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（一） cDNA序列的測定一．原理DNA 序列測定技術，目前主要是根據Sanger 等提出的酶法和Maxam和Gilber 提出的化學降解法，這兩種方法的原理大致相同。這里主要介紹Sanger 的酶法——雙脫氧鏈終止法。雙脫氧鏈終止法是Sanger 等人于1977 年建立起來的。它是利用了2'，3'-雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）可以特異地終止DNA 鏈延長這一特點進行的。在DNA 聚合酶的作用下，ddNTP 的5'三磷酸基團可以與正在合成的DNA 鏈中的3'羥基形成磷酸二酯健，當ddNTP摻入到正在合成的DNA鏈以后，由于3’端是脫氧，不能再進行鏈延長，由此即可進行DNA分析。序列分析的原料包括：待測序的DNA 膜板（或cDNA 模板）和一小段與膜板互補的DNA引物。將膜板與引物退火后分成4 個試管進行反應。每個試管中一種ddNTP（如ddATP）與其對應的dNTP(如dATP)按適......閱讀全文
在過去的幾年中，許多生物的基因組完成了測序工作，如何對如此龐大的原始序列信息進行分析和應用，正是現在最為棘手的問題。大量的基因預測軟件和在線工具應運而生。如何廣泛而深入地了解并能有的放矢地利用這些工具，已經成為21世紀分子生物學家的必修課。隨著大規模EST和cDNA序列信息的獲取，那些基于表達序列同
第二軍醫大學細胞生物學教研室；上海200433 何志穎；姚玉成（綜述）；胡以平（審校）關鍵詞：EST技術；“電子”基因克隆；生物信息學；基因摘要： 隨著人類基因組計劃的順利進行，EST技術被廣泛應用于基因識別、繪制基因表達圖譜、尋找新基因等研究領域。利用人類基因組研究不斷產生的數據，從ES
基因克隆的常用方法 基因(gene)是遺傳物質的最基本單位,也是所有生命活動的基礎。不論要揭示某個基因的功能,還是要改變某個基因的功能,都必須首先將所要研究的基因克隆出來。特定基因的克隆是整個基因工程或分子生物學的起點。本文就基因克隆的幾種常用方法介紹如下。
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下（適宜的溫室度及離子強度等）可按堿基互補原成雙鏈。雜交的
生物信息學可指利用信息技術管理和分析生物學數據。這就意味著生物信息學所涉及的范圍相當廣泛，從人工智能、機器人一直到基因組(genome)分析。就基因組分析這一角度來看，生物信息學主要是指核酸和蛋白質序列數據的計算機處理和分析。近年來，蛋白質結構數據的快速增長，使蛋白質三維結構的處理分析也歸入到生物信
3 蛋白質組學、功能基因組學與基因進化 蛋白質組學分析 北京大學朱玉賢研究組利用 2-DE、 MALDI-TOF MS 和 ESI-MS/MS 等蛋白質組學的方法研究了擬南芥中的 cp29A 和 cp29B 蛋白。cp29A 和 cp29B 是擬南芥8個葉綠體核糖核蛋白
DNA重組技術（或基因工程）是20世紀生物學的偉大成就，并已滲透到生命科學包括醫學 各個領域，為腫瘤的實驗研究和臨床診斷及治療提供了嶄新的技術和有用的工具。本附錄扼要介紹在分子腫瘤學領域中常用的分子生物學基本技術及其在腫瘤研究中的應用，著重介紹它們的原理和應用。至于具體的技術方法和操作步驟可參閱《分
基因組測序在過去的幾年中，許多生物的基因組完成了測序工作，如何對如此龐大的原始序列信息進行分析和應用，正是現在最為棘手的問題。大量的基因預測軟件和在線工具應運而生。如何廣泛而深入地了解并能有的放矢地利用這些工具，已經成為21世紀分子生物學家的必修課。隨著大規模EST和cDNA序列信息的獲取，那些基于
材料許多生物是疾病研究或探索使細胞和機體應對和存活于不同刺激下的分子適應機制的優良模型。 cDNA 文庫的構建和隨后目的基因的篩選可促使研究者發現在調節和響應某些外部特定環境壓力中有重要作用，而在其他體系中可能不表達或者不存在的新基因。確定這些新基因的可讀框，進一步分析其編碼蛋白質的功能可以開創全新
實驗步驟 一、材料 所有化學試劑均為分子生物學級純度。所用塑料和玻璃制品，包括瓶子和移液器吸頭均經高壓蒸氣滅菌。涉及核酸的操作均需帶手套。 1.總 RNA提取 （1）無 RNase 水。加 I mL 焦 炭 酸 二 乙
8 標記探針的合成9 Northern 印跡（1）10X MOPS 緩沖液： 200 mmol/L MOPS， 50 mmol/L 乙酸納， 10 mmol/L EDT A , pH 7. 0。（2）I. 25% 甲醛變性膠：將 3.75 g 瓊脂糖溶于 217 m L 雙蒸水中，加 E B 至
造礁石珊瑚為珊瑚礁生態系統中的框架生物, 研究其重要功能基因對于理解造礁石珊瑚對環境變化的響應有重要指示意義，近期來自中國科學院南海海洋研究所的研究人員提取了澄黃濱珊瑚(Porites lutea)的總RNA, 通過RT-RCR得到 cDNA, 并以 cDNA為模板設計引物進行 test
造礁石珊瑚為珊瑚礁生態系統中的框架生物, 研究其重要功能基因對于理解造礁石珊瑚對環境變化的響應有重要指示意義，近期來自中國科學院南海海洋研究所的研究人員提取了澄黃濱珊瑚(Porites lutea)的總RNA, 通過RT-RCR得到 cDNA, 并以 cDNA為模板設計引物進行 test
【實驗目的】1、 掌握已知或未知序列接受號的核酸序列檢索的基本步驟；2、 掌握使用BioEdit軟件進行核酸序列的基本分析；3、 熟悉基于核酸序列比對分析的真核基因結構分析（內含子/外顯子分析）；4、 了解基因的電子表達譜分析。【實驗原理】針對核酸序列的分析就
