聚合酶鏈式反應的原理
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在DNA聚合酶的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，加入設計引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。但是，DNA聚合酶在高溫時會失活，因此，每次循環都得加入新的DNA聚合酶，不僅操作煩瑣，而且價格昂貴，制約了PCR技術的應用和發展。耐熱DNA聚合酶-Taq酶的發現對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構成：①模板D......閱讀全文
聚合酶鏈式反應的原理
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在DNA聚合酶的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，加入設計引物，DN
聚合酶鏈式反應的原理簡介
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在DNA聚合酶的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，加入設計引物，
聚合酶鏈式反應（PCR）的原理
PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構成：①模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備
PCR（聚合酶鏈式反應）的反應原理
【原理】 PCR（polymerase chain reaction）用于在體外將微量的目標DNA大量擴增，以便進行分析。反應體系：①樣品DNA；②引物（primer），是人工合成的一對寡核苷酸鏈（約15-20個核苷酸），用于擴增夾在雙引物與模板DNA互補區之間的區域；③4種dNTP；④Tag
聚合酶鏈式反應（PCR）的反應原理
PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合,再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基于聚合酶制造的PCR儀實際就是一個溫控設備,能在變
聚合酶鏈式反應的的基本原理
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在DNA聚合酶的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，加入設計引物，DN
聚合酶鏈式反應PCR原理是什么？
PCR（聚合酶鏈式反應）技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性→退火→延伸三個基本反應步驟構成：①模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合
聚合酶鏈式反應（PCR）的原理和具體過程
原理就是DNA半保留復制吧過程只要記住1.DNA變性（90℃-96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下， 氫鍵斷裂，形成單鏈DNA2.退火（25℃-65℃）：系統溫度降低，引物與DNA模板結合，形成局部雙鏈。3.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP為原料，從引物
聚合酶鏈式反應
實驗方法原理實驗材料熱穩定 DNA 聚合酶旁觀者 DNA正向引物反向引物模板 DNA試劑、試劑盒擴增緩沖液氯仿dNTP 貯存液儀器、耗材聚丙烯酰胺凝膠或瓊脂糖凝膠屏蔽型槍頭離心管正向排液式移液器PCR儀實驗步驟一、材料1. 緩沖液與溶液10X 擴增緩沖液氯仿4 種 dNTP 貯存液（20 mmol/
聚合酶鏈式反應
一、材料1. 緩沖液與溶液10X 擴增緩沖液氯仿4 種 dNTP 貯存液（20 mmol/L，pH 8.0)2. 酶與緩沖液熱穩定 DNA 聚合酶3. 凝膠聚丙烯酰胺凝膠或瓊脂糖凝膠4. 核苷酸與寡聚核苷酸旁觀者 DNA正向引物（20 μmol/L）及
聚合酶鏈式反應
實驗方法原理 實驗材料 熱穩定 DNA 聚合酶旁觀者 DNA正向引物反向引物模板 DNA試劑、試劑盒 擴增緩沖液氯仿dNTP 貯存液儀器、耗材 聚丙烯酰胺凝膠或瓊脂糖凝膠屏蔽型槍頭離心管正向排液式移液器PCR儀實驗步驟 一、材料1. 緩沖液與溶液10X 擴增緩沖液氯仿4 種 dNTP 貯存液（20
PCR）聚合酶鏈式反應
?PCR技術可用于：（1）檢驗感染性疾病是否處于隱性或亞臨床狀態;（2）有效檢測癌基因的突變，準確檢測癌基因的表達量;（3）臨床應用于檢測地中海貧血的基因突變。 實驗方法原理 PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。 PCR由變性--退火--
聚合酶鏈式反應（PCR）
聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，為最常用的分子生物學技術之一。典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應組成一個循環，通過多次循環反應，使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是
聚合酶鏈式反應（PCR）
聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，為最常用的分子生物學技術之一。典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應組成一個循環，通過多次循環反應，使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是
聚合酶鏈式反應（PCR）
實驗概要聚合酶鏈式反應（Polymerase ?Chain ?Reaction，PCR）是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，為最常用的分子生物學技術之一。典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應組成一個循環，通過多次循環反應，使目的DNA得以迅速擴增。
聚合酶鏈式反應（PCR）
PCR技術可用于：（1）檢驗感染性疾病是否處于隱性或亞臨床狀態；（2）有效檢測癌基因的突變，準確檢測癌基因的表達量；（3）臨床應用于檢測地中海貧血的基因突變。實驗方法原理基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成
原位聚合酶鏈式反應和原位反轉錄聚合酶鏈式反應操作
（一）、儀器設備????英國Thermo Hybaid原位PCR儀。????（二）、操作流程??????1、原位PCR步驟?????1）預處理：?????（1）切片常規脫蠟；?????（2）0.2mol/L HCl處理10min；?????（3）5μg/ml蛋白酶K消化組織37℃10min；????
