靶細胞殺傷實驗：LDH法
一、效應細胞的制備 激惹5天后，于無菌條件下取出受鼠引流的腹股溝淋巴結，100目鋼網研磨，調整細胞濃度為2×107.ml-1。臺盼藍色要求存活率>95%。 二、靶細胞的制備 P815細胞株系DBA/2小鼠的肥大細胞瘤細胞株。連續傳代培養，調整細胞濃度為2×105/ml或3.33×105/ml（加入α-Lyt2 mAb時的靶細胞濃度），臺盼藍染色成活率>95%。 三、LDH釋放法測定CTL的功能 按表1加樣于96孔培養板中，設3個復孔。混勻置二氧化碳培養箱中孵育4h。室溫離心，用微量加樣器每孔取上清液100μl，送全自動生化分析儀測定每孔的LDH含量。 表1 LDH釋放法測定CTL活性的加樣情況（μl） 分組 效應細胞 靶細胞 α-Lyt2 mAb 1% Triton X-10......閱讀全文
靶細胞殺傷實驗：LDH法
一、效應細胞的制備 激惹5天后，于無菌條件下取出受鼠引流的腹股溝淋巴結，100目鋼網研磨，調整細胞濃度為2×107.ml-1。臺盼藍色要求存活率>95%。 二、靶細胞的制備 P815細胞株系DBA/2小鼠的肥大細胞瘤細胞株。連續傳代培養，調整細胞濃度為2×105/ml或3.33×1
靶細胞殺傷實驗：CFSE/PI法
做免疫學特別是腫瘤學實驗，總免不了要測淋巴細胞或其他細胞對腫瘤細胞的殺傷，老外最常用的是Cr51放射實驗，但這個方法在國內的不少地方都不能做，而MTT這個方法又太老了，而且也不準確，那么替代方法就用流式細胞術，又方便，又準確。 1、計數靶細胞，并加入CFSE，使CFSE終濃度達到2u
靶細胞殺傷實驗：CFSE/PI法
做免疫學特別是腫瘤學實驗，總免不了要測淋巴細胞或其他細胞對腫瘤細胞的殺傷，老外最常用的是Cr51放射實驗，但這個方法在國內的不少地方都不能做，而MTT這個方法又太老了，而且也不準確，那么替代方法就用流式細胞術，又方便，又準確。1、計數靶細胞，并加入CFSE，使CFSE終濃度達到2uM，37度30分鐘
靶細胞殺傷實驗：Cr51法
一、原理?用Na2 51 CrO 4 標記靶細胞，若待檢效應細胞能殺傷靶細胞，則51 Cr( 鉻) 從靶細胞內釋出。以γ計數儀測定釋出的51 Cr 放射活性，靶細胞溶解破壞越多，51 Cr 釋放就越多，上清液的放射活性也就越高，應用公式可計算出待檢效應細胞的殺傷活性。?二、步驟?（以CTL殺傷腫
靶細胞殺傷實驗總論－1
細胞介導的免疫反應（cell mediated immune， CMI）在機體抗感染及抗腫瘤免疫、移植排斥反應和自身免疫病中發揮重要的作用。CMI的主要效應細胞之一為細胞毒T淋細胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）。目前在醫學基礎與臨床研究中重視CTL活性測定，將其作為
靶細胞殺傷實驗總論－2
2、流式細胞標記法?（1）PE-mAb/FITC-annexin V 熒光標記法?正常細胞的磷酯酰絲氨（phosphatidylserine，PS）位于細胞膜內表面，細胞凋亡時翻轉露于膜外側，可與annexinV高親合力結合。研究發現PS外翻為細胞凋亡的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料
靶細胞殺傷實驗：AnnexiV標記法
正常細胞的磷酯酰絲氨（phosphatidylserine，PS）位于細胞膜內表面，細胞凋亡時翻轉露于膜外側，可與annexinV高親合力結合。研究發現PS外翻為細胞凋亡的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的釋放。將效應細胞與靶細胞充分共育后，用PE結合的效應細胞特異性單克隆抗體（如CD
殺傷靶細胞的過程
CTL殺傷靶細胞是一個連續過程，可分為三個階段，主要研究內容如下：1、效應靶細胞結合：CTL是通過其膜上的受體TCR，即Ti-CD3分子與靶細胞結合，此時膜上的淋巴細胞功能相關抗原Ⅰ與靶細胞膜上的配基Ⅰ，又稱細胞內粘附分子相互作用，即靶細胞與效應細胞初步接觸。此時親和力低，為非特異性的，但可促使TC
流式細胞術測效靶細胞殺傷實驗
做免疫學特別是腫瘤學實驗，總免不了要測淋巴細胞或其他細胞對腫瘤細胞的殺傷，老外最常用的是Cr51放射實驗，但這個方法在國內的不少地方都不能做，而MTT這個方法又太老了，而且也不準確，那么替代方法就用流式細胞術，又方便，又準確，這也是偶參照老外的方法吧。1 計數靶細胞，并加入CFSE，使CFSE終濃度