基因敲除可以說是基因組 學、細胞分離培養以及轉基因技術的組合。那么基因敲除的原理是什么呢？ 基因敲除的方法有哪些呢？在此，做個小結，以供大家學習。一.概述：基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子 生物學技術，是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用D
實驗方法原理針對核酸序列的分析就是在核酸序列中尋找基因，找出基因的位置和功能位點的位置，以及標記已知的序列模式等過程。在此過程中，確認一段 DNA 序列是一個基因需要有多個證據的支持。一般而言，在重復片段頻繁出現的區域里，基因編碼區和調控區不太可能出現；如果某段 DNA 片段的假想產物與某個已知的蛋
相關專題隨著ncbi 數據庫各種資源的涌現，NCBI已經成為科研工作者必不可少的資料查找，數據分析的工具。那么NCBI數據如何使用，新手入門一步一步教你認識和使用NCBI數據庫。一 綜合數據庫NCBI數據庫集美國國立生物技術信息中心(National Center for Biotechnology
結核桿菌可以導致全身性疾病，特別是在發展中國家，其發病率較高，危害性極大.近幾年結核桿菌的變異性較大，對抗癆藥物的耐藥性增加，從而使結核病的發病大幅度增高.雖然傳統的涂片抗酸染色、細菌培養以及胸片檢查對大部分結核能作出正確的診斷，但對某些病人亦可造成誤診或漏診;動物接種雖特異性較高，但因時間較長
AtlasTM cDNA表達距陣(Expression Array)同時對588種/1176種關鍵基因做全景表達圖譜分析同時對大量已知基因的表達進行大規模高通量(High-htroughput)分析檢測關鍵基因在細胞關鍵功能中的角色只需簡單的雜交步驟就在數年前，核酸矩陣技術只能在資金雄厚的大實驗室開
實驗概要植物生物學研究數據庫實驗步驟http://bioinf.scri.sari.ac.uk/cgi-bin/plant_snorna/home 英國 Top 植物種的snoRNA基因數據庫。 綜合 http://bioinformatics.psb.ugent.be/webt
常用分子生物學和細胞生物學實驗技術介紹！ 核酸分子雜交技術 由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定
在新世紀之初，由于全球人增地減、資源匱乏，人類對環境的依賴性愈來愈強烈。隨著人類的生活要求和工農業生產的迅速發展，大量人工合成的并難以被天然微生物迅速降解轉化的污染性化合物進入到自然環境中，成為嚴重威脅人類及其他生物正常生存發展的土壤污染區，污染還導致資源環境中生物重組，使物種的分布與
在新世紀之初,由于全球人增地減、資源匱乏,人類對環境的依賴性愈來愈強烈.隨著人類的生活要求和工農業生產的迅速發展,大量人工合成的并難以被天然微生物迅速降解轉化的污染性化合物進入到自然環境中,成為嚴重威脅人類及其他生物正常生存發展的土壤污染區,污染還導致資源環境中生物重組,使物種的分布與多度均發生深刻
基因的克隆就是利用體外重組技術，將特定的基因和其它DNA順序插入到載體分子中。基因克隆的主要目標是識別、分離特異基因并獲得基因的完整的全序列，確定染色體定位，闡明基因的生化功能，明確其對特定性狀的遺傳控制關系。通過幾十年的努力由于植物 發育，生理生化，分子遺傳等學科的迅速發展，使人們
劉光清 劉在新 謝慶閣(中國農業科學院蘭州獸醫研究所農業部畜禽病毒學重點開放實驗室,蘭州730046)摘 要: 反向遺傳技術是一種新興的分子生物學技術, 已廣泛應用于生命科學研究的各個領域。綜述反向遺傳技術研究進展,并討論該技術在口蹄疫病毒研究中的應用。關鍵詞: 反向遺傳學 反向遺傳技術 全長c
基因的克隆就是利用體外重組 技術，將特定的基因和其它DNA順序插入到載體分子中。基因克隆的主要目標是識別、分離特異基因并獲得基因的完整的全序列，確定染色體定位，闡明基因的生化功能，明確其對特定性狀的遺傳控制關系。通過幾十年的努力由于植物發育，生理生化，分子遺傳等學科的迅速發展，使人們
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解，并且導致了免疫新策略的產生，免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。 一、GST pull-down實驗 GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶，GST pull-down實驗是一個行之有效的驗
1．克隆已知序列的基因 根據已知基因的序列設計引物(primer)，利用PCR方法克隆基因。即使不同種屬之間，基因編碼區序列的同源性高于非編碼區的序列。在某種植物的同源基因被克隆的條件下，可先構建eDNA文庫或基因組文庫，然后以該基因(或部分序列)為探針來篩選目的基因的克隆。 2．功能克隆 根據基
1. RNAi 介紹 RNA 干擾（RNAi:RNA interference）是由諾貝爾生理學/醫學獎得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello（1）在線蟲實驗中發現的，2001 年 Elbashir 等人發現哺乳類的 siRNA 可以進行 RNAi 誘導
1. RNAi 介紹RNA 干擾（RNAi:RNA interference）是由諾貝爾生理學/醫學獎得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello（1）在線蟲實驗中發現的，2001 年 Elbashir 等人發現哺乳類的 siRNA 可以進行 RNAi 誘導。這個方法與常規方