組織免疫熒光染色
概述: 織免疫熒光染色多是使用組織的冰凍切片,因為在切片過程中基本上暴露了細胞和細胞核內結構,故不需要使用細胞通透劑(Triton-100,NP-40)。染色后的切片應放置冰箱內避光保存,防止熒光淬滅。常用的熒光素有:異硫氰酸(fluorescein isothiocyanate,FITC,發散蘋果綠色熒光);四甲基羅丹明異硫氰(tetramethyl rhodamine isothiocyanate,TRITC,發散橘紅色熒光 ) 一. 組織處理: 取出組織后,置于4%多聚甲醛中4-12小時(視組織大小、厚度而定),多聚甲醛的體積應為組織大小的5-10倍。再在20%蔗糖中4℃過夜。OCT(冰凍包埋劑)包埋組織,-20℃或更低的溫度進行冰凍。 二.冰凍切片: 切片可于-40或-80℃中保存。 三.染色: 1.冰凍切片使用前放濕盒室溫1小時復溫。 2.用組化筆(可用唇膏代替)在組織周圍劃出范圍,以防止此后操作中......閱讀全文
免疫組織化學染色方法
實驗原理免疫細胞化學(immunocytochemistry)是根據免疫學原理,利用抗體同特定抗原專一結合,對抗原進行定位測定的技術。抗原主要為大分子或與大分子相結合的小分子;抗體則是由漿細胞針對特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果將抗體結合上標記物,再與組織中的抗原發生反應,即可在光鏡或電鏡下顯示出該抗
免疫組織化學染色方法
實驗概要免疫組織化學染色法是指在抗體上結合熒光或可呈色的化學物質,利用免疫學原理中抗原和抗體間專一性的結合反應,檢測細胞或組織中是否有目標抗原的存在,此方式不只可以用來測知抗原的表現量也可觀察抗原所表現的位置。只要是能夠讓抗體結合的物質,也就是具有抗原性的物質包括蛋白質、核酸、多糖、病原體等都可偵測
免疫金組織化學染色實驗
實驗方法原理 免疫金染色(immunogold staining,IGS)法是由 Geoghegan 等(1978)首次應用金標探針檢測 B 淋巴細胞表面抗原,將膠體金顆粒(大于 20 nm)標記在第二抗體或 SPA 分子上,制備成金標二抗。其原理是當特異性抗體與抗原結合后,用金標二抗或金標
脂肪及結締組織的染色方法
實驗概要掌握脂肪及結締組織的染色方法。脂肪的染色方法:脂肪染色常用脂溶性色素,如蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ、油紅O等。這類染料既能溶于有機溶劑如乙醇、丙酮,又能溶于脂肪。由于該類染料在脂質中溶解度較大,染色時染料便從染液中轉移到被染的脂質中去,使脂質呈染液的顏色。主要用于顯示組織臟器的脂肪變性和類脂質的異常沉著
免疫熒光組織(細胞)化學染色方法
免疫熒光組織(細胞)化學染色方法:直接法基本原理?將熒光素標記在相應的抗體上,直接與相應抗原反應。其優點是方法簡便、特異性高,非特異性熒光染色少。缺點是敏感性偏低;而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。?試劑與儀器?磷酸鹽
免疫組織化學染色方法
實驗原理免疫細胞化學(immunocytochemistry)是根據免疫學原理,利用抗體同特定抗原專一結合,對抗原進行定位測定的技術。抗原主要為大分子或與大分子相結合的小分子;抗體則是由漿細胞針對特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果將抗體結合上標記物,再與組織中的抗原發生反應,即可在光鏡或電鏡下顯示出該抗
上皮組織特殊染色液的介紹
上皮組織特殊染色液由醋酸、亞甲基藍、葉酸受體物和蒸餾水組成。大量研究證明,上皮組織特殊染色液被涂抹于上皮組織后,上皮組織的活細胞如有癌變細胞存在,葉酸受體物就會經過這些細胞表面的葉酸受體,迅速進入細胞漿,同時還原型的亞甲基藍也被帶入細胞漿內。葉酸被還原成四氫葉酸,還原型的亞甲基藍則被癌變細胞內
上皮組織特殊染色液的用途
適用于上皮組織病理學分析前的特殊染色,如宮頸鱗狀上皮和柱狀上皮組織(如:宮頸異常病變,陰道炎,尖銳濕疣,口腔等)異常病變的臨床偵察。
脂肪及結締組織的染色方法
