農桿菌感受態的制備和轉化
農桿菌感受態細胞主要用于將目的基因導入植物細胞。實驗方法原理主要原理是通過電擊法或CaCl2、RbCl(KCl)等化學試劑處理，使農桿菌細胞膜的通透性發生暫時性的改變，成為能允許外源DNA分子進入的感受態細胞。實驗材料農桿菌重組質粒試劑、試劑盒鏈霉素YM液體培養基CaCl2溶液甘油儀器、耗材離心管Eppendorf管冰箱冷凍離心機接種環錐形瓶實驗步驟一、農桿菌感受態細胞的制備1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml鏈霉素平板劃線，28℃培養。2. 挑取單菌落接種于5ml YM液體培養基中，220rpm 28℃振蕩培養12-16 hr。3. 取2ml菌液轉接于100ml YM液體培養基中，28℃ 220rpm振蕩培養至OD600=0.5。4. 轉入無菌離心管，5000rpm離心5min,去上清液。5. 加入10ml預冷的0.1M的CaCl2溶液，輕輕懸浮細胞，冰上放置20min。4℃5000rpm離心5min，去上清。......閱讀全文
農桿菌的轉化
實驗概要本實驗介紹了農桿菌感受態細胞的制備及轉化方法。主要試劑YEP固體培養基，含有相應抗生素的YEP培養基，0.15mM NaCl，20mM CaC12，液氮，選擇平板(Rif 100ug/mL加Gm 50ug/mL加Kan 50ug/mL )主要設備培養箱，搖床，離心機，-80℃冰箱實驗步驟1.
什么是發根農桿菌？
發根農桿菌是一類宿主范圍廣泛的G-土壤桿菌。農桿菌在侵染植物后，能夠誘導植物產生大量高度分支的不定根，通常稱為發根。發根農桿菌侵染植物所產生的發根具有生長速度快、分化程度高、生理生化和遺傳性穩定、易于進行操作控制等特點。 土壤發根農桿菌(Ag.rhizogenes)是一種侵染性非常廣泛的土壤細
農桿菌介導法簡介
農桿菌是普遍存在于土壤中的一種革蘭氏陰性細菌，它能在自然條件下趨化性地感染大多數雙子葉植物的受傷部位 [1] ，并誘導產生冠癭瘤或發狀根。根癌農桿菌和發根農桿菌中細胞中分別含有Ti質粒和Ri質粒，其上有一段T-DNA，農桿菌通過侵染植物傷口進入細胞后，可將T-DNA插入到植物基因組中。因此，農桿
農桿菌介導水稻轉化
實驗概要本實驗介紹了農桿菌介導的水稻轉化。主要試劑GUS染色液：100 mmol/L NaPO4 (pH7.0)；0.1% Triton X-100；10 mmol/L EDTA；0.5 mmol/L亞鐵氰化鉀頭抱霉素，乙醇，次氯酸鈉溶液主要設備高速離心機，培養箱，人工氣候室實驗材料水稻種子實驗步驟
農桿菌介導法概述
農桿菌介導法起初只被用于雙子葉植物中，農桿菌的介導轉化在一些單子葉植物(尤其是水稻)中也得到了廣泛應用。此外，生物技術學家還可以通過發根農桿菌轉化，在液體培養基中培養高密度的根，作為一種在轉基因植物中獲得大量蛋白質的方法。 農桿菌Ti質粒的T-DNA可高效率地整合到植物受體細胞的染色體上并得到
農桿菌的分類介紹
農桿菌主要有兩種：根癌農桿菌（Agrobacterium tumefaciens）和發根農桿菌（Agrobacterium rhizogenes）。根癌農桿菌的Ti質粒和發根農桿菌的Ri質粒上有一段T-DNA，農桿菌通過侵染植物傷口進入細胞后，可將T-DNA插入到植物基因組中。因此，農桿菌是一種
農桿菌介導轉化擬南芥
實驗概要1. 學習真核生物的轉基因技術及農桿菌介導的轉化原理。2. 掌握農桿菌介導轉化擬南芥 的實驗方法，了解擬南芥的生理特點及在基因工程實驗中應用實驗原理擬南芥（Arabidopsis thaliana）是一種十字花科植物，二年生草本，高7～40厘米，花期3～5月。廣泛用于植物遺傳學、發育生物學和
農桿菌轉化法培養抗蟲棉
（1）圖中A為基因表達載體；農桿菌中的Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上．根據農桿菌的這一特點，在構建基因表達載體時，如果將目的基因插入到Ti質粒的T-DNA上，通過農桿菌的轉化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上．（2）①過程是將基因表達載
