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1、制備PBMC，并調整細胞濃度至107/ml。2、在每個流式上樣管中加入100 μl準備好的細胞懸液，細胞數約為1x106個。3、按照細胞表面抗原染色方法標記CD4和CD25。根據說明書和抗體管上的標識確定抗體用量（一般來說是20ul，可能隨批次有差異）。按個人要求設置空白管、對照管、補償管和樣本管。4 ℃孵育30 分鐘。 4、用預冷PBS溶液洗滌細胞，300 -400 g離心5分鐘，去上清。5、用3倍體積的固定/破膜稀釋液 稀釋 固定/破膜濃縮液，制成固定/破膜工作液，注意要新鮮配制，每個樣本的用量為1ml。6、旋渦震蕩重懸細胞后加入1ml的固定/破膜工作液（Fixation/Permeabilization）（1:3稀釋好），并再次旋渦混勻。7、避光4℃孵育30分鐘到60分鐘。8、將破膜緩沖液用去離子水1:9稀釋，制成工作液。每個樣本的用量為4......閱讀全文
前幾天有“磚家”同學寫了兩篇《鼠年說鼠》（一）和（二）。為了留作永久的學習材料，小編在經過原作者同意后，現進行轉載。本文將兩部分內容融在一起，并對（一）和 （二）順序進行了調換。 抗體藥發現的兩大礦場 抗體藥主要有兩個大礦場，一個是依賴于體外展示技術的全合成/半合成/天然抗體
背景介紹 B-NDG小鼠（NOD.CB17-PrkdcscidIL2rgtm1/Bcgen）是百奧賽圖公司自主開發的，NOD-scid遺傳背景的IL2rg基因敲除小鼠，綜合了NOD-scid-IL2rg null背景特征，具有重度免疫缺陷表型，缺乏成熟的T、B和NK細胞，是目前國際公認的
腫瘤免疫治療大概是目前最火熱的創業和投資領域了，尤其是腫瘤免疫抗體藥物和Car-T治療領域。對于一個創新藥物，需要經過一系列的臨床前和臨床試驗，以證明其“有效”和“安全”，才能被批準上市并進入醫生的處方里，當然腫瘤免疫抗體藥物和Car-T也不例外。新藥臨床試驗不管是成功還是失敗，都是一項花費巨大的工
概述：如何借助 DuraClone 通過流式細胞術對人外周血單核細胞 (PBMC) 進行染色，以進行 T 細胞受體分析。如何運用 CytoFLEX 流式細胞儀和 DuraClone 對 TCR 亞群進行鑒定。介紹：T 細胞在免疫系統的功能與調控中扮演著重要角色。成熟的 T 細胞可以同時表達 CD
1、事前準備PBS-EDTA：磷酸鹽緩沖液（PBS），pH 7.2，含2 mM EDTA。▲ 注意： EDTA可以用其他補充劑代替，例如抗凝檸檬酸右旋糖配方A（ACD-A）或檸檬酸磷酸右旋糖（CPD）。2、使用FicollPaque?分離人PBMC▲注意：外周血或血沉棕黃層不應超過8小時，并應補充抗
（一）原理白細胞介素-2（IL-2）是由活化的輔助性T細胞分泌的一種細胞增殖因子，具有促T細胞增殖和維持T細胞體外長期生長的作用。CTLL-2為IL-2依賴細胞株可用作IL-2生物學活性定量檢測。本實驗采用MTT分析法，通過測定CTLL-2細胞的增殖量，確定IL-2生物學活性單位。檢測IL-2的生物
【經典的 BMDC 制備方法簡圖】 &
五、細胞培養和刺激的基本方法細胞活化的最終結果是產生細胞因子，根據檢測指標和標本的不同，研究人員需要選擇不同的刺激劑和刺激時間，以獲得最佳的實驗結果。下表提供了檢測一些常用細胞因子的推薦的活化方法。表1、細胞內細胞因子流式檢測推薦的陽性對照活化方法檢測細胞因子陽性對照刺激方法人IFN-g方法2 (4
