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這個方案只是用 RNA 酶處理 PCR 產物的一種方法。有很多可選擇和有效的途徑來純化 PCR 產物以除去引物，接著用酶處理 PCR 產物，然后再除去酶。值得注意的是用 PCR儀設置溫浴程序是很方便的。可以在加熱步驟完成后選擇加上“冷卻”步驟，即在冷模塊中放置 5 min 甚至過夜。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒ATEN 緩沖液DNA 緩沖液（TEN)KLA 緩沖液T5E5Dpn IKlentaq LA蛋白酶 K蛋白酶K儲存緩沖液RNA 酶 A設計好的載體已經進行 5'端生物素-TEG 修飾并且 3'端核糖胞嘧啶或者核糖尿嘧啶修飾過的引物卡那霉素（Sigma)四環素Ticarcillin儀器、耗材電轉化儀器PCR(薄壁）試管管壁厚度規則的試管鏈霉抗生物素蛋白珠子實驗步驟—、材料1. 緩沖液、溶液和試劑.10XATEN 緩沖液0.5mol/LTris-HCl,pH7.92......閱讀全文
實驗方法原理 在核內，RNA 聚合酶 Ⅱ 的轉錄產物同大量不同類型的核前體 mRNA/mRNA 結合蛋白，不均一核糖核蛋白（heterogeneous nuclear ribonucUoprotein，hnRNP) 結合形成 hnRNP 復合物。實驗材料 HeLa S3 細胞抗體試劑、試
實驗方法原理 核糖核酸酶保護分析用于度量特異性 mRNA 的豐度以及為它們的拓撲異構特征作圖。這種方法包括測試 RNA 與互補的放射標記的 RNA 探針（核糖探針）雜交，然后未雜交的
一、雜交瘤技術的誕生 淋巴細胞雜交瘤技術的誕生是幾十年來免疫學在理論和技術兩方面發展的必然結果，抗體生成的克隆選擇學說、抗體基因的研究、抗體結構與生物合成以及其多樣性產生機制的揭示等，為雜交瘤技術提供了必要理論基礎，同時，骨髓瘤細胞的體外培養、細胞融合與雜交細胞的篩選等提供了技術貯備。19
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展，新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展，新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
實驗方法原理 前接體是真核細胞核內剪接 mRNA 前體的大分子核糖核蛋白復合體，它由 5 種 snRNP 和大量的非 snRNP 蛋白組成，每一種 snRNP 由一個 snRNA 和
脫氧次黃嘌呤（deoxyInosine，dI）： 脫氧次黃嘌呤是一個自然存在的堿基， 雖然不是真正意義上的通用堿基但當與其它堿基結合時會比其它堿基錯配相對更穩定。 脫氧次黃嘌呤與其它堿基的結合能力為dI:dC > dI:dA > dI:dG > dI:dT. 在DNA聚合酶的催化下，脫氧
脫氧次黃嘌呤（deoxyInosine，dI）：脫氧次黃嘌呤是一個自然存在的堿基， 雖然不是真正意義上的通用堿基但當與其它堿基結合時會比其它堿基錯配相對更穩定。 脫氧次黃嘌呤與其它堿基的結合能力為dI:dC > dI:dA > dI:dG > dI:dT. 在DNA聚合酶的
原核表達系統是常被用來研究基因功能的成熟系統，由于原核表達系統具有包涵體蛋白不易純化、蛋白修飾不完整等缺陷，人們也開始利用真核細胞表達系統來研究基因。自上世紀70年代基因工程 技術誕生以來，基因表達技術已滲透到生命科學研究的各個領域。并隨著人類基因組計劃實施的進行，在技術方法上得到了很大發展，時至今
實驗方法原理 在核內，RNA 聚合酶 Ⅱ 的轉錄產物同大量不同類型的核前體 mRNA/mRNA 結合蛋白，不均一核糖核蛋白（heterogeneous nuclear ribonuc
在過去的二十五年里，利用雜交瘤細胞生產了成千上萬的鼠單克隆抗體。人們用同樣的技術從轉基因鼠中克隆人類的抗體，并設計了全長型抗體和重組片段，它們可以被用于多種診斷和治療。而且如果他們能在哺乳動物細胞，牛奶及植物中表達，就可以大量獲得。 一個世紀以前，Paul Ehrlich提出了著名的側
單克隆抗體(MAb)是針專一的抗原決定簇產生的抗體，單克隆技術又名雜交瘤技術起源于1975年，由G.K?hler和Milstein創立。主要原理是利用產生抗體的B細胞與腫瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞，生產抗體。單克隆抗體制備過程有以下幾個步驟，下面講簡要介紹。1、免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠
預測全球變化的生物學影響 對生物圈將會怎樣響應于人類活動而變化的大部分預測都植根于預測軌跡。這樣的模型傾向于不去預測臨界變化或臨界點，雖說最近的研究工作表明這些情況發生的概率很高。而且，在地方尺度上，當過了臨界閾限時，生態系統已知會在不同狀態之間突然變化。這些作者們對生態
常用分子生物學和細胞生物學實驗技術介紹！ 核酸分子雜交技術 由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性，它已成為分子生物學中最常用的基本技術，被廣泛應用于基因克隆的篩選，酶切圖譜的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定
（一）一般光學顯微鏡術應用一般光學顯微鏡（簡稱光鏡）觀察組織切片是組織學研究的最基本方法。取動物或人體的新鮮組織塊，先用固定劑（fixative）固定（fixation），使組織中的蛋白質迅速凝固，防止細胞自溶和組織腐敗。常用的固定劑如灑精、甲醛、醋酸、苦味酸、四氧化鋨等，一般常將幾種固定劑配制成混
