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實驗材料 酵母試劑、試劑盒 YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸鋰儀器、耗材 搖床水浴鍋轉子離心機培養箱實驗步驟 1. 在開始實驗前2天，接種待轉化的酵母菌株的單菌落于5 ml YPD培養基中，于30℃恒溫搖床，培養過夜。 2. 轉化的前一天晚上，往1 L 無菌燒瓶中加入300 ml YPAD培養基，然后接種適量的過夜培養液，再于30℃培養過夜，到細胞密度為1×107 細胞/ml （OD600≈0.3~0.5，依據菌株而定）， 為了獲得2~3倍高的轉化效率，用YPAD稀釋培養液至細胞密度為2×106細胞/ml。然后培養生長2~3代（2~4 h）。 3. 培養液在室溫條件下，4 000 g 離心5 min，收集細胞。細胞用10 ml 無菌超純水重懸，然后轉移到一個更小一些的離心管中，再于室溫下，5 000~6 000 g 離心5 min......閱讀全文
實驗材料 載體和酵母菌 試劑、試劑盒 緩沖液和溶液 SD
實驗概要本實驗介紹了酵母表達載體的構建、酵母轉化方法及酵母抗逆實驗。主要試劑試劑配制：1 .1 M Tris.Cl(pH 7.5)(100 ml)：12.1g Tris堿，加80 ml ddH2O，濃HCl調pH 7.5，定容至100 ml；2. 0.5 M EDTA(pH 8.0) (100 ml
作為后基因組時代出現的新興研究領域之一, 蛋白質組學(proteomics)正受到越來越多的關注。 蛋白質組學的研究目標是對機體或細胞的所有蛋白質進行鑒定和結構功能分析。 蛋白質組學的研究不局限任何特定的方法。 高分辨率的蛋白質分離技術如二維凝膠電泳和高效液相層析, 經典的蛋白質鑒定方法如氨
作為后基因組時代出現的新興研究領域之一, 蛋白質組學(proteomics)正受到越來越多的關注。 蛋白質組學的研究目標是對機體或細胞的所有蛋白質進行鑒定和結構功能分析。 蛋白質組學的研究不局限任何特定的方法。 高分辨率的蛋白質分離技術如二維凝膠電泳和高效液相
實驗概要本實驗將釀酒酵母作為胞內晶體蛋白的攜帶和表達宿主，同時，作為可能的營養體喂養海洋線蟲P. redivivus將所表達的目的蛋白導入線蟲機體，觀察線蟲的生長、發育、繁殖或是死亡情況，探討胞內晶體蛋白對昆蟲病原線蟲以外的線蟲是否具有營養作用。為此，首先構建一種重組大腸桿菌，其所攜帶的重組質粒能夠
酵母雙雜交系統的實驗步驟 1. 將報告基因p8op-LacZ轉化酵母EGY48菌株，用培養基SD/-Ura篩選。2. 同時構建DNA文庫，并純化足夠的質粒以轉化酵母細胞。3. 構建DNA-BD/靶蛋白質粒pLexA-X，作為釣餌（bait）。4. 將
實驗概要本實驗制備了酵母轉化質粒，快速從轉化酵母菌中分離了用于Southern分析的基因組DNA。主要試劑2％ Triton X－100，1％SDS，100mmol/L NaCl，10mmol/L Tris-HCl(pH8)，1mmol/L Na2EDTA，苯酚：氯仿：已戊醇（25：24：1），YP
方法轉化文庫1. 挑選一個在第一階段的原始對照試驗中狀態最好的表達誘餌蛋白和 lexAop-lacZ 報道子的酵母菌落，接種于 20 ml CM(Glu)-Ura-His 液體培養基中，30°C 搖動過夜培養。重要：應該在用文庫重新轉化之前 7~10d 內，將誘餌蛋白和 lexAop-lacZ 報道