四、所需試劑1、細胞表面染色的熒光標記的單抗試劑依據實驗需要選擇特殊表面標志CD45圈定所有淋巴細胞CD3 圈定T淋巴細胞CD4 圈定T輔助淋巴細胞亞群CD8 圈定T抑制淋巴細胞亞群CD19/或CD20圈定B淋巴細胞CD56圈定NK淋巴細胞CD14圈定單核細胞2、熒光標記的細胞因子抗體：R&
實驗方法原理實驗材料 人外周血T細胞試劑、試劑盒 FCS-RPMI-1640培養液谷氨酰胺HEPES青霉素鏈霉素PBSA緩沖液儀器、耗材 離心機分光光度計搖床實驗步驟 一、人外周血T細胞分泌IL-2的誘生1. 人PBMC分離：采用常規淋巴細胞分層液濃度梯度離心法分離PBMC，用10%FC
白細胞介素-2（IL-2）是由活化的輔助性T細胞分泌的一種細胞增殖因子，具有促T細胞增殖和維持T細胞體外長期生長的作用。CTLL-2為IL-2依賴細胞株可用作IL-2生物學活性定量檢測。本實驗采用MTT分析法，通過測定CTLL-2細胞的增殖量，確定IL-2生物學活性單位。檢測IL-2的生物學活性，可
流式細胞儀實驗方法 一、 實驗準備1． 標本制備：2． zui小化非特異性結合： 二、凋亡1．凋亡的檢測方法：和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法 三、細胞因子1．激活的細胞因子2．C
一、 實驗準備1． 標本制備：2． zui小化非特異性結合： 二、凋亡1．凋亡的檢測方法：網站和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法 三、細胞因子1．激活的細胞因子2．CBA 四、血小板
俞曉峰博士現任賽業模式生物副總裁、高級科學家，負責基因修飾模式動物的研發與技術服務等工作。 俞博士在遺傳基因模式動物領域有超過20年研發與管理等方面的豐富經驗，在干細胞相關領域及哺乳動物細胞系基因改造研究也取得了巨大成就，其研究成果多次發表在Nature Immunology、Hum Mo
俞曉峰博士現任賽業模式生物副總裁、高級科學家，負責基因修飾模式動物的研發與技術服務等工作。 俞博士在遺傳基因模式動物領域有超過20年研發與管理等方面的豐富經驗，在干細胞相關領域及哺乳動物細胞系基因改造研究也取得了巨大成就，其研究成果多次發表在Nature Immunology、Hum Mo
俞曉峰博士現任賽業模式生物副總裁、高級科學家，負責基因修飾模式動物的研發與技術服務等工作。 俞博士在遺傳基因模式動物領域有超過20年研發與管理等方面的豐富經驗，在干細胞相關領域及哺乳動物細胞系基因改造研究也取得了巨大成就，其研究成果多次發表在Nature Immunology、Hum Mo
中國實驗動物信息網： 針對目前常用免疫缺陷小鼠模型存在的問題，有哪些改進方法與策略？俞博士：雖然相對于早期的免疫缺陷小鼠（如SCID, NOD-SCID等），免疫缺陷IL2rg小鼠已經具有支持人細胞，組織和免疫系統成功移植的能力。然而，為了進一步改善該模型在實際應用中存在的某些不足，在此類模
我們知道，做細胞分選，首先要知道目的細胞與其它細胞相比，有什么特別的標志，如常用的細胞表面CD marker，最簡單的方法是選擇直接耦聯相應抗體的磁珠，即所謂的直標微珠，如用CD4 microbeads來直接分選CD4 + T細胞。 但是，美天旎的直標磁珠多是針對小鼠、大鼠、人和靈長類的，針對其它物
