組織切片的免疫熒光雙標記實驗
間接免疫熒光顯微鏡檢術可使兩種或更多種抗原可以在同一切片，同一時間內被顯示出來，可用于（1）細胞標記；（2）免疫熒光篩選干細胞。實驗方法原理通過使用激發波長及發射波長均不相間的熒光染料而進行的。通常限用兩種熒光染料，最常見的是羅丹明（綠光激發，發射紅光）和熒光素（藍光激發、發綠光）聯合使用。實驗材料組織樣品試劑、試劑盒第一抗體IgG儀器、耗材玻片加濕盒實驗步驟1. 當進行雙標記實驗時，最重要的準則是：第一抗體應為不同類型，從而使第二抗體能分別識別之。第一抗體最好是來源于不同免疫動物。但如使用單克隆抗體，這一要求就有可能達不到，當使用單抗時，不同型的抗體如IgG和IgM，可被第二抗體確切區分。但不同亞類（IgG 1和IgG 2）的抗體通常不能被二抗確切區分。2. 實驗操作過程和“組織切片的免疫熒光標記實驗”相同，例外的是所加第一抗體和第二抗體由兩種第一抗體及兩種第二抗體的混合成分所替換。 3. &......閱讀全文
免疫組織化學法實驗——單層生長細胞的免疫熒光標記
實驗材料在3?5 cm培養皿上生長的單層細胞（培養皿越小所需的抗體就越少 但培養皿應適合顯微鏡下觀察）試劑、試劑盒VPBS40℃2% (m V)高聚甲醛（PFA)固定液 4℃ 用于細胞表面抗原固定100%甲醇 -10?-20℃ (置于冰箱的結凍室冷卻較為理想）；或含0.1% (V V) Triton
非標記抗體免疫酶組織化學實驗——雙－PAP－法
實驗方法原理在 PAP 法的基礎上重復第二抗體和 PAP 復合物，重復的連接抗體和 PAP 復合物可能有以下兩種連接方式（圖 4-10）。第一種（A）重復連接抗體可與一個 PAP 中的抗 HRP 抗體上未飽和的 Fc 段結合，再與后加的 PAP 復合物相結合；第二種（B）重復連接抗體與特異性一抗分子
懸浮細胞的免疫熒光標記實驗
實驗方法原理免疫熒光標記技術（immunofluorescence technique）是將已知的抗體或抗原分子標記上熒光素，當與其相對應的抗原或抗體起反應時，在形成的復合物上就帶有一定量的熒光素，在熒光顯微鏡下就可以看見發出熒光的抗原抗體結合部位，檢測出抗原或抗體。實驗材料懸浮細胞試劑、試劑盒多聚
懸浮細胞的免疫熒光標記實驗
實驗材料 懸浮細胞試劑、試劑盒 多聚-L-賴氨酸儀器、耗材 離心機培養箱實驗步驟 1. ?細胞在冰浴中冷卻，然后用臺式離心機于4℃以800 g 離心5 min，吸去培養液并以4℃PBS重懸細胞。?2. ?離心吸去PBS，以1~2 ml 2%PFA固定液，或2%PFA固定液/0.1% Triton X
病毒免疫熒光實驗_?熒光素標記抗體
實驗材料熒光色素試劑、試劑盒抗體實驗步驟熒光標記抗體方法有直接標記法和間接標記法兩種。(1) 直接法：較為常用，具體步驟是：1) 抗體溶液的制備：用 0.01mol/L pH 7.1 PBS 將待標記抗體稀釋至 20mg/ml;2) 熒光素：根據待標記抗體的總量，按 0.01mg 熒光素/mg 蛋白
組織學——組織切片
·?????????Histological techniques?(William H. Heidcamp)Very detailed guide to histological techniques, like? fixation, dehydration, embedment and subs
單層生長細胞的免疫熒光標記實驗
實驗材料 單層細胞試劑、試劑盒 PBS多聚甲醛甲醇抗體儀器、耗材 離心機水浴鍋培養箱實驗步驟 1. ?置生長成片的單層細胞于冰上冷卻，吸去培養液并以4℃PBS洗滌。吸去PBS。2. ?如欲研究細胞表面抗原，則以2%PFA于冰上面定30 min。如為細胞質抗原，則可用含0.1% Triton X-10