1、確定目標對象：也就是你所有轉的目的物是什么東西？ 細胞系和細胞類型 細胞類型包括人類、哺乳動物、細菌、植物、藻類、霉菌、寄生蟲等 細胞系包括CHO, COS, Jurkat, Saccharomyce
實驗概要本實驗將在構建了大蒜重金屬抗性基因表達載體并轉入大腸桿菌DH5α的基礎上，選擇鑒定準確的質粒轉化酵母細胞，對轉化子進行了PCR鑒定和RT-PCR分析，及重金屬抗性實驗。主要試劑YPD培養基，醋酸鋰，PEG(50%)，乙醇，少量酵母菌總RNA快速抽提試劑盒主要設備搖床，離心機，水浴鍋，PCR儀
酵母感受態細胞制備可以：（1）用于建立酵母轉化體系；（2）用于酵母表達系統構建；（3）用于酵母其他分子生物學研究。實驗方法實驗材料釀酒酵母 試劑、試劑盒YPDA液體培養基 蒸餾水 甘油 二甲基亞砜 儀器、耗材培養皿 離心機 離心管 冰箱 實驗步驟一、試劑與耗材 1. 試劑 細菌
實驗方法原理 實驗材料 待轉化的酵母菌株試劑、試劑盒 YPD培養基YPAD培養基：添加30 mg L腺嘌呤半硫酸的YPD培養基高純無菌水l0×TE緩沖液pH 7.5無菌10×乙酸鋰儲液：1 mol L乙酸鋰pH 7.5 (用稀乙酸調pH)過濾除菌DNA ：高分子質量單鏈載體DNA和待轉化DN
酵母感受態細胞制備可應用于：（1）建立酵母轉化體系；（2）酵母表達系統構建；（3）酵母其他分子生物學研究。實驗方法原理感受態是受體最容易接受外源DNA片段并實現轉化的一種生理狀態，用對應化學物質處理細胞后，細胞逐漸形成感受態細胞并進行轉化。化學法簡單，快速，穩定，重復性好，廣泛用于外源基因的轉化。實
實驗方法原理將待測基因與Gal4或LexA或其他合適蛋白的DNA結合域融合構建誘餌質粒；將誘餌質粒轉化缺乏報告基因啟動子的酵母細胞株中，選擇被轉化的酵母；再將文庫質粒轉化到酵母中實驗材料單菌落試劑、試劑盒PLATE溶液載體DNA轉化質粒DNA儀器、耗材離心管離心機實驗步驟1、 用牙簽從平板中挑取單菌
實驗概要本實驗制備了酵母感受態細胞，轉化細胞在以葡萄糖為碳源的SD培養基中誘導后，對突變體進行了透射電鏡觀察。主要試劑SD培養基配方:12 g/L NaOH；20 g/L琥珀酸(Succinnic acid )；事先將這兩種藥品溶解，再加下述藥品；1.7 g/L，無硫酸銨的酵母氮源(Yeast Ni
利用雙雜交系統相互作用阱／篩選特定蛋白的肽適配體實驗實驗方法原理 實驗材料 DNA酵母株試劑、試劑盒 PCR 引物聚乙二醇甘油存儲液Tris·ClX-gal 平板完全極限（CM） 缺失成分培養基和平板儀器、耗材 30℃ 和 42℃ 培養箱或水浴實驗步驟 實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材」具體見「其
試劑1M LiCl <用去離子蒸餾水配制，0.22um濾膜過濾除菌；必要時用消毒去離子水稀釋>50% PEG3350 <Sigma P3640 用去離子蒸餾水配制，0.45um濾膜過濾除菌，用較緊的蓋子的瓶子分裝>(氯化鋰轉化法只能PEG3350,不能用PEG80
化學法 試劑盒制備法 實驗方法原理 感受態是受體最容易接受外源DNA片段并實現轉化的一種
第二階段 篩選一個相互作用子材料緩沖液和溶液將貯存液稀釋至適當的濃度二甲基亞砜（DMSO)乙醇可選擇，請參見步驟 9。凍存轉化體用的無菌甘油溶液65% 無菌甘油0.1mol/LMgS0425 mmol/L Tris-Cl(pH8.0)TE(pH7.5)（無菌）TE(pH7.5)，含 0.
