酵母轉化實驗_原生質體轉化
實驗材料酵母試劑、試劑盒YPD山梨醇CaCl2-MEPEG選擇性再生瓊脂儀器、耗材水浴鍋離心機分光光度計培養箱實驗步驟1. 在實驗前2天，將轉化用酵母菌株的單菌落接種到5 ml YPD培養基中，于30℃培養過夜（如果酵母菌株是溫度敏感的應在低溫下培養）。2. 轉化前一天晚上，從5 ml 過夜培養液中取適量的菌液，接種于盛有50 ml YPD培養基的250 ml 無菌燒瓶中，再過夜培養，使細胞密度達到1~2×107細胞/ml（OD600=0.5~1.0，依據菌株的不同有一定的差別）。 3. 室溫下，1 100 g 離心5 min 沉淀細胞，細胞用10 ml 1mol/l 山梨醇溶液重懸，重復離心一次，細胞沉淀用5 ml 1 mol/l 山梨醇重懸。取適量的懸液用無菌超純水作10-6稀釋后取其中的0.1 ml 涂YPD平板，于30℃培養2天。 4. 將細胞懸液轉移到......閱讀全文
酵母轉化實驗_原生質體轉化
實驗材料酵母試劑、試劑盒YPD山梨醇CaCl2-MEPEG選擇性再生瓊脂儀器、耗材水浴鍋離心機分光光度計培養箱實驗步驟1. ?在實驗前2天，將轉化用酵母菌株的單菌落接種到5 ml YPD培養基中，于30℃培養過夜（如果酵母菌株是溫度敏感的應在低溫下培養）。2. ?轉化前一天晚上，從5 ml 過夜培養
PEG介導的原生質體轉化
PEG介導的原生質體轉化法是通過PEG的介導作用將遺傳因子轉入受體細胞原生質體中的一種方法，原生質體的制備與再生是轉化的關鍵，此外CaCl2也是不可或缺的成分。目前，多數絲狀真菌的轉化以原生質體作為感受態細胞，在一定濃度的CaCl2和PEG等條件下和需轉化的外源DNA混合完成的。因此，PEG介導的原
酵母轉化實驗
實驗材料酵母菌株質粒儀器、耗材YPD 平板SC-ura平板產孢子平板實驗步驟展開
酵母轉化實驗
實驗材料?酵母試劑、試劑盒?YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸鋰儀器、耗材?搖床水浴鍋轉子離心機培養箱實驗步驟 1.? 在開始實驗前2天，接種待轉化的酵母菌株的單菌落于5 ml YPD培養基中，于30℃恒溫搖床，培養過夜。?2.? 轉化的前一天晚上，往1 L 無菌燒瓶中加入300 ml YPAD
擬南芥原生質體制備轉化方法
實驗概要本實驗介紹了擬南芥原生質體制備轉化操作流程。主要試劑1. 纖維素酶解液：試劑15ml酶液體系11-1.5﹪ Cellulase R10 (YaKult Honsha)0.225g干粉20.2-0.4﹪ Mecerozyme R10 (YaKult Honsha)0.045g干粉30.4M m
酵母轉化實驗_乙酸鋰轉化
實驗材料酵母試劑、試劑盒YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸鋰儀器、耗材搖床水浴鍋轉子離心機培養箱實驗步驟1. ?在開始實驗前2天，接種待轉化的酵母菌株的單菌落于5 ml YPD培養基中，于30℃恒溫搖床，培養過夜。?2. ?轉化的前一天晚上，往1 L 無菌燒瓶中加入300 ml YPAD培養基，然后
酵母轉化實驗_電穿孔轉化
實驗材料酵母試劑、試劑盒二硫蘇糖醇山梨醇儀器、耗材電穿孔儀器電擊池水浴鍋實驗步驟1. ?實驗前兩天，將轉化用酵母菌株的單菌落接種于5 ml YPD培養基中，30℃過夜培養至飽和。?2. ?轉化前一天晚上，在裝有500 ml YPD培養基的2 L 無菌燒瓶中接種適量的過夜培養液，于30℃劇烈搖動培養過
酵母原生質體制備實驗
原生質體由原生質分化形成，具體包括細胞膜和膜內細胞質及其他具有生命活性的細胞器。植物和動物的如細胞核、線粒體和高爾基體等，而細菌如核糖體、擬核等。實驗材料酵母試劑、試劑盒YPD酵母消解緩沖液山梨醇抽提緩沖液貯存緩沖液液氮儀器、耗材搖床水浴鍋轉子離心機培養箱實驗步驟1. ?將酵母菌接種于YPD培養基（
原生質體融合和溶原性轉化的區別
溶原性轉換：是噬菌體的DNA與細菌染色體重組，使宿主菌遺傳結構發生改變而引起的遺傳型變異。溶原性細菌因此而獲得新的特性。原生質體融合：兩種經過處理失去細胞壁的原生質體混和可發生融合，融合后的雙倍體細胞可發生細菌染色體間的重組。簡單地區別就是溶原性轉換需要噬菌體，而原生質體融合不需要。
