制備轉化用的農桿菌菌液準備:1.滅菌 試管 400毫升細長燒杯2瓶,離心瓶4-6個(250ml)。2.試劑:YEP 1200ml(每瓶300ml 共4瓶)+Kan 1;1000,Rif1:500。 1/2MS+2%蔗糖(滅菌115度20分鐘),Silwet在-20℃貯存。3.步驟:共轉化農桿菌:于中午12點接菌于有YEP培養液的試管中10ul:10ml接種。28℃,3000rpm搖過夜,約30小時,次日下午6點將已搖活的菌按(1:400)及750ul菌液轉至漢300毫升YEP+K50+Rif中培養28℃,300rpm約14小時,次日上午8點測OD值,用YEP+Rif作為空白對照,當菌液達到OD600為1.5~3.0之內時,可收集菌體于250ml離心瓶(滅菌),4℃,4000g 離心10min 。用10%蔗糖(含0.02%silwet)稀釋至OD600 約為0.8-- 1.0左右即,用......閱讀全文
實驗概要1. 學習真核生物的轉基因技術及農桿菌介導的轉化原理。2. 掌握農桿菌介導轉化擬南芥 的實驗方法,了解擬南芥的生理特點及在基因工程實驗中應用實驗原理擬南芥(Arabidopsis thaliana)是一種十字花科植物,二年生草本,高7~40厘米,花期3~5月。廣泛用于植物遺傳學、發育生物學和