學的起點。本文就基因克隆的幾種常用方法介紹如下。
Northwestern 篩選蛋白表達文庫的方法是通過構建 IPTG 可誘導的融合蛋白表達文庫（融合蛋白的 N 端由載體序列編碼，C 端由克隆到載體的 cDNA 文庫編碼），進而誘導融合蛋白表達，并將蛋白質固定于硝酸纖維素濾膜上，以標記的 RNA 探針進行篩選，最終獲取能與靶 RNA 分子特異性結合
實驗材料pAS38pAS45pAS47試劑、試劑盒聚乙二醇（PEG) 氯化鈉溶液HEPES 緩沖液涂布溶液Tris 緩沖鹽水TBS-Tween-20瓊脂糖-磷酸溶液儀器、耗材LBSOCYT實驗步驟3.1 實物庫構建我們用 Kunkel 突變技術構建大多數的實物庫雖然我們證明了 AB 鏈套
獨體—基于纖連蛋白類型Ⅲ結構域框架的抗體模擬 Akiko Koide and Shohei Koide
除 cDNA 微陣列外，基于尼龍膜支持物的 cDNA 宏陣列方法是又一被廣泛應用的大規模基因表達數據的收集方法。從新基因的發現到基因表達譜的分析， cDNA 宏陣列被應用于分子生物學研究領域的各個方面。盡 管 cDNA 宏陣列的點陣密度低于微陣列，但由于應用靈敏度較高的同位素標記的 cDNA 探針，