裸質粒載體在基因治療藥物中的應用
基因治療是二十世紀九十年代發展起來的一種全新的疾病治療模式，是通過載體將外源基因導入靶細胞，以糾正或改善致病基因所產生的缺陷，達到治療疾病的目的。根據“Gene Therapy Clinical Trials Worldwide”的統計，至2017年11月，全球范圍共開展了2597個臨床試驗，主要集中于癌癥、單基因遺傳病以及心血管疾病等方面的治療。2012年，歐洲首個基因治療藥物Glybera獲得批準，成為基因治療領域的里程碑；2017年，FDA批準3款基因治療藥物上市，截止目前全球已批準8個基因治療藥物，其中我國共批準2個；2018年1月Science雜志發表題為“Gene therapy comes of age”的文章，認為基因治療迎來了新時代，再次引發醫藥界對基因治療藥物的廣泛關注，大型跨國制藥企業也開始向基因治療研發方面進行實質性投資，基因治療藥物的研發進入快速發展階段。 裸質粒基因治療藥物的研發現狀 ......閱讀全文
裸質粒載體在基因治療藥物中的應用
基因治療藥物研發概況 基因治療是二十世紀九十年代發展起來的一種全新的疾病治療模式，是通過載體將外源基因導入靶細胞，以糾正或改善致病基因所產生的缺陷，達到治療疾病的目的。根據“Gene Therapy Clinical Trials Worldwide”的統計，至2017年11月，全球范圍共
裸質粒載體在基因治療藥物中的應用
基因治療藥物研發概況 基因治療是二十世紀九十年代發展起來的一種全新的疾病治療模式，是通過載體將外源基因導入靶細胞，以糾正或改善致病基因所產生的缺陷，達到治療疾病的目的。根據“Gene Therapy Clinical Trials Worldwide”的統計，至2017年11月，全球范圍共
裸質粒載體在基因治療藥物中的應用
基因治療是二十世紀九十年代發展起來的一種全新的疾病治療模式，是通過載體將外源基因導入靶細胞，以糾正或改善致病基因所產生的缺陷，達到治療疾病的目的。根據“Gene Therapy Clinical Trials Worldwide”的統計，至2017年11月，全球范圍共開展了2597個臨床試驗，主
外源DNA片段在質粒載體中的克隆實驗
克隆法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 限制性內切酶可識別特定位點并切割DNA產生粘性末端或平端的外源片段，經DNA的純化處理后用于連接反應；選擇克隆載體pUC18多克隆位點上
外源DNA片段在質粒載體中的克隆實
實驗方法原理?限制性內切酶可識別特定位點并切割DNA產生粘性末端或平端的外源片段，經DNA的純化處理后用于連接反應；選擇克隆載體pUC18多克隆位點上相應的限制性內切酶切割，并用堿性磷酸酶處理防止載體自連；在連接酶的作用下將外源片段連接到載體上，實現外源片段的克隆。實驗材料?DNA片段PUC18試劑
外源DNA片段在質粒載體中的克隆實驗
NA重組技術包括載體及外源DNA片段的酶切消化、目的片段的獲得及純化、目的片段與克隆載體的體外連接、重組子的篩選和鑒定等內容。主要用于（1）外源性基因轉染；（2）對外源性基因的轉化分離。實驗方法原理限制性內切酶可識別特定位點并切割DNA產生粘性末端或平端的外源片段，經DNA的純化處理后用于連接反應；
質粒載體的載體大小的介紹
大的質粒（大于15kb）不會很好轉化而且DNA產量通常很低。在設計實驗時要考慮到加入插入片段的最終載體大小，盡量用更小的載體。 兼容性 當多于一個質粒載體必須同時存在于同一個細菌細胞中，這兩個質粒的復制子必須是兼容的。當他們不能穩定地共存時，則認為這兩個質粒是不兼容的。 選擇/檢測插入片段
質粒與載體
一、質粒絕大多數的生物都是以DNA 的形式來儲藏其遺傳信息。遺傳物質要能生生不息地傳給后代的首要條件就是它至少要具有一個復制原(ori, origin of replication，或譯為復制起點)，使整個基因體得以復制。含有復制原的遺傳物質稱為replicon，我們姑且把它譯為為復制體吧！原核性復
質粒載體的分類
