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    凝膠電泳實驗

    試劑、試劑盒 丙烯酰胺 雙丙烯酰胺儲存液過硫酸銨乙醇上樣(終止)緩沖液甲酰胺EDTA溴酚藍二甲苯腈酶和酶緩沖液PCR 產物(放射性)凝膠培養基儀器、耗材 ZapCap 過濾器108 孔深井式梳子色譜紙上樣器丙烯酸防護板膠片暗盒凝膠印跡膜蓋革計數器凝膠干燥系統膠片S2 型測序儀石蠟封口膜移液管剃須刀片試劑儲存器熱循環儀(PCR 儀)實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑40% 丙烯酰胺/雙丙烯酰胺儲存液,37.5:1(BIORAD)10% 過硫酸銨配 100 ml,然后分裝成 10 ml 小份存于-20°C。螺旋蓋硼硅酸閃爍管(screw-cap borosilicate scintillation vials) 是很好的儲存容器。乙醇,95%2X 上樣(終止)緩沖液95% 甲酰胺20 mmol/LEDTA0.05% 溴酚藍 (Sigma-AldrichB5525)0.05% 二甲苯腈(xylenecyanol)(Sigma-......閱讀全文

    電泳的原理、分類和應用

      【概述】帶電顆粒在電場作用下,向著與其電性相反的電極移動,稱為電泳(electrophoresis, EP)。利用帶電粒子在電場中移動速度不同而達到分離的技術稱為電泳技術。  1807年,由俄國莫斯科大學的斐迪南·弗雷德里克·羅伊斯(Ferdinand Frederic Reuss)最早發現。 

    常規聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗——檢測

    實驗方法原理常規聚丙烯酰胺凝膠電泳后的檢測,對于不同的目的,應采用不同的檢測方法。由于這種電泳方法不破壞蛋白質的生物活性,所以可選用的檢測方法很多。試劑、試劑盒丙烯酰胺單體貯液Tris-甘氨酸緩沖液貯液電極緩沖液樣品緩沖液過硫醆銨濃縮膠緩沖液貯液分離膠緩沖液貯液實驗步驟一、早期染色方法用染料和生物大

    EMSA實驗問題與解答

    以下問題是以Promega公司試劑盒為例。凝膠遷移實驗1)什么是凝膠遷移或電泳遷移率實驗?凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA)是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白,目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互

    等電聚焦和二維凝膠電泳實驗

    對于復雜混合物,如全細胞裂解物或富集的亞細胞組分,通過兩步正交的分離 (orthogonalseperation),二維凝膠 (2D 膠)電泳可以很好地分離成幾百個至上千個單個蛋白質。第一次分離基于電荷,即使用變性等電聚焦電泳; 第二次分離基于表觀分子質量,即使用變性十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電

    臨床蛋白電泳及進展/基本知識/概述

    分散介質中的帶電粒子在直流電場的作用下,向著與其電性相反的電極移動的現象稱為電泳(electrophoresis)。蛋白質為兩性電解質,在不同pH溶液中帶不同的電荷,從而在直流電場中能夠泳動,這就是蛋白質的電泳現象。1937年瑞典化學家Tiselius首先建立了蛋白質的界面電泳技術,并成功地將血清

    不均一核糖核蛋白復合物的制備實驗

                實驗方法原理 在核內,RNA 聚合酶 Ⅱ 的轉錄產物同大量不同類型的核前體 mRNA/mRNA 結合蛋白,不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonuc

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    分散介質中的帶電粒子在直流電場的作用下,向著與其電性相反的電極移動的現象稱為電泳(electrophoresis)。蛋白質為兩性電解質,在不同pH溶液中帶不同的電荷,從而在直流電場中能夠泳動,這就是蛋白質的電泳現象。1937年瑞典化學家Tiselius首先建立了蛋白質的界面電泳技術,并成功地將血清蛋

