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瓊脂糖核酸電泳實驗1.用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈，放在制膠平板上，封閉模具邊緣，架 好梳子；2.根據欲分離 DNA 片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠：準確 稱量瓊脂糖干粉，加入到配膠用的三角燒瓶內，定量加入電泳緩沖液（一般20~30 ml）；3.放入到微波爐內加熱熔化。冷卻片刻，加入一滴熒光染料，輕輕旋轉以充分 混勻凝膠溶液，倒入電泳槽中，待其凝固；4.室溫下 30~45 分鐘后凝膠完全凝結，小心拔出梳子，將凝膠安放在電泳槽內 ； 5.向電泳槽中倒入電泳緩沖液，其量以沒過膠面 1mm 為宜，如樣品孔內有氣 泡，應設法除去；6.在 DNA 樣品中加入 10×體積的載樣緩沖液（load ing buffer），混勻后，用槍 將樣......閱讀全文
實驗材料 λ噬菌體臂 大腸桿菌菌株 用于λ噬菌體的包裝抽提物 試劑、試劑
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
實驗方法原理常規聚丙烯酰胺凝膠電泳后的檢測，對于不同的目的，應采用不同的檢測方法。由于這種電泳方法不破壞蛋白質的生物活性，所以可選用的檢測方法很多。試劑、試劑盒丙烯酰胺單體貯液Tris-甘氨酸緩沖液貯液電極緩沖液樣品緩沖液過硫醆銨濃縮膠緩沖液貯液分離膠緩沖液貯液實驗步驟一、早期染色方法用染料和生物大
第一章質粒DNA 的分離、純化和鑒定 第二章DNA 酶切及凝膠電泳 第三章大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重組質粒的連接、轉化及篩選 第六章基因組DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技術 第八章聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆 第九章分
一、瓊脂糖凝膠的特點 天然瓊脂（agar）是一種多聚糖，主要由瓊脂糖（agarose，約占80％）及瓊脂膠（agaropectin）組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質，不帶電荷，而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖，由于這些基團帶有電荷，
分子雜交技術 互補的核苷酸序列通過Walson-Crick 堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA 分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DN
DNA電泳可用于：（1）分離不同大小的DNA片段；（2）鑒定目的DNA片段；（3）純化和回收DNA片段。實驗方法原理DNA瓊脂糖凝膠電泳的基本原理是利用DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時具有的電荷效應和分子篩效應。電荷效應是指DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電，在電場中向正極移動，且相同數量的雙鏈
電泳法 實驗方法原理 DNA瓊脂糖凝膠電泳的基本原理是利用DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時具有的電荷
利用核苷酸交換和剪切技術進行DNA碎裂和定向進化 實驗材料 T4 DNA 連接
瓊脂糖凝膠中DNA的回收可應用于：（1）哺乳動物細胞轉化；（2）放射性標記。難度系數 5.0共1人點評打分點評實驗，有機會獲丁當獎勵 +收藏 3人收藏瓊脂糖凝膠中DNA的回收（DEAE-纖維素膜電泳）標簽： 瓊脂糖凝膠 DNA的回收 DE
實驗材料 大腸桿菌菌株 HB101 質粒 pSPL3 COS-7 細胞 載體 pBluescriptⅡ
實驗原理瓊脂糖凝膠電泳常用于分離、鑒定 DNA、RNA 分子混合物，以瓊脂凝膠作為支持物，利用 DNA 分子在電場中時的電荷效應和分子篩效應，達到分離混合物的目的。DNA 分子在高于其等電點的溶液中帶負電，在電場中由陰極向陽極運動。在一定的電場強度下，忽略DNA分子攜帶的電荷，DNA 分
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。 3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單
帶電荷的物質在電場中的趨向運動稱為電泳。電泳的種類多，應用非常廣泛，它已成為分子生物學技術中分離生物大分子的重要手段。瓊脂糖凝膠電泳由于其操作簡單、快速、靈敏等優點，已成為分離和鑒定核酸的常用方法。實驗目的：掌握瓊脂糖凝膠電泳的原理，學習瓊脂糖凝膠電泳的操作。實驗材料：質粒DNA、BAC、植物總DN
帶電荷的物質在電場中的趨向運動稱為電泳。電泳的種類多，應用非常廣泛，它已成為分子生物學技術中分離生物大分子的重要手段。瓊脂糖凝膠電泳由于其操作簡單、快速、靈敏等優點，已成為分離和鑒定核酸的常用方法。實驗目的：掌握瓊脂糖凝膠電泳的原理，學習瓊脂糖凝膠電泳的操作。實驗材料：質粒DNA、BAC、植物總DN