農桿菌轉化法的原理
選擇一種特制的空質粒載體（如PBI121質粒載體），其上要求含有T-DNA邊界序列（此處可參見詞條雙元表達載體系統），在序列之間含有復制原點、抗性基因、GUS報告基因、Hind Ⅲ和BamH I 等酶切位點（以上這些構成了一個T-DNA區）。先通過雙酶切反應酶切空質粒載體和目的基因，再通過酶連反應連
農桿菌介導的植物遺傳轉化
農桿菌介導的植物遺傳轉化 【目的】：學習和掌握共培養過程關鍵技術環節及轉基因植株的篩選。 【要求】：以煙草葉片為材料，與對數生長期的帶有外源基因的農桿菌共培養，遺傳轉化煙草葉片，篩選抗性再生植株。 【內容】：1、煙草無菌苗的準備 2、帶有外源基因農桿菌的培養
農桿菌的生存形狀相關介紹
根癌農桿菌生活在土壤，特別是耕種過的田地里，因為經過耕種的土壤疏松，適宜根癌農桿菌生長。根癌農桿菌的菌體為棒狀，有兩三個微米長，靠幾根鞭毛運動，鞭毛一般生在側邊。用顯微鏡放大到1000倍時，人們就能把它看得很清楚了。 在許多雙子葉植物靠近地面的根莖交界處，根癌農桿菌能誘發一種帽狀腫瘤，人們稱之
發根農桿菌的特征有哪些？
發根農桿菌Ri質粒誘發植物細胞大量繁殖，形成發根瘤。它與根癌農桿菌Ti質粒所誘發的冠癭瘤有相似之處，也有其獨特的特征。兩者相似于： （1）根癌農桿菌的大質粒Ti質粒是誘發冠癭瘤所必須的，發根農桿菌的大質粒Ri質粒是誘發發根瘤所不可缺少的，兩種瘤都是由大質粒所引起的； （2）發根農桿菌所感染的
農桿菌介導的植物遺傳轉化
實驗概要以煙草葉片為材料，與對數生長期的帶有外源基因的農桿菌共培養，遺傳轉化煙草葉片，篩選抗性再生植株。掌握共培養過程關鍵技術環節及轉基因植株的篩選。主要試劑70%乙醇0.1% HgCl2無菌水卡那霉素(kan)羧芐青霉素(Cb)培養基：LB培養基100ml；MS 鹽溶液(pH 7.0)100ml，
農桿菌介導的植物遺傳轉化
農桿菌介導的植物 ?遺傳轉化 【目的】：學習和掌握共培養過程關鍵技術環節及轉基因植株的篩選。 【要求】：以煙草葉片為材料，與對數生長期的帶有外源基因的農桿菌共培養，遺傳轉化煙草葉片，篩選抗性再生植株。 【內容】：1、煙草無菌苗的準備 2、帶有外源基因農桿菌的培養 3、煙草葉片與對
關于發根農桿菌的分類介紹
根誘導質粒( root inducing plasmid, Ri質粒)是發根農桿菌( Agrobacterium rhizogenes)染色體外的遺傳物質。在帶有完整T-DNA的Ri質粒的轉化植物細胞中都能檢測到一類特殊的非蛋白態的氨基酸，這一類氨基酸被總稱為冠癭堿。在Ri質粒轉化細胞中檢測到的
發根農桿菌誘根現象觀察
一、原理發根農桿菌是一種寄主范圍非常廣泛的土壤細菌，可以侵染幾乎所有的雙子葉植物和少數單子葉植物。植物傷口感染發根農桿菌后，一到數周出現毛狀根。毛狀根沒有向地性，除菌后在無激素培養基上可迅速生長并產生許多分枝。通過培養可直接從毛狀根上再生植株，或經愈傷組織途徑分化出再生植株。發根農桿菌轉化系統是實現
農桿菌介導的遺傳轉化程序
實驗概要農桿菌侵染實驗實驗步驟(1) 農桿菌菌液的制備??將農桿菌接種于附加50mg/L Km、50mg/L Sm、50mg/L Rif的YEB固體培養基上，28℃暗培養，至長出單菌落。用接菌環挑取單菌落，接種在5mL含相應抗生素的YEB液體培養基中，于28℃，200r/min 培養過夜。待
農桿菌介導法的過程介紹
根癌農桿菌的Ti質粒上有一段轉移DNA（T-DNA），具有向植物細胞傳遞外源基因的能力，而細菌本身并不進入受體細胞。農桿菌轉化植物細胞涉及一系列復雜的反應，主要包括：①受傷的植物細胞為修復創傷部位，釋放一些糖類、酚類等信號分子。 ②在信號分子的誘導下，農桿菌向受傷組織集中，并吸附在細胞表面。
梨樹農桿菌轉化體系的建立
實驗概要??? 以西洋梨豐產為試材建立農桿菌轉化體系，將抗真菌γ-硫堇蛋白Rs-afp1基因轉入梨離體葉片獲得了抗病的轉化植株。?主要試劑1. YEB（5.0g/L牛肉胨，5.0g/LDifco Bacto提取物，1.0g/L酵母提取物，5.0g/L蔗糖，15g/L瓊脂，50mg/L卡那霉素，pH值
農桿菌介導的大麥轉化方法實驗