流式細胞儀是一種強大的工具，它能夠同時快速測定幾種細胞參數。因為每個細胞是單獨評估的，所以該技術比那些評估異質群體中細胞亞群表型的實驗更勝一籌。舉個例子，當抗體與非重疊光譜的熒光染料偶聯時，單個細胞中多種抗原的表達水平被同時評估。 R&D Systems如今提供了多色的流式分析
實驗方法原理用放射性核素標記靶細胞，當靶細胞受到破壞時，放射性核素被釋放出來，通過測定釋放或殘留在未被破壞細胞內的放射性核素放射活性，即可計算和推測殺傷細胞的細胞毒活性。常用的放射性核素有51Cr、3H-Dr、125I-UdR等。本實驗采用51Cr釋放法檢測人NK細胞活性。實驗材料靶細胞試劑、試劑盒
美國南加州時間2019年12月9日，生命科學工具市場研究與咨詢機構領導者——BioInformatics Inc.(隸屬于Science and Medicine Group旗下)將2019年生命科學產業獎（LSIA）細胞生物學最佳新產品金獎授予Fluidigm公司（納斯達克：FLDM）產品Ma
1）原位缺口翻譯檢測裂解的DNA片段：1、取106經促調亡物質處理的細胞，用1％ BSA-PBS洗滌細胞后加入0.1ml FITC標記的抗CD4或抗CD8單克隆抗體，4℃ 20分鐘。用1％ BSA-PBS洗滌細胞。置冰上。2、加入0.1ml 1％多聚甲醛，置冰上5分鐘，加入60％（v/v）甲醇溶液，
實驗方法原理 用放射性核素標記靶細胞，當靶細胞受到破壞時，放射性核素被釋放出來，通過測定釋放或殘留在未被破壞細胞內的放射性核素放射活性，即可計算和推測殺傷細胞的細胞毒活性。常用的放射性核素有51Cr、3H-Dr、125I-UdR等。本實驗采用51Cr釋放法檢測人NK細胞活性。實驗材料 靶細胞試劑、試
流式細胞術工作原理是在細胞分子水平上通過單克隆抗體對單個細胞或其他生物粒子進行多參數、快速的定量分析。它可以高速分析上萬個細胞，并能同時從一個細胞中測得多個參數，具有速度快、精度高、準確性好的優點，是當代最先進的細胞定量分析技術之一。光源、液流通路、信號檢測傳輸和數據的分析系統是流式細胞儀的主要組成
5月2日，第20屆未來健康技術峰會在麻省理工學院舉辦，西奈山醫學院的華人教授李秀敏博士獲頒“2016未來健康技術獎”，以表彰她在利用中草藥治療過敏和免疫系統疾病方面做出的杰出貢獻。今天給大家分享的文章，就是李教授的研究之一。 Anti-inflammatory Effects of the
5月2日，第20屆未來健康技術峰會在麻省理工學院舉辦，西奈山醫學院的華人教授李秀敏博士獲頒“2016未來健康技術獎”，以表彰她在利用中草藥治療過敏和免疫系統疾病方面做出的杰出貢獻。今天給大家分享的文章，就是李教授的研究之一。Anti-inflammatory Effects of the Chine
用熒光激活的細胞分類儀檢測調亡細胞1）原位缺口翻譯檢測裂解的DNA片段1．取106經促調亡物質處理的細胞，用1％ BSA-PBS洗滌細胞后加入0.1ml FITC標記的抗CD4或抗CD8單克隆抗體，4℃ 20分鐘。用1％ BSA-PBS洗滌細胞。置冰上。2．加入0.1m
實驗概要本實驗用Ficoll密度梯度離心法直接分離和純化了外周血單個核細胞。實驗原理常用來分離人外周血單個核細胞（PBMC）的分層液比重是 1.077±0.001 的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F／H)分層液。Ficoll是蔗糖的多聚體，呈中性，犌