單層生長細胞的免疫熒光標記實驗
免疫熒光標記是微生物學、免疫學、病理學及免疫組織化學中常用的一種免疫學實驗方法，在臨床上得到了廣泛的應用。實驗方法原理免疫熒光標記技術（immunofluorescence technique）是將已知的抗體或抗原分子標記上熒光素，當與其相對應的抗原或抗體起反應時，在形成的復合物上就帶有一定量的熒光
免疫熒光組織（細胞）化學技術——熒光素及其標記抗...2
免疫熒光組織（細胞）化學技術——熒光素及其標記抗體的方法 2P3（2）Chadwick氏法?試劑和材料：抗體球蛋白溶液、異硫氰酸熒光素、3%重碳酸鈉水溶液、0.01 mol/L pH8.0磷酸鹽緩沖鹽水、1%硫柳汞、離心機及離心管、三角燒瓶(25 ml)、冰槽、無菌吸管及毛細滴管、燒杯(500 ml
免疫熒光組織（細胞）化學技術——熒光素及其標記抗...1
制備熒光抗體是免疫熒光組織化學的重要技術之一，制備特異性強和高效價的熒光抗體必須選用高質量的熒光素和高效價的抗體。?一、熒光素?熒光是指一個分子或原子吸收了給予的能量后即刻引起發光，停止能量供給，發光也瞬時停止。可以產生明亮熒光的染料物質，稱熒光素。目前主要常用于標記抗體的熒光素如下：?1、異硫氰酸
冷凍組織切片的制作
實驗概要本實驗介紹了冷凍組織切片制作的基本操作流程。主要試劑液氮，干冰，1％明膠，4％多聚甲醛，PBS，含1％NP-40的PBS，3％BSA／PBS稀釋抗體，辣根過氧化物酶標記的二抗，DAB／金屬鹽試劑，3％過氧化氫，0.3％(W／V)氯化鎳貯存液，Harris蘇木精，乙醇主要設備載玻片，Whatm
冰凍切片實驗技巧（四）：脂肪組織的處理
脂肪組織無疑是冰凍切片者的絆腳石，道理很簡單脂肪不會結冰，把溫度降低讓脂肪變硬可以切出較薄的片子，但是這個溫度對同一組織中的其他成分來說顯得太低而不合適切片，當脂肪破碎影響切片時這個問題就變得明顯，下面是一些我的經驗總結。1.盡可能的削掉不需要的脂肪組織當我準備切淋巴結時，我會先檢查一遍，小心翼翼地
什么是組織切片
這是組織胚胎學和病理學檢查的一個專業稱呼。先通俗的解釋一下什么叫組織胚胎學和病理學檢。比如身上哪里長了包塊、硬結、疙瘩、痣，反正就是原來沒有，現在有了，而且不正常時，醫生就會建議切一點，或者用針穿刺一點用來做檢查，這個檢查就叫病理學檢查；而科學家為了研究動植物的微觀結構，比如想看看正常的皮膚細胞是長
冷凍組織切片制作
實驗試劑液氮，干冰，1％明膠，4％多聚甲醛，PBS，含1％NP-40的PBS，3％BSA／PBS稀釋抗體，辣根過氧化物酶標記的二抗，DAB／金屬鹽試劑，3％過氧化氫，0.3％(W／V)氯化鎳貯存液，Harris蘇木精，乙醇實驗設備載玻片，Whatman 1＃濾紙，低倍光學顯微鏡實驗材料未受損傷的組織
組織切片Masson染色
Masson染色是利用兩到三種陰離子染色液對組織中的纖維和炎性因子著色的染色方法，染色后可使膠原纖維、粘液、軟骨呈藍色，肌纖維、胞漿呈紅色，細胞核呈藍黑色 一、實驗用品 組織蠟塊、蘇木素染液、鹽酸酒精分化液、麗春紅酸性復紅液、苯胺藍染液、1%磷鉬酸、2%冰醋酸、0.2%冰醋酸、梯度乙醇、二甲
小鼠組織切片免疫組化實驗步驟
材料二甲苯 酒精（100％，95％） EDTA抗原修復工作液（pH8.0，稀釋50倍使用） 0.5M Tris-NaCl (TBS) pH7.4（稀釋10倍使用） DAB顯色液（臨用前配制：試劑盒A、B、C各50ul，于1ml水中混勻）。方法1.? 石蠟切片置60℃烘箱中烘烤過夜 2.?