按復制形式分為嚴緊型和松弛型復制。根據質粒DNA復制與宿主之間的關系或在宿主細胞的拷貝數的多少，可以將質粒分為兩種不同的復制類型：嚴緊型和松弛型。嚴緊型質粒復制受宿主染色體DNA復制的嚴格控制，拷貝數較小一般只有1~3個拷貝。疏松型質粒的復制宿主的控制比較松，在宿主中的拷貝數比較多，一般有10~20
外源DNA片段在質粒載體中的克隆實驗原理和步驟
DNA重組技術包括載體及外源DNA片段的酶切消化、目的片段的獲得及純化、目的片段與克隆載體的體外連接、重組子的篩選和鑒定等內容。DNA片段的克隆技術是分子操作的核心部分。 實驗目的： 學習DNA的酶切、純化及外源片段與載體的連接，將BAC克隆所攜帶的外源DNA酶切片段亞克隆到pUC18載體上
酰化在藥物合成中的應用
酰化反應在藥物合成中有著廣泛的應用,酰基是某些藥物重要的藥效基團,在許多藥物結構中含有酰基。例如,在甾體抗炎藥保泰松的結構中的C3和C5位的酰胺羰基、抗精神藥氟哌啶醇結構中的酰基苯等均是其活性所必需的基團。許多含羧基、羥基、氨基等官能團的藥物通過酰化反應形成酯或酰胺的修飾生成“前藥”,可以改變原
DSC在藥物分析中的應用
近年來，熱分析技術在制藥工業中的應用越來越廣泛，本文以案例的形式介紹了熱分析中的差示掃描量熱儀，在藥物純度、藥品多晶型分析、冷凍干燥工藝的優化、蛋白質變性的檢測等幾個方面的應用。 藥品研發與生產中，必須監控其物化性質，如純度、晶型、穩定性和安全性，以確保藥物具有預期的藥性。眾所周知，有機化
在質粒載體中進行平末端片段的克隆
在質粒載體中進行平末端片段的克隆1．分別設立兩個反應，用適當的限制性內切核酸酶消化1~10μg質粒DNA和外源DNA片段，使它們能產生平末端。2．苯酚：氯仿抽提與乙醇沉淀法純化出已被消化的載體和外源DNA片段。3．分別用TE（pH 8.0）重新溶解純化出的兩種DNA沉淀，使終濃度為100 ng/ml
在質粒載體中進行平末端片段的克隆
1．分別設立兩個反應，用適當的限制性內切核酸酶消化1~10μg質粒DNA和外源DNA片段，使它們能產生平末端。2．苯酚：氯仿抽提與乙醇沉淀法純化出已被消化的載體和外源DNA片段。3．分別用TE（pH 8.0）重新溶解純化出的兩種DNA沉淀，使終濃度為100 ng/ml。?假設1 bp相當于660 D
在質粒載體中進行定向克隆實驗
大多數常用質粒都含有可被不同內切酶識別的多克隆位點。由于可供選擇的克隆位點很多 [ 如 Invitrogen 公司的 PSE280 質粒的克隆位點有 46 個之多，而且還可以設計含有更多克隆位點的多聚接頭（Brosius 1992 ) ]，因此一般來說總是能夠找到一個帶有與某一特定外源 DNA 片段
在質粒載體中進行定向克隆實驗
在質粒載體中進行定向克隆實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 大多數常用質粒都含有可被不同內切酶識別的多克隆位點。由于可供選擇的克隆位點很多 [ 如 Invitrogen 公司
在質粒載體中進行定向克隆實驗
實驗方法原理 大多數常用質粒都含有可被不同內切酶識別的多克隆位點。由于可供選擇的克隆位點很多 [ 如 Invitrogen 公司的 PSE280 質粒的克隆位點有 46 個之多，而且還可以設計含有更多克隆位點的多聚接頭（Brosius 1992 ) ]，因此一般來說總是能夠找到一個帶有與某一
簡述慢病毒載體的載體質粒
載體質粒上HIV-1的順式序列通常包括兩端的LTR、剪切位點及包裝信號Ψ等。此外，研究表明，gag基因5′端的序列可提高載體RNA的包裝效率；Rev蛋白需要與Rev反應元件(RRE)相作用，將未剪切的載體轉錄產物從細胞核轉運到胞漿。因此，Naldini等在載體上保留了gag基因5′端350bp的
酵母質粒載體的特點
酵母質粒載體既可以在大腸桿菌復制與擴增、又可以在酵母系統中復制與擴增,故此類載體又稱為穿梭載體(shuttlevector)。 在基因工程中,應用上述病毒表達載體在哺乳動物細胞中進行中、小規模的表達是十分實際的。還要有對組織培養技術十分熟悉的前提。但病毒載體的運用仍然存在技術較難、耗時間和不經
關于質粒載體的簡介