實驗步驟脂肪的蘇丹Ⅲ(Ⅳ)染色方法:1) 冰凍切片用70%乙醇漂洗,不超過30s。2) 切片入蘇丹Ⅲ(Ⅳ)染液中3~15min或延長至1h。3)?新50%~70%乙醇分化,直至洗去切片上的浮色為止,蒸餾水洗。4) 用稀釋1倍的明礬蘇木精淺染核1min或稍長。5) 用濾紙將切片及周圍的水分吸干。6)
免疫熒光組織(細胞)化學染色方法
免疫熒光組織(細胞)化學染色方法:直接法基本原理 將熒光素標記在相應的抗體上,直接與相應抗原反應。其優點是方法簡便、特異性高,非特異性熒光染色少。缺點是敏感性偏低;而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。 試劑與儀器 磷酸鹽
免疫熒光組織(細胞)化學染色方法
一、其它熒光抗體染色方法1、膜抗原熒光抗體染色法本法應用直接法或間接法的原理和步驟,可對活細胞在試管內進行染色,常用于T和B細胞、細胞培養物、瘤細胞抗原和受體等的檢查和研究,陽性熒光主要在細胞膜上。FACS即采用此法原理。2、雙重染色法在同一標本上有兩個抗原需要同時顯示(如A抗原和B抗原),A抗原的
組織細胞化學染色方法的選擇
組織細胞化學的染色種類繁多,檢測同一種物質可以有多種不同的染色液,形成不同色彩的終產物。有時即使是檢測同一物質,因采用的方法不同,其結果有一定的偏差。另外有的方法學本身缺陷或步驟復雜,其結果也有誤差。所以應盡量選擇結果穩定、方法簡便的方法染色。
TUNEL分析實驗——組織切片的-TUNEL-染色
實驗材料組織試劑、試劑盒甲醛NaOHPBS二甲苯乙醇蛋白酶 KTris-HCl 溶液儀器、耗材Parafilm 膜實驗步驟1. 取下組織,立即用新制備的 4% 甲醛固定,室溫過夜。用多聚甲醛制備 4% 的甲醛溶液,在 100 ml 水中加 8 g 多聚甲醛,在通風櫥中加熱至 50~60℃,加幾滴 1
結締組織染色實驗——膠原蛋白、彈力蛋白和黏蛋白染色
實驗方法原理黏蛋白是多糖與蛋白質結合的復合物,組織內含有硫酸根等成分,帶有酸性物質,可稱為酸性黏液(黏蛋白)。彈力纖維中的彈性蛋白由一種凝膠狀的肽鏈組成,通過非極性吸附顯色。膠原纖維是由纖維母細胞產生的一種膠原蛋白鉸鏈而成,易與酸性染料結合。經過組合染色后,可分別顯示膠原蛋白、彈力蛋白和黏蛋白成分。
雙重染色法免疫熒光組織化學染色步驟
1.一步雙染色法先將兩種熒光標{己抗體按適當比例混合(A+B),按直接法進行染色。2.二步雙染色法先用TRITC標記的A抗體進行免疫熒光染色,再用FITC標記的B抗體染色,根據兩種抗體的動物種屬不同,可用直接法也可用間接法,結果A抗原呈現橘紅色熒光,而B抗原呈現黃綠色熒光。在應用中,常用的方法是免疫
植物組織和細胞顯微化學染色_植物組織中酶檢測方法
實驗步驟植物組織中酶的組織化學鑒定,其基本原理是以某些物質為基屈,在專一酶的作用下,產生 種有顏色的化合物來表示某種酶的存在。為保持酶的活性,通常要采用冰凍切片法來得到切片,有時也可用徒手切片法。(1)細胞色素氧化酶:將切片放人磷酸緩沖液 (pH 值 5.8) 中,室溫下放置 5-10min, 然后
免疫組織化學常用染色方法
根據標記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標法,親和組織化學法,后者是以一種物質對某種組織成分具有高度親合力為基礎的檢測方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位,其中生物素——抗生物素染色法最常用。
石蠟切片免疫組織化學染色
主要試劑染色缸;染色架;保濕盒;晾片盤;微量移液器;0.2MPBS,乙醇,二甲苯,BSA,中性樹膠等實驗步驟1.?????石蠟切片放置在60℃恒溫箱中烘烤120分鐘;2.?????脫蠟和水化:二甲苯(10min)→二甲苯(10min)→無水乙醇(5min×2次)→95%乙醇(5min×2)→90%(
植物組織和細胞的顯微化學染色實驗
實驗方法原理?植物體內含有許多種化學物質。在得到植物組織切片之后,可以通過組織化學(顯微化學)染色的方法使不同類型的化學成分在顯微鏡下得以顯示,從而了解這些物質在植物的組織細胞內的空間分布用于組織化學研究的切片,根據研究對象和所要檢測的化學物質的不同,可采用石蠟切片,有時要求新鮮材料采用徒手切片或冰