小鼠組織切片免疫組化實驗步驟
實驗概要免疫組化，是應用免疫學基本原理——抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學
小鼠組織切片免疫組化實驗步驟
實驗概要免疫組化，是應用免疫學基本原理——抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學
免疫熒光標記的應用
半個多世紀以來，經過許多學者不斷改進和發展，使此項技術成為微生物學、免疫學、病理學及免疫組織化學中常用的一種免疫學實驗方法，在臨床上得到了廣泛的應用，使許多疑難腫瘤得到了明確診斷。
組織切片機切片背景過深的原因分析
原因分析：a.漂洗不夠；b.切片或涂片過厚；c.蛋白質封閉不夠或所用血清溶血d.使用全血清抗體稀釋不夠；e.底物成色反應過久；解決措施：對一些新的或少用的抗體顯色時進行監控，避免顯色時間過長。
組織切片機切片邊緣著色的原因分析
原因分析：a組織邊緣與玻片粘貼不牢，邊緣組織松脫漂浮在液體中，導致洗滌不徹底；b切片上滴加的試劑未充分覆蓋組織，邊緣的試劑容易首先變干，濃度較中心組織高而致染色深。解決措施：組織的前期處理應規范，試劑要充分覆蓋組織，盡量避免選用壞死較多的組織。
電鏡下雙/多重免疫標記實驗
電鏡下的雙重免疫標記染色不是靠顏色區分，而是靠標記物的不同電子密度或顆粒的不同大小來區別不同抗原，有別于光鏡下的雙重免疫標記方法。多采用雙重免疫金標記，其最大優點是高電子密度、分辨率高、抗原定位精確、顆粒大小可人工控制、標記試劑易制備。但也存在一些不足，如非特異吸附干擾大（背景）、對所用試劑質量要求
植物組織石蠟切片的制作
一、實驗目的 1．熟練掌握石蠟切片的方法。 2．掌握永久制片的制作過程，為研究植物的內部結構奠定基礎。 3．學會植物內部結構的比較研究方法。 二、實驗器具與 試劑1．器具 石蠟切片機、烘箱、顯微鏡、染色缸、小培養皿、鑷子、毛筆、吸水紙、紗布、載玻片、蓋玻
組織蠟塊切片的保存
許多實驗室研究人員習慣將組織蠟塊切片后長期保存在室溫條件下,而切片后的組織在室溫下長期保存抗原易損失。研究發現,切片在室溫下保存3個月以上,免疫組化染色結果會出現減弱或陰性,故進行了新、舊切片保存時間對照實驗。選擇11種不同組織蠟塊每例連續切10片,共110片,常溫空氣中放置1個月、3個月、6個月、
免疫過氧化物酶染色和免疫熒光有沒有很大區別
免疫過氧化物酶染色和免疫熒光有沒有很大區別1、問:用免疫熒光方法做組織切片和培養細胞內的蛋白，兩者操作過程有哪些不同?參考見解:只是固定方法不同。細胞固定用甲醇，切片固定用多聚甲醛，而染色方法是一樣的。2、問:近期要做免疫熒光雙標，不知哪位有免疫熒光雙標技術的詳細步驟及其注意事項?參考見解:我正在做
免疫熒光常見問題總結
1、問：免疫熒光：用免疫熒光方法做同樣的內容，組織切片和培養細胞，兩者操作過程中有哪些不同？參考見解：只是固定方法不同，細胞固定用甲醇，切片固定用多聚甲醛，而染色方法是一樣的。2、問：近期要做免疫熒光雙標，不知哪位有免疫熒光雙標技術的詳細步驟以及注意事項？參考見解：我正在做冰凍組織切片的免疫熒光的雙
免疫熒光共標記怎么計算共標記的細胞個數
共定位的定義：共定位是對樣品內兩種熒光標記的信號共同分布的位置進行分析。 共定位就如字面意思上所說的，只能夠表明蛋白A和B都在此細胞有表達，并且在同樣的細胞內位置/細胞器。相關短語：共定位通道 PDM Channel 細胞共定位 Cellular co localization 細胞內共定位信息 c
顯微冷凍切片機的使用和大（小）鼠腦組織切片操作實驗
冷凍切片機可以用于：（2）切制薄而均勻的組織片；（2）組織用堅硬的石蠟或其他物質支持，每切一次借切片厚度器自動向前（向刀的方向）推進所需距離，厚度器的梯度通常為1微米。實驗方法原理切制石蠟包埋的組織時，由于與前一張切片的蠟邊粘著，而制成多張切片的切片條。實驗材料大小鼠大腦試劑、試劑盒手術器械 顯微冷
顯微冷凍切片機的使用和大（小）鼠腦組織切片操作實驗
實驗材料 大小鼠大腦試劑、試劑盒 手術器械 顯微冷凍切片機 包埋劑儀器、耗材 大小鼠立體圖譜實驗步驟 1. ?安裝刀具，移上安全桿。調整切片機溫度到-20 ℃(（右手邊up 和down 二個按鈕調節, up調高溫度, down,降低溫度）。 2. ?從-80 ℃冰箱取出腦組織在切片機或-20 ℃冰箱
組織免疫熒光染色
概述： 織免疫熒光染色多是使用組織的冰凍切片，因為在切片過程中基本上暴露了細胞和細胞核內結構，故不需要使用細胞通透劑(Triton-100,NP-40)。染色后的切片應放置冰箱內避光保存，防止熒光淬滅。常用的熒光素有：異硫氰酸(fluorescein isothiocyanate,FITC,發