    等電聚焦和二維凝膠電泳實驗

    等電聚焦和二維凝膠電泳實驗             試劑、試劑盒 樣品緩沖液

    不均一核糖核蛋白復合物的制備實驗

    實驗方法原理 在核內,RNA 聚合酶 Ⅱ 的轉錄產物同大量不同類型的核前體 mRNA/mRNA 結合蛋白,不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucUoprotein,hnRNP)  結合形成 hnRNP 復合物。實驗材料 HeLa S3 細胞抗體試劑、試

    非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳

    Native-PAGE原理:非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 (Native-PAGE)是在不加入SDS 疏基乙醇等變性劑的條件下, 對保持活性的蛋白質進行聚丙烯酰胺凝膠電泳,常用于同工酶的鑒定和提純.未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝膠電泳可以使生物大分子在電泳過程中保持其天然的形狀和電荷,它們的分離

    變性梯度凝膠電泳(DGGE)

    簡  介  這個方法是應用最早也是最常用的突變篩查方法之一,在過去的十年中經歷了很大的改進,并被診斷室所廣泛使用,最近有篇關于該問題的綜述(Fodde>和 Losekoot 1994 年)。原  理  如果 DNA 雙鏈分子全長不斷增加溫度或用化學變性劑處理,兩條鏈就會開始

    分子生物學試驗方法探討:瓊脂糖凝膠電泳技術

    分子生物學試驗方法探討二-瓊脂糖凝膠電泳技術分子生物學試驗方法探討二-瓊脂糖凝膠電泳技術、瓊脂糖凝膠的特點天然瓊脂(agar)是一種多聚糖,主要由瓊脂糖(agarose,約占80%)及瓊脂膠(agaropectin)組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質,不帶電荷,而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧

    瓊脂糖凝膠電泳技術概述

    一、瓊脂糖凝膠的特點天然瓊脂(agar)是一種多聚糖,主要由瓊脂糖(agarose,約占80%)及瓊脂膠(agaropectin)組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質,不帶電荷,而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖,由于這些基團帶有電荷,在電場作用下能產生較強的電滲現象,加之硫酸根可與

    雙重PCR-毛細管電泳法快速檢測大豆中轉基因成分

    【摘要】 目的建立抗草甘膦轉基因大豆的快速檢測方法。方法:針對轉基因大豆基因組中被導入的35S啟動子、NOS終止子和CP4-EPSPS抗草甘膦基因等外源基因,自行設計了兩對引物,采用雙重PCR同時擴增上述基因,用8g/L羥丙基甲基纖維素為篩分介質,在50cm×100μm i.d.涂壁毛細管中,于一1

    蛋白質純度測定實驗

    實驗步驟在評價樣品純度之前,首先需要鑒定待測雜質的類型,如核酸、碳水化合物、脂質、無關蛋白質、同工酶類、失活蛋白質,進而確定在特定溶液條件中, 能夠區分假定雜質和目標蛋白質的理化特性 (化學分析或物理特征)。而純度則是指待測雜質含量低于某個特定水平。需要注意的是,上述說明中并沒有要求描述雜質的性質。

    蛋白質純度測定實驗

    蛋白質純度測定實驗             實驗步驟 在評價樣品

    不均一核糖核蛋白復合物的制備實驗

    在核內,RNA 聚合酶 Ⅱ 的轉錄產物同大量不同類型的核前體 mRNA/mRNA 結合蛋白,不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucUoprotein,hnRNP)  結合形成 hnRNP 復合物。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編:鄭曉飛。實驗方法

    雙重PCR-毛細管電泳法檢測大豆轉基因

                實驗方法原理 針對轉基因大豆基因組中被導入的35S啟動子、NOS終止子和CP4-EPSPS抗草甘膦基因等外源基因,自行設計了兩對引物,采用雙重PCR同時擴增上述基因,用8g/L羥丙基

    雙重PCR-毛細管電泳法檢測大豆轉基因

    雙重PCR-毛細管電泳法檢測大豆轉基因可應用于快速檢測抗草甘膦轉基因大豆。實驗方法原理針對轉基因大豆基因組中被導入的35S啟動子、NOS終止子和CP4-EPSPS抗草甘膦基因等外源基因,自行設計了兩對引物,采用雙重PCR同時擴增上述基因,用8g/L羥丙基甲基纖維素為篩分介質,在50cm×100μm

    凝膠遷移實驗(EMSA)

    實驗方法原理 凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。這一技術最初用于研究DNA結合蛋白,目前已用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列

    電泳儀的這些常識你知道嗎?