進化遺傳學具有兩個并列的研究方向：系統發育的重建和種群分析。自1962年， Zuckerkandl和Pauling提出蛋白質序列和基因序列的比較可以象分子種一樣用于標志 現存物種分化的時間以來，各種生化方法被用于系統發育的研究。在最初二十年內， 同功酶的電泳分析、免疫學比較和蛋白質序列分析被廣泛地應
PARP (poly ADP-ribose polymerase)是存在于多數真核細胞中的一個多功能蛋白質翻譯后修飾酶。當DNA損傷時，PARP能以NAD+依賴的形式催化多聚ADP核糖往自身以及鄰近的組蛋白等核蛋白聚合，從而參與到DNA堿基切除修復的一系列事件中。當胞內
目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭，但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的若干組帶放射性標記的寡核苷酸，每組寡核苷酸都有固定的起點，但卻隨機終止于特定的一種或者多種殘基上。由于DNA上的每一個堿
PCR擴增產物的克隆可以：（1）獲得目的DNA片段；（2）用于原核表達的研究；（3）廣泛應用于分子生物學相關研究。實驗方法原理平頭連接是將制備好的平頭載體和補平或削平的PCR產物直接進行連接。載體可用EcoR V或Sma I切成平頭；PCR產物純化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用
◇水解乳蛋白 水解乳蛋白為淡黃色粉末，雖易潮解結塊，但不影響使用。 不同批號和牌號質量有差異。水解乳蛋白是乳白蛋白經蛋白酶和肽酶水解后的產物，含有豐富的氨基酸。開始時它是專為猴腎細胞培養設計的，而實際上它對許多細胞系(株)，如Hela細胞和原代細胞都是一種優良培養基。使用時用Hanks液配制成0
實驗概要本實驗介紹了從培養的單層哺乳動物細胞中分離RNA的實驗程序，該程序同樣適用于從懸浮培養的哺乳動物細胞中或從易于分散成單個細胞的哺乳動物組織中分離RNA。但不適用于從固體組織中提取RNA，因為用這種裂解細胞的方法（在SDS存在的條件下用蛋白酶K消化)去消化組織速度很慢，導致內源性RNA酶在被蛋
第一代測序技術-Sanger鏈終止法 一代測序技術是20世紀70年代中期由Fred Sanger及其同事首先發明。其基本原理是，聚丙烯酰胺凝膠電泳能夠把長度只差一個核苷酸的單鏈DNA分子區分開來。一代測序實驗的起始材料是均一的單鏈DNA分子。第一步是短寡聚核苷酸在每個分子的相同位置上退火，然后
在組織或細胞培養過程的許多步驟中都使用水。它是緩沖液和介質的主要成分，用于溶解添加劑和藥物，以及沖洗生物反應器，塑料制品和玻璃制品。因此，水質可能在細胞培養實驗結果中起重要作用。細菌，酵母或霉菌對細胞培養物的污染一直是一個令人擔憂的問題，科學家竭盡全力避免它們。這些污染通常是肉眼或通過光學顯微鏡可見
概 述 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶鏈反應)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA的方法.它包括三個基本步驟: (1) 變性(Denature):目的雙鏈DNA片段在94℃下解鏈; (2) 退火(Anneal):兩種寡核苷酸引物在適當溫度(50℃左右)
第八章 聚合酶鏈式反應(PCR)擴增和擴增產物克隆第一節 概 述 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶鏈反應)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA的方法.它包括三個基本步驟: (1) 變性(Denature):目的雙鏈DNA片段在94℃下解鏈; (2) 退火(Annea
PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈反應)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA的方法.它包括三個基本步驟：(1) 變性(Denature)：目的雙鏈DNA片段在94℃下解鏈；(2) 退火(Anneal):兩種寡核苷酸引物在適當溫度(50℃左右)下與模板上的目
PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈反應)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA的方法.它包括三個基本步驟：(1) 變性(Denature)：目的雙鏈DNA片段在94℃下解鏈；(2) 退火(Anneal):兩種寡核苷酸引物在適當溫度(50℃左右)下與模板上的目
自上世紀70年代基因工程技術誕生以來，基因表達技術已滲透到生命科學研究的各個領域。并隨著人類基因組計劃實施的進行，在技術方法上得到了很大發展，時至今日已取得令人矚目的成就 。隨著人類基因組計劃的完成，越來越多的基因被發現，其中多數基因功能不明。利用表達系統在哺乳動物細胞內表達目的基因是研究基
哺乳動物細胞總ＲＮＡ的分離細胞的裂解提取步驟注意事項 這一從培養的單層哺乳動物細胞中分離RNA的實驗程序系為Favaloro 等（1980）所介紹程序的改良。該程序同樣適用于從懸浮培養的哺乳動物細胞中或從易于分散成單個細胞的哺乳動物組織中分離RNA。但不適用于從固體組織中提取RNA，因為用這種裂解
在做Northern等雜交實驗、構建cDNA文庫、獲取能夠編碼真核生物蛋白的基因、獲得RNA病毒基因時，會用到RNA提取和RT-PCR技術。 真核生物的基因組是DNA，為什么不直接從DNA PCR得到我們需要的基因呢？因為真核生物的基因含有大量的非編碼區，稱為內元（intron），真正編碼蛋