實驗材料植物凝膠pBract 質粒pSoup 質粒試劑、試劑盒利福平卡那霉素儀器、耗材MG L 培養基實驗步驟1. 組織培養基的準備提前準備好所需濃度 2 倍的植物凝膠，高壓滅菌（見注 3 ) 。所有的組織培養基都要過濾滅菌，因此除了無菌的儲備液，其他培養基成分按所需濃度 2 倍的量混勻，調到合適的
關于農桿菌介導法的特點介紹
轉基因技術的飛速發展為生物定向改良和分子育種提供了一種較佳的方法，并使其成為基因工程和育種的最有效途徑，應用較廣泛的轉基因技術有農桿菌介導法、花粉通道法、顯微注射法、基因槍法、離子束介導法等等，其中農桿菌介導法以其費用低、拷貝數低、重復性好、基因沉默現象少、轉育周期短及能轉化較大片段等獨特優點而
發根農桿菌用于生產次生代謝產物
利用植物細胞培養技術生產次生代謝物真正實現商品化生產的還為數甚少，其主要原因在于植物細胞生長緩慢，有些還需要激素維持，次生代謝物含量太低，以及生產能力不穩定等，因而工業化生產的成本太高。發根能合成植物特征的次生代謝產物，而且其含量往往比植物的含量還高，尤其是它的穩定性和生長迅速的特點是工業化生產
農桿菌介導的大麥轉化方法實驗
實驗材料?植物凝膠pBract 質粒pSoup 質粒試劑、試劑盒?利福平卡那霉素儀器、耗材?MG L 培養基實驗步驟 1. 組織培養基的準備提前準備好所需濃度 2 倍的植物凝膠，高壓滅菌（見注 3 ) 。所有的組織培養基都要過濾滅菌，因此除了無菌的儲備液，其他培養基成分按所需濃度 2 倍的量混勻
農桿菌介導的大麥轉化方法實驗
實驗材料：植物凝膠 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? pBract 質粒 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??
關于農桿菌的基本內容介紹
農桿菌是指生活在植物根表面依靠由根組織滲透出來的營養物質生存的一類普遍存在于土壤中的革蘭氏陰性細菌。農桿菌主要有兩種：根癌農桿菌和發根農桿菌。根癌農桿菌能在自然條件下趨化性地感染140多種雙子葉植物或裸子植物的受傷部位，并誘導產生冠癭瘤。引發冠癭瘤的原因是，Ti質粒上的T-DNA上有8個左右的基
農桿菌侵染擬南芥花序的轉化方法
制備轉化用的農桿菌菌液準備：1．滅菌 試管 400毫升細長燒杯2瓶，離心瓶4-6個（250ml）。2．試劑：YEP 1200ml（每瓶300ml 共4瓶）+Kan 1;1000，Rif1:500。? ?1/2MS+2%蔗糖（滅菌115度20分鐘），Silwet在-20℃貯存。3．步驟：共轉化農桿菌：
農桿菌感受態的制備和轉化
雙元載體的農桿菌轉化1.1農桿菌感受態細胞的制備1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml鏈霉素平板劃線，28℃培養。1.1.2. 挑取單菌落接種于5ml YM液體培養基中，220rpm 28℃振蕩培養12-16 hr。1.1.3. 取2ml菌液轉接于100ml YM液體培養基中，
農桿菌感受態的制備和轉化
雙元載體的農桿菌轉化1.1農桿菌感受態細胞的制備1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml鏈霉素平板劃線，28℃培養。1.1.2. 挑取單菌落接種于5ml YM液體培養基中，220rpm 28℃振蕩培養12-16 hr。1.1.3. 取2ml菌液轉接于100ml YM液體培養基中，
農桿菌感受態細胞制備實驗
農桿菌感受態細胞制備可用于：（1）建立農桿菌轉化體系；（2）農桿菌表達系統構建；（3）農桿菌其他分子生物學研究。實驗方法原理在基因工程操作中，感受態細胞的制備和質粒的轉化是一項基本技術。感受態是細菌細胞具有的能夠接受外源DNA的一種特殊生理狀態。農桿菌的感受態可用CaCl2處理而誘導產生。將正在生長
農桿菌感受態細胞制備實驗
氯化鈣法 電轉農桿菌感受態 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在基因工程操作中，感受態細胞的制備和質粒的轉化是一項基本技術。感受態是細菌細胞具有的能夠接受外源DNA的一