DNA熒光組織化學染色的方法
一步雙染色法先將兩種熒光標{己抗體按適當比例混合(A+B),按直接法進行染色。二步雙染色法先用TRITC標記的A抗體進行免疫熒光染色,再用FITC標記的B抗體染色,根據兩種抗體的動物種屬不同,可用直接法也可用間接法,結果A抗原呈現橘紅色熒光,而B抗原呈現黃綠色熒光。在應用中,常用的方法是免疫熒光組織
骨組織βgal免疫染色實驗技術方法
?-gal Staining:Reagents:0.1M Phosphate Buffer (pH 7.3):0.1M Sodium Phosphate monobasic115ml0.1M sodium phosphate dibasic385mlTotal Volume500 mlFix sol
組織培養細胞染色體制備方法
組織細胞用于遺傳學分析最常見的是體外培養的細胞株,多為惡性腫瘤細胞株,且呈貼壁生長,僅小數細胞株為懸浮生長。培養細胞有來源易得、細胞分裂率高和染色體標本制出清晰度高等優點。組織細胞染色體制備的關鍵是掌握好體外細胞的生長動態,只有處在對數生長期的細胞才能出現較高的分裂相,所以積水仙素處理的時機及量是染
植物組織和細胞的顯微化學染色實驗
實驗步驟:(1) 淀粉:淀粉是植物的主要貯藏物質,它們在各種不同的植物細胞中形成各種形狀小同的顆粒。一般來說,淀粉本身具有特殊的性狀和光學特性,可以不必用專門的顯微化學方法來檢視,由于碘與淀粉作用可形成碘化淀粉而呈藍色反應,用碘-碘化鉀溶液來測試淀粉粒已成為最常用的方法。(2) 蛋白質:植物細胞
光鏡免疫金組織化學染色方法
一、原理本法是由Geoghegan等(1978)首次應用金標探針檢測B淋巴細胞表面抗原,將膠體金顆粒(大于20nm)標記在第二抗體或SPA分子上,制備成金標二抗。其原理是當特異性抗體與抗原結合后,用金標二抗或金標SPA與特異性抗體結合,形成抗原-抗體-金標抗體復合物,此時在光鏡(10X100倍)下可
核仁組織者區的AgNO3染色
一、原理??? 1976年Goodpasture等應用銀染色技術,使9種哺乳動物的核仁組織者區(NORs)特異性的染為黑色,該技術被稱為Ag-As的銀染技術,銀染色陽性的NORs被稱為Ag-NORs,與Hsu等人用原位分子雜交得到的結果比較,表明Ag-NORs就是18S+28S核糖體基因(rDNA)
細胞表面抗原染色的組織樣本制備方法
該方法適用于新鮮和冷凍標本1.將組織(10-20mm)切成1-2mm的碎片,用緩沖液或培養液浸濕。2.用1ml緩沖液或培養液預洗Medicon?二遍。3.將組織和1ml緩沖液或培養液放入到Medicon中,蓋上蓋子,將Medicon?插入到Medimachine中。4.降解組織。降解組織的時間長短依
惡性組織細胞病的細胞化學染色結果
染色正常單核細胞異常單核細胞惡組細胞過氧化物酶++0~+0堿性磷酸酶000酸性磷酸酶++++++++糖原(PAS)+~++(彌散)+~++(彌散)0~+(彌散)蘇丹黑B++±+β-葡萄糖醛酸酶+±±醋酸ASD酯酶00?醋酸α萘酚酯酶++++++±
組織免疫沉淀中染色質的制備
實驗概要此步驟描述了從組織中制備染色質,以用于后續的染色質免疫沉淀反應。每個免疫沉淀/抗體反應推薦使用肝組織 30 mg,但組織使用量可根據實際進行調整。每種組織的用量依據組織蛋白豐度、抗體親和力和交聯效率而定。每個免疫沉淀反應最適染色質的量為 5-15 μg 。每次交聯免疫沉淀反應之前,需根據不同
關于細胞組織化學染色的簡介
免疫細胞組織化學染色是利用已知的抗體與細胞抗原特異性相結合的特性,通過化學反應使標記在抗體上的顯示劑顯示一定的顏色,并借助顯微鏡、熒光顯微鏡或電鏡進行觀察,以達到對組織、細胞結構中化學成分進行定量、定位分析的目的。
免疫熒光組織(細胞)化學染色方法:間接法
一、原理與意義?免疫熒光組織(細胞)化學染色方法——間接法,是一種熒光抗體染色法。該方法只需制備一種熒光抗體可以檢出多種抗原,敏感性較高,操作方法較易掌握,而且能解決一些不易制備動物免疫血清的病原體(如麻疹)等的研究和檢查,所以已被廣泛應用于自身抗體和感染病人血清的試驗。?二、操作流程?(一)雙層法