靶細胞殺傷實驗：MTT和CCK8比較
Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。?WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒
法測效靶細胞殺傷——用流式細胞術
做免疫學特別是腫瘤學實驗，總免不了要測淋巴細胞或其他細胞對腫瘤細胞的殺傷，國外最常用的是Cr51放射實驗，但這個方法在國內的不少地方都不能做，而MTT這個方法又太老，而且也不準確，那么替代方法就用流式細胞術，又方便，又準確。 具體參照如下：1、計數靶細胞，并加入CFSE，使CFSE終濃度達到2uM,
CD8+T細胞殺傷靶細胞的過程
CTL殺傷靶細胞是一個連續過程，可分為三個階段，主要研究內容如下： 1、效應靶細胞結合：CTL是通過其膜上的受體TCR，即Ti-CD3分子與靶細胞結合，此時膜上的淋巴細胞功能相關抗原Ⅰ與靶細胞膜上的配基Ⅰ，又稱細胞內粘附分子相互作用，即靶細胞與效應細胞初步接觸。此時親和力低，為非特異性的，但可
細胞毒性T細胞殺傷靶細胞的過程
CTL殺傷靶細胞是一個連續過程，可分為三個階段，主要研究內容如下： 1、效應靶細胞結合：CTL是通過其膜上的受體TCR，即Ti-CD3分子與靶細胞結合，此時膜上的淋巴細胞功能相關抗原Ⅰ與靶細胞膜上的配基Ⅰ，又稱細胞內粘附分子相互作用，即靶細胞與效應細胞初步接觸。此時親和力低，為非特異性的，但可
NK細胞活性檢測實驗步驟
細胞毒檢測技術包括補體依賴細胞毒試驗、NK細胞介導的細胞毒試驗和特異性CTL活性檢測，常用的實驗技術有后兩種。NK細胞（natural killer cell）是在天然免疫系統發揮主要作用的效應細胞，可直接殺傷病毒感染的靶細胞和某些腫瘤細胞。而細胞毒性T淋巴細胞（cytotoxic T lymp
NK細胞活性測定：LDH法原理和實驗步驟
一、原理?活細胞的胞漿內含有LDH。正常情況下，LDH不能透過細胞膜，當細胞受到NK細胞的殺傷后，LDH釋放到細胞外。LDH 可使乳酸鋰脫氫，進而使NAD還原成NADH，后者再經遞氫體吩嗪二甲酯硫酸鹽（PMS）還原碘硝基氯化四氮唑（INT），INT 接受H＋被還原成紫紅色甲月贊類化合物。在酶
Celigo成像分析技術在細胞殺傷中的應用（一）
2018年的諾貝爾生理學或醫學獎授予了兩位免疫學家，分別是美國的James P Allison和日本的本庶佑教授，以表彰他們的原創發現推動了免疫學研究的進程，促使了癌癥治療領域革命性新藥物的面世。如今炙手可熱的PD-1， CAR-T，TCR-T技術等都要歸功于這一偉大發現及其臨床應用。如果你的工作也
效應細胞功能鑒定和抗體藥物研發之ADCC分析（一）
1.ADCC作用ADCC作用即抗體依賴細胞介導的細胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)：指表達IgGFc受體的NK細胞、巨噬細胞和中性粒細胞等，通過與已結合在病毒感染細胞和腫瘤細胞等靶細胞表面的IgG抗體的Fc段結合，而達到殺傷這些
NK細胞活性測定：LDH法
實驗方法原理活細胞的胞漿內含有LDH。正常情況下，LDH不能透過細胞膜，當細胞受到NK細胞的殺傷后，LDH釋放到細胞外。LDH 可使乳酸鋰脫氫，進而使NAD還原成NADH，后者再經遞氫體吩嗪二甲酯硫酸鹽（PMS）還原碘硝基氯化四氮唑（INT），INT 接受H＋被還原成紫紅色甲月贊類化合物。在酶標儀上
NK細胞活性測定：LDH法
實驗概要活細胞的胞漿內含有LDH。正常情況下，LDH不能透過細胞膜，當細胞受到NK細胞的殺傷后，LDH釋放到細胞外。LDH ?可使乳酸鋰脫氫，進而使NAD還原成NADH，后者再經遞氫體吩嗪二甲酯硫酸鹽（PMS）還原碘硝基氯化四氮唑（INT），INT ?接受H＋被還原成紫紅色甲月贊類化合物。在酶標儀上
簡述細胞毒性T淋巴細胞殺傷靶細胞的過程
CTL殺傷靶細胞是一個連續過程，可分為三個階段，主要研究內容如下： 1、效應靶細胞結合：CTL是通過其膜上的受體TCR，即Ti-CD3分子與靶細胞結合，此時膜上的淋巴細胞功能相關抗原Ⅰ與靶細胞膜上的配基Ⅰ，又稱細胞內粘附分子相互作用，即靶細胞與效應細胞初步接觸。此時親和力低，為非特異性的，但可
乳酸脫氫酶(LDH)釋放法檢測NK細胞活性實驗