    電泳儀的這些常識你知道嗎?*節  電泳原理第二節  常用電泳方法第三節  常用電泳儀的基本結構及技術指標       第四節  常用電泳儀簡介第五節  毛細管電泳第六節  電泳儀的

    凝膠遷移實驗(EMSA)——凝膠遷移

    凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA)可以:(1)研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用;(2)可用于DNA定性和定量分析;(3)用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。實驗方法原理一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用于定性和定量分析。這一技術最初

    一種快速鑒定RNA 質量的方法

    提 要: 目的 建立一種快速鑒定RNA 完整性的方法。方法 在常規瓊脂糖凝膠電泳的基礎上,結合甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳加以改進而成。結果 提取的總RNA 用此方法電泳后可得到28S、18S、5. 8S(5S) 三條清晰的rRNA 條帶。結論 此方法可以達到對RNA 完整性進行快速鑒定的目的。

    固相化 pH 梯度雙向凝膠電泳實驗

    方案1 雙向凝膠電泳鼠肝蛋白質提取物的制備實驗 方案2 雙向凝膠電泳真核生物細胞裂解物的制備實驗 方案3 雙向凝膠電泳大腸桿菌裂解液的制備實驗 方案4 雙向凝膠電泳腦脊液蛋白樣品的制備實驗 方案5 第一向:蛋白質的等電聚焦電泳實驗

    分子生物學常用實驗技術(page 3)

    分子雜交技術    互補的核苷酸序列通過Walson-Crick 堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA 分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DN

    研究蛋白質與DNA相互作用的主要方法

    一、引言在許多的細胞生命活動中,例如DNA復制、mRNA轉錄與修飾以及病毒的感染等都涉及到DNA與蛋白質之間的相互作用的問題。重組DNA技術的發展,人們已分離到了許多重要的基因。現在的關鍵問題是需要揭示環境因子及發育信號究竟是如何控制基因的轉錄活性。為此需要:a、鑒定分析參與基因表達調控的DNA元件

    分子生物學常用實驗技術(page 1)

    第一章質粒DNA 的分離、純化和鑒定 第二章DNA 酶切及凝膠電泳 第三章大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重組質粒的連接、轉化及篩選 第六章基因組DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技術 第八章聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆 第九章分

    雙向瓊脂糖凝膠電泳實驗

    【實驗目的】了解和掌握雙向電泳技術,并學習用它來研究與DNA 復制相關的問題.【實驗原理】DNA 分子有線狀的,還有一些非線狀的,如復制叉和重組DNA 結構.雙向瓊脂糖凝膠電泳技術就是被人們開發用以研究一些非線狀DNA 分子的.雙向瓊脂糖凝膠電泳技術(2-D gel)實際上可分為兩類:中性/

    瓊脂糖凝膠的制備

    一、瓊脂糖凝膠的特點 天然瓊脂(agar)是一種多聚糖,主要由瓊脂糖(agarose,約占80%)及瓊脂膠(agaropectin)組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質,不帶電荷,而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖,由于這些基團帶有電荷,在電場作用下能產生較強的電滲現象,加之硫

    聚丙烯酰胺凝膠電泳(圓盤電泳)

    實驗概要本實驗介紹了聚丙烯酰胺凝膠電泳(圓盤電泳)的操作流程。實驗原理聚丙烯酰胺凝膠電泳是利用丙烯酰胺(acrylamide,Acr)與N,N亞甲基雙丙烯酰胺(N,Nmethylene bisacrylamide,Bis)在催化劑的作用下,聚合成大分子凝膠后,加樣,再進行電泳的一種方法。聚丙

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