乙酸鋰轉化 電穿孔轉化 單鏈高分子質量載體DNA的制備 實驗方法原理
實驗材料 酵母菌試劑、試劑盒 CM培養基乙酸鋰PEGTEDMSO甘油氨芐青霉素儀器、耗材 離心機分光光度計搖床培養箱實驗步驟 1. 為了轉化文庫，將約20 ml 含pSH18-34和pBait 的酵母菌EGY48培養液接種到Glc/CM-Ura-H
實驗方法原理捕捉相互作用蛋白的第一步是構建能夠表達 LexA 與目的蛋白的融合體的質粒。這種質粒轉化到包含 LEU2 和lacZ 報道基因的報道酵母株中，并要行一系列的對照實驗來鑒定所構建的誘餌蛋白是否適用，是否需要修飾，或是否應改變酵母菌報道條件。這些對照實驗實現了誘餌蛋白在酵母菌中作為一種穩定蛋
氣相色譜（GC）和高效液相色譜（HPLC）早已進入生物技術領域。而將這兩種分離技術與頂空固相微萃技術 (SPME-HS) 相結合，則可用小型實驗的方式在經典的頂空小瓶中對酶反應和物質轉化過程方便地監測和精確地復制。 在酶和微生物反應過程中起始物質借助于生物催化劑例如酶、微生物、植物和動物細胞的作
離心機和轉子Sorvall RT6000 離心機，H1000B MPC 和 H6000A MPC 轉子（離心微量滴定板用）專用設備玻璃珠（直徑 0.45 mm, 無菌；Sigma)微量滴定板（24 孔或 96 孔 [可選])重復用移液管可選，請參見步驟 1。附加試劑此方案的步驟 2 需要第 1 章方
實驗方法原理 捕捉相互作用蛋白的第一步是構建能夠表達 LexA 與目的蛋白的融合體的質粒。這種質粒轉化到包含 LEU2 和lacZ 報道基因的報道酵母株中，并要行一系列的對照實驗來鑒定所構建的誘餌蛋白是否適用，是否需要修飾，或是否應改變酵母菌報道條件。這些對照實驗實現了誘餌蛋白在酵母菌中作為
SW480 [SW-480] 人結腸腺癌細胞 酵母雙雜交實驗常見問題 1.如果誘餌蛋白對酵母細胞是有毒的，該怎么辦？ 在某些情況下，在液體培養基中培養不好的菌珠可以在固體培養基上生長得很好。首先重懸克隆于1ml的SD/–Trp，接著將重懸液平鋪于
NCI-N87 [N87]人胃癌細胞 酵母雙雜交實驗常見問題 1.如果誘餌蛋白對酵母細胞是有毒的，該怎么辦？ 在某些情況下，在液體培養基中培養不好的菌珠可以在固體培養基上生長得很好。首先重懸克隆于1ml的SD/–Trp，接著將重懸液平鋪于5 個100-mm的SD/–Tr
實驗材料待轉化的酵母菌株試劑、試劑盒 1 mol L 二硫蘇糖醇（DTT過濾除菌并儲存在-20℃)1 mol L山梨醇山梨醇選擇平板儀器、耗材電穿孔儀：如Bio-Rad公司的帶脈沖控制器的Gene Pulser或GIBCO BRL公司的 Cell-Porator 0. 2 cm間隙的一次性電穿孔槽（
實驗方法原理 根據該方案制備的酵母 DNA 可以用作 PCR 反應的模板。在 E. coli 和 Saccharomyces cerevisiae 中均能復制的穿梭質粒也可以從酵母中提取，并且可以用于轉化 E. coli。實驗材料 酵母細胞試劑、試劑盒 乙醇酚氯仿醋酸鈉STES 緩沖液TE儀器、耗材
鑒定誘餌蛋白（半乳糖苷酶） 鑒定誘餌蛋白（LacZ 的活性分析） 相互作用蛋白捕獲 實驗方法原理