質粒是小型環狀DNA分子,大小為1～200kb(1kb=1000堿基對)。質粒不同于病毒,是裸露的DNA分子,沒有外殼蛋白,在基因組中,也沒有溶菌酶基因。質粒在宿主細胞內才能完成自身復制,同時將編碼的一些非染色體控制的遺傳性狀進行表達,賦予宿主細胞一些額外的特性,包括抗性特性、代謝特性等,其中對
酵母質粒載體的特點
酵母質粒載體既可以在大腸桿菌復制與擴增、又可以在酵母系統中復制與擴增，故此類載體又稱為穿梭載體(shuttlevector)。在基因工程中，應用上述病毒表達載體在哺乳動物細胞中進行中、小規模的表達是十分實際的。還要有對組織培養技術十分熟悉的前提。但病毒載體的運用仍然存在技術較難、耗時間和不經濟的問題
什么是質粒載體？
質粒載體是在天然質粒的基礎上為適應實驗室操作而進行人工構建的質粒。與天然質粒相比，質粒載體通常帶有一個或一個以上的選擇性標記基因（如抗生素抗性基因）和一個人工合成的含有多個限制性內切酶識別位點的多克隆位點序列，并去掉了大部分非必需序列，使分子量盡可能減少，以便于基因工程操作。
活體動物體內生物發光和熒光成像技術基礎原理與應用二
（二）活體生物發光成像技術應用領域活體生物發光成像技術是一項在某些領域有不可替代優勢的技術，比如腫瘤轉移研究、藥物開發、基因治療、干細胞示蹤等方面。1．腫瘤學活體生物發光成像技術能夠讓研究人員能夠直接快速的測量各種癌癥模型中腫瘤的生長、轉移以及對藥物的反應。其特點是極高的靈敏度使微小的腫瘤病灶（少到
在質粒載體中進行平末端片段的克隆實驗
在質粒載體中進行平末端片段的克隆實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 克隆平末端的目的片段時，為最大量地獲得“正確”的連接產物，載體和目的 DNA 在連接反應中的比例必須適當。
在質粒載體中進行平末端片段的克隆實驗
克隆平末端的目的片段時，為最大量地獲得“正確”的連接產物，載體和目的 DNA 在連接反應中的比例必須適當。每一重組體中外源 DNA 的連接方向和插入數量都必須用限制酶酶切圖譜分析或其他方法加以鑒定。作為一般規律，如果連接反應中質粒和目的 DNA 摩爾數相等，而且 DNA 的總濃度少于 100 μg/
在質粒載體中進行平末端片段的克隆實驗
實驗方法原理 克隆平末端的目的片段時，為最大量地獲得“正確”的連接產物，載體和目的 DNA 在連接反應中的比例必須適當。每一重組體中外源 DNA 的連接方向和插入數量都必須用限制酶酶切圖譜分析或其他方法加以鑒定。作為一般規律，如果連接反應中質粒和目的 DNA 摩爾數相等，而且 DNA 的
基因治療的載體有哪些？
病毒載體病毒會與他們的宿主細胞結合，引入它們的遺傳物質作為其宿主細胞復制循環的一部分。這種遺傳物質包含病毒的基本信息，比如如何產生這些病毒的副本，如何破壞人體的正常生產機制以滿足該病毒的需要。宿主細胞將執行這些指令并產生更多的病毒副本，以至于越來越多的正常細胞將受到感染。某些類型的病毒將自己的基因插
SPE在體內藥物分析中的應用
隨著技術的日益完善,固相萃取以其高效、萃取率高、作簡便等優點在體內藥物分析中應用不斷增多,豐富了生物樣品預處理的方法。SPE與液一液萃取相比,操作簡單,耗時短,節省試劑,無污染,因此,很多分析工作者嘗試采用這種方法,獲得了良好的效果。 （1）測定人血漿中地賽米松濃度時,使用Oasis HLB
Celigo技術在基因治療和病毒研究中的應用（一）
Biogen于1978年由幾位著名的生物學家，包括愛丁堡大學的Kenneth Murray、麻省理工學院的Phillip Allen?Sharp，以及哈佛大學的Walter Gilbert和Charles Weissmann在日內瓦成立。后來，Walter Gilbert和Phillip A
Celigo技術在基因治療和病毒研究中的應用（三）
Disucssion這里所介紹的使用熒光檢測的自動蝕斑計數方法有助于加快蝕斑檢測的速度。但是，有幾種類型的感染性病毒滴度實驗不會形成蝕斑。半數組織培養感染劑量（TCID50）就是另一種常用的病毒滴定方法。TCID50是終點稀釋測定法，用于確定感染50％接種細胞所需的病毒樣品稀釋度。由于蝕斑和TCID