聚合酶鏈式反應檢查的簡介
聚合酶鏈式反應是一種在體外快速擴增特定基因或DNA序列的方法，故又稱為基因的體外擴增法。PCR技術類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
dna聚合酶鏈式反應的概述
這項技術有效地解決了因為樣品中DNA含量太低而難以對樣品進行分析研究的問題，被廣泛地應用于遺傳疾病的診斷、刑偵破案、基因克隆和DNA序列測定等各方面。 DNA聚合酶（DNA polymerase I）最早于1955年發現 ，而較具有實驗價值及實用性的Klenow fragment of E.
遞減聚合酶鏈式反應的簡介
遞減PCR，亦稱降落PCR(touchdown PCR)是一種PCR（聚合酶鏈式反應）方法，用來避免非特異性序列的擴增。PCR中引物的黏合溫度(annealing temperature)決定了黏合的特異性，溫度越高特異性越強，但過高則不能實現引物和模板的結合，而過低會產生大量非特異性產物。因此
聚合酶鏈式反應模板的制備
PCR的模板可以是DNA，也可以是RNA。 模板的取材主要依據PCR的擴增對象，可以是病原體標本如病毒、細菌、真菌等。也可以是病理生理標本如細胞、血液、羊水細胞等。法醫學標本有血斑、精斑、毛發等。 標本處理的基本要求是除去雜質，并部分純化標本中的核酸。多數樣品需要經過SDS和蛋白酶K處理。難
聚合酶鏈式反應的特點介紹
特異性強 PCR反應的特異性決定因素為： ①引物與模板DNA特異正確的結合； ②堿基配對原則； ③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性； ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及TaqDN
聚合酶鏈式反應的發展背景
Khorana (1971)等最早提出核酸體外擴增的設想：“經DNA變性，與合適的引物雜交，用DNA聚合酶延伸引物，并不斷重復該過程便可合成tRNA基因。”但由于當時基因序列分析方法尚未成熟，熱穩定DNA聚合酶尚未報道以及引物合成的困難，這種想法似乎沒有實際意義。加上分子克隆技術的出現提供了一種克隆
DNA聚合酶鏈式反應的概述
這項技術有效地解決了因為樣品中DNA含量太低而難以對樣品進行分析研究的問題，被廣泛地應用于遺傳疾病的診斷、刑偵破案、基因克隆和DNA序列測定等各方面。DNA聚合酶（DNA polymerase I）最早于1955年發現 ，而較具有實驗價值及實用性的Klenow fragment of E. Coli
原位聚合酶鏈式反應原位反轉錄聚合酶鏈式反應操作規程
（一）、 儀器 設備 英國Thermo Hybaid原位PCR儀。 （二）、操作流程 1、原位PCR步驟 1）預處理： （1）切片常規脫蠟； （2）0.2mol/L HCl處理10min； （3）5μg/ml蛋白酶K消化組織37℃10min； （4）Nase消化組織37℃ 30min； （5）梯度酒
原位聚合酶鏈式反應原位反轉錄聚合酶鏈式反應操作規程
（一）、儀器設備????英國?Thermo Hybaid?原位?PCR?儀。????（二）、操作流程??????1?、原位?PCR?步驟??????1?）預處理：??????（?1?）切片常規脫蠟；??????（?2?）?0.2mol/L HCl?處理?10min?；??????（?3?）?5?μ?
聚合酶鏈式反應（PCR）實驗
PCR是一種選擇性體外擴增DNA或RNA片段的方法。其特異性是由兩個人工合成的引物序列決定的。所謂引物就是與待擴增DNA片段兩翼互補的寡聚核苷酸，其本質是ssDNA片段。待擴增DNA模版加熱變性后，兩引物分別與兩條DNA的兩翼序列特異復性。此時，兩引物的3'端相對，5'向背。在合適的
聚合酶鏈式反應（PCR）實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒 MgCl2 DNA聚合酶 Buffer dNTP
聚合酶鏈式反應(PCR)技術
原理聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction PCR)是一種體外擴增特異性DNA片段的技術。它可以在體外特異地對目的基因進行大量擴增，其巧妙之處在預先設計合成二段分別與待測目的基因二端互補的引物，以起到指向定點的作用；再借助于DNA聚合酶催化的若干次擴增反應后，即可使特
什么是聚合酶鏈式反應
聚合酶鏈反應（PCR）是在試管中，能在較短的時間內使極微量的特定核酸擴增百萬倍（106～109），故又稱基因擴增技術，其敏感性遠遠超過包括放射免疫在內的所有血清學檢驗方法。其是目前世界上研究感染性疾病、遺傳性疾病的早期診斷和癌細胞基因檢測、基因突變的先進技術。只要患者體內極微量的乙肝病毒和丙肝、庚肝