實驗方法原理乳酸脫氫酶(LDH)是活細胞胞漿內含酶之一。在正常情況下，不能透過細胞膜。當靶細胞受到效應細胞的攻擊而損傷時，細胞膜通透性改變，LDH可釋放至介質中，釋放出來的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的過程中，使氧化型輔酶I(NAD+)變成還原型輔酶I (NADH2），后者再通過遞氫體-吩嗪二甲酯硫酸
乳酸脫氫酶(LDH)釋放法檢測NK細胞活性實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 乳酸脫氫酶(LDH)是活細胞胞漿內含酶之一。在正常情況下，不能透過細胞膜。當靶細胞受到效應細胞的攻擊而損傷時，細胞膜通透性改變，LDH可釋放至介質中，釋放出來的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的過程中，使氧化型輔酶I(NAD+)變成
乳酸脫氫酶(LDH)釋放法檢測NK細胞活性實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 乳酸脫氫酶(LDH)是活細胞胞漿內含酶之一。在正常情況下，不能透過細胞膜。當靶細胞受到效應細胞的攻擊而損傷時，細胞膜通透性改變，LDH可釋放至介質中，釋放出來的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的過程中，使氧化型輔酶I(NAD+)變成
乳酸脫氫酶(LDH)釋放法檢測NK細胞活性實驗
實驗方法原理 乳酸脫氫酶(LDH)是活細胞胞漿內含酶之一。在正常情況下，不能透過細胞膜。當靶細胞受到效應細胞的攻擊而損傷時，細胞膜通透性改變，LDH可釋放至介質中，釋放出來的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的過程中，使氧化型輔酶I(NAD+)變成還原型輔酶I (NADH2），后者再通過遞氫體-吩嗪
細胞介導細胞毒作用檢測法3：LDH釋放法
LDH釋放法1）測定方法1．用含5％小牛血清的RPMI-1640培養液將靶細胞調整到5×104～2×105/ml，此濃度需根據情況預先標定。2．在96孔圓底細胞培養板中加入靶細胞，每孔加100μl。3個效應細胞自然釋放對照孔不加靶細胞，只加100μl培養液。3．向各孔加100μl效應細胞，效應細胞與
自然殺傷細胞和淋巴因子激活殺傷細胞的殺傷功能實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 NK細胞存在于人或動物外周血、脾臟、淋巴結和骨髓中，能殺傷某些腫瘤細胞、病毒感染靶細胞，無需抗原或有絲分裂原刺激，亦不依賴抗體或補體，在機體殺傷腫瘤、防御感染及免疫調節中發揮重要作用。 LAK是NK或T細胞在體外高劑量IL
自然殺傷細胞和淋巴因子激活殺傷細胞的殺傷功能實驗
實驗方法原理NK細胞存在于人或動物外周血、脾臟、淋巴結和骨髓中，能殺傷某些腫瘤細胞、病毒感染靶細胞，無需抗原或有絲分裂原刺激，亦不依賴抗體或補體，在機體殺傷腫瘤、防御感染及免疫調節中發揮重要作用。 LAK是NK或T細胞在體外高劑量IL-2誘導下，獲得能殺傷NK抵抗的腫瘤細胞的功能，在過繼免疫治療腫
自然殺傷細胞和淋巴因子激活殺傷細胞的殺傷功能實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 NK細胞存在于人或動物外周血、脾臟、淋巴結和骨髓中，能殺傷某些腫瘤細胞、病毒感染靶細胞，無需抗原或有絲分裂原刺激，亦不依賴抗體或補體，在機體殺傷腫瘤、防御感染及免疫調節中發揮重要作用。 LAK是NK或T細胞在體外高劑量IL
特異性抗原誘導的細胞毒性T細胞功能測定
實驗試劑絲裂霉素C（Sigma）：用培養液或PBS配制300μg/ml含20%的新生牛血清的RPMI 1640實驗材料EB病毒轉化的B淋巴母細胞株實驗步驟1.?? 特異性CTL的誘導和制備1)?? 取作者外周血分離PBMC，無血清1640洗兩遍，用含20%的新生牛血清的RPMI 1640調成1.5×
中性粒細胞吞噬功能的測定操作方法
1. 特異性CTL的誘導和制備①? 取作者外周血分離PBMC，無血清1640洗兩遍，用含20%的新生牛血清的RPMI 1640調成1.5×106 /ml，置于24孔板中，于5% CO2 培養箱中4小時使單核細胞貼壁以去除之，然后收集細胞，計數；②? 取EB病毒轉化的B淋巴母細胞，加入絲裂霉素C，最終