酵母轉化
·?????????Yeast Transformation?(Gietz Lab)LiAc/SS-DNA/PEG Transformation·?????????Yeast Transformation?(Breeden Lab)LiAc method·?????????Large-Scale Y
酵母原生質體制備
實驗材料?酵母試劑、試劑盒?YPD酵母消解緩沖液山梨醇抽提緩沖液貯存緩沖液液氮儀器、耗材?搖床水浴鍋轉子離心機培養箱實驗步驟 ? 將酵母菌接種于YPD培養基（100 ml 到20 L），劇烈搖動或強制通氣條件下培養至對數中期（OD600≈1~5）。培養物在預稱重的離心瓶中于4℃， 1 500 g 離
轉化、轉導、接合、溶原性轉換、原生質體融合的概念
? （1）轉化轉化是指受體菌直接攝取供體菌游離DNA片段，而獲得新的遺傳性狀。如活的無毒力的肺炎球菌可攝取死的有毒力的肺炎球菌DNA片段，從而轉化為有毒株。 ? （2）轉導轉導是指溫和噬菌體介導的遺傳物質從供體菌向受體菌的轉移，使受體菌獲得新的性狀。無性菌毛菌獲得非結合性耐藥因子就是通過
非洲粟酒裂殖酵母的轉化實驗_LiAc轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒腺嘌呤亮氨酸LiAc儀器、耗材YEA 平板實驗步驟1. 在 YEA 平板上培養細胞直到長成可見單菌落。2. 接種單菌落到添加有 150 mg/L 腺嘌呤、亮氨酸和/或尿嘧啶等營養缺陷互補物的 YEA 或 PM 培養基中，于允許溫度以 200 r/min 振蕩培養防止酵母菌沉積
原生質體轉化中peg8000可以高壓滅菌嗎嗎
擬南芥作為模式植物在生物學研究中有著十分重要的作用和極大的優勢。本文以Columbia野生型擬南芥為材料,用酶解法對擬南芥葉肉進行原生質體分離,用PEG介導的轉化法將外源基因轉化到原生質體中進行瞬時表達。文章著重分析了影響擬南芥葉肉原生質
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗_電穿孔轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒PEG3350儀器、耗材YPAD 液體培養基渦旋振蕩器實驗步驟1. 將菌株接種 100 ml 的 YPAD 液體培養基，30℃ 振蕩培養過夜，使細胞滴度達到每毫升 1X108?到 2X108?個細胞。2. 3000 g 離心 5 分鐘沉淀細胞，用 100 ml 滅菌水洗兩遍，
非洲粟酒裂殖酵母的轉化實驗_電穿孔轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒三梨糖醇儀器、耗材PM 或 YE 培養基實驗步驟1. 用 PM 或 YE 培養基培養細胞，至滴度到每毫升 1X107?個細胞。2. 用冰冷的過濾除菌的 1.2 mol/L 三梨糖醇洗細胞 3 遍，以降低細胞的導電性。3. 用冰冷的 1.2 mol/L 三梨糖醇重懸細胞，使滴度
轉化畢赤酵母
實驗概要本實驗介紹了畢赤酵母的轉化方法。主要試劑1. 轉化當天，配制下列試劑：存于4度5% SDS溶液RD(Regeneration Dextrose) 融化瓊脂100ml2. 溶液：轉化試劑40%PEG：用水配制40%(w/v)PEG3350(試劑純)CaT：20mMTris pH7.5，20mM
酵母的高效轉化
酵母的高效轉化1．接種5ml液體YPAD或10ml SC，30℃下振蕩培養過夜。2．計數過夜培養物細胞密度，以最終5×106個/ml的細胞密度接種50ml YPAD培養液。3．置30℃，200r/min振蕩培養至2×107個細胞/ml，通常需要3～5小時，該培養物的細胞足夠供十次轉化用。4．用50m
植物原生質體制備及轉化試劑盒使用說明
植物原生質體是指脫去全部細胞壁由質膜包被的具有生命活力的裸露細胞。它具有細胞生命特征和全能型，是細胞無性系變異和突變體篩選的重要來源，同時也是植物遺傳工程的理想受體和遺傳改良的理想材料。酶解法分離原生質體是一個常用的技術，其原理是植物細胞壁主要由纖維素、半纖維素和果膠質組成，因而使用纖維素酶、半纖維
釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗_高效轉化法
實驗材料細胞試劑、試劑盒LiAc儀器、耗材YPAD 平板YPAD 液體培養基實驗步驟1. 取 10 μl 細胞在 YPAD 平板上涂布 2 cm2，培養過夜；或者接種 5 ml 的 YPAD 液體培養基，于 30℃ 震蕩培養過夜。2. 將一瓶 YPAD 培養基于 30℃ 平衡過夜。3. 去 50 m
非洲粟酒裂殖酵母的轉化實驗
實驗材料 細胞試劑、試劑盒 腺嘌呤亮氨酸LiAc儀器、耗材 YEA 平板實驗步驟 1. 在 YEA 平板上培養細胞直到長成可見單菌落。2. 接種單菌落到添加有 150 mg/L 腺嘌呤、亮氨酸和/或尿嘧啶等營養缺陷互補物的 YEA 或 PM 培養基中，于允許溫度以 200 r/min 振蕩培養防止酵
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗
材料的準備 電穿孔轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 高分子量 DNA 試劑、試劑
非洲粟酒裂殖酵母的轉化實驗
非洲粟酒裂殖酵母的LiAc轉化法非洲粟酒裂殖酵母的電穿孔轉化法實驗材料細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒腺嘌呤 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
非洲粟酒裂殖酵母的轉化實驗
非洲粟酒裂殖酵母的LiAc轉化法 非洲粟酒裂殖酵母的電穿孔轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
釀酒酵母的電穿孔轉化法實驗
材料的準備 電穿孔轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 高分子量 DNA 試劑、試劑
畢赤酵母高效轉化實驗方案
畢赤酵母高效轉化實驗方案1.收集菌體取1mlGS115過夜培養物(OD約6-10) 分裝到1.5ml EP管中，4℃、10000g 離心1min，棄上清，沉淀用無菌水(4℃)洗滌，同樣條件下離心，棄上清。2.菌體處理加入1ml處理液，室溫下放置20min。處理液：10mM LiAc10mM DTT0
釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗_轉化材料的制備
實驗材料DNA試劑、試劑盒TE 緩沖液雙蒸水儀器、耗材磁力攪拌器玻璃燒杯實驗步驟一、單鏈載體 DNA 的制備1. 在 100 ml 滅菌 TE 緩沖液中溶解 200 mg 高分子量 DNA，置于磁力攪拌器上劇烈攪拌 2~3 個小時以混勻。2. 將載體 DNA 溶液分裝成 9 個 10 ml 和 10
釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗_轉化含有質粒菌株
實驗材料細胞試劑、試劑盒YPAD儀器、耗材培養瓶SC 減樣選擇培養基實驗步驟1. 在一個 250 ml 的培養瓶中，接種該菌株到 25 ml 相應的 SC 減樣選擇培養基中，200 r/min 培養過夜。2. 檢測每毫升細胞數，按 2.5X108?個細胞計算所需培養物體積。3. 將該體積的培養物加到
質粒的酵母直接轉化
實驗方法原理將待測基因與Gal4或LexA或其他合適蛋白的DNA結合域融合構建誘餌質粒；將誘餌質粒轉化缺乏報告基因啟動子的酵母細胞株中，選擇被轉化的酵母；再將文庫質粒轉化到酵母中實驗材料單菌落試劑、試劑盒PLATE溶液載體DNA轉化質粒DNA儀器、耗材離心管離心機實驗步驟1、 用牙簽從平板中挑取單菌
質粒的酵母直接轉化
1．用牙簽從平板中挑取單菌落（直徑2～3mm），轉移到1.5ml的無菌離心管中。2．將10μl載體DNA（100μg）與10μl轉化質粒DNA混合，振蕩均勻。（若轉化DNA是用未經RNA酶處理的“mini－prep DNA”方法制得，則不需加載體DNA）。3．加0.5ml PLATE溶液，振蕩。PL