在 λ 噬菌體中構建基因組 DNA 文庫的步驟與在黏粒載體中的步驟基本一致。在這兩種系統中，真核 DNA 在體外與載體 DNA 連接，形成能包裝到 λ 噬菌體顆粒中的多聯體。構建在 λ 噬菌體中的文庫以具有感染性的重組噬菌體形式貯存和增殖。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理
一、瓊脂糖凝膠的瓊脂糖凝膠的制備特點 天然瓊脂（agar）是一種多聚糖，主要由瓊脂糖（agarose，約占80％）及瓊脂膠（agaropectin）組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質，不帶電荷，而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖，由于這些基團帶有電荷，在電場作用下能產生較
酶切基礎知識DNA酶切一般分為質粒直接酶切和PCR產物酶切第一節 DNA酶切及凝膠電泳 一.DNA的限制性內切酶酶切分析 限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上,并切割雙鏈DNA。它可分為三類:Ⅰ類和Ⅲ類酶在
一、瓊脂糖凝膠的特點 天然瓊脂（agar）是一種多聚糖，主要由瓊脂糖（agarose，約占80％）及瓊脂膠（agaropectin）組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質，不帶電荷，而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖，由于這些基團帶有電荷，在電場作用下能產生較強的電滲現象，加之硫
瓊脂糖凝膠中的核酸通過染色，可以在波長為 300 nm 的紫外燈下檢測。介紹瓊脂糖凝膠中核酸染色的兩種方法：溴化乙錠（ethidium bromide, EB ) 染色法和 SYBR Gold 染色法。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理瓊脂糖凝膠中的核酸通過染色，可以在波長
這一實驗方案分為 6 個階段。第 1 階段：降解 RNA 的去磷酸化; 第 2 階段：完整 RNA 去帽; 第 3 階段：RNA 寡核苷酸的制備; 第 4 階段：RNA 寡核苷酸與細胞 RNA 的連接; 第 5 階段：反轉錄; 第 6 階段：擴增。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康
瓊脂糖凝膠電泳可以用于：（1）檢測PCR結果；（2）分離不同大小的DNA條帶。實驗方法原理瓊脂糖是 D- 和 L- 半乳糖殘基通過 α (1→3)和 β (1→4) 糖苷鍵交替構成的線狀聚合物。L- 半乳糖殘基在 3 和 6 位之間形成脫水連接。瓊脂糖鏈形成螺旋纖維，后者再聚合成半徑 20~30 n
實驗方法原理 在 λ 噬菌體中構建基因組 DNA 文庫的步驟與在黏粒載體中的步驟基本一致。在這兩種系統中，真核 DNA 在體外與載體 DNA 連接，形成能包裝到 λ 噬菌體顆粒中
實驗方法原理 瓊脂糖是 D- 和 L- 半乳糖殘基通過 α (1→3)和 β (1→4) 糖苷鍵交替構成的線狀聚合物。L- 半乳糖殘基在 3 和 6 位之間形成脫水連接。瓊脂糖鏈形成
DNA瓊脂糖凝膠電泳 實驗方法原理 利用DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時具有的電荷效應和分子篩效應。
DNA電泳可用于：（1）分離不同大小的DNA片段；（2）鑒定目的DNA片段；（3）純化和回收DNA片段。實驗方法原理利用DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時具有的電荷效應和分子篩效應。電荷效應是指DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電，在電場中向正極移動，且相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，能以
一次雙向消減，需要總量為 2ug 的基因組 DNA 或 cDNA。大多數分離 RNA 和基因組DNA 的方法都適用于本實驗（Sambrooketal.1989;ChomczynskiandSacchi1987;Farrell1993)。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展，新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展，新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
本方案使用核酸酶 BAL31(從海洋細菌 Alteromonas espejiana BAL31 中純化）在克隆的 DNA 片段中產生單向或雙向缺失。BAL31 是一個復合酶，它以非同步的方式消化雙鏈靶 DNA。因此與諸如外切核酸酶Ⅲ這類的加工酶相比，BAL31 產生的缺失更具有不均一性（請見方案