融合蛋白化學降解實驗
實驗材料 融合蛋白試劑、試劑盒 CNBr甲酸SDS儀器、耗材 離心機分光光度計水浴鍋實驗步驟 1. 進行預試驗以確定最短溫育反應時間。凍干兩小份50 μl 的融合蛋白溶液，將其中一份重懸于5050 μl 50 mg/ml CNBr/甲酸中，另一份重懸于50 μl 含CNBr 的70%甲酸中，室溫下反應。2. 在0、8、24及48 h 的時刻，各取5 μl 并凍干。 3. 往所有凍干樣本加20 μl 1×SDS樣品緩沖液，煮沸10 min，加樣于SDS-聚丙烯酰胺凝膠。 4. 分析凝膠電泳結果以確定完全裂解蛋白所需的最短溫育反應時間。......閱讀全文
融合蛋白化學降解實驗
實驗材料 融合蛋白 試劑、試劑盒 CNBr甲酸SDS 儀器、耗材 離心機分光光度計水浴鍋 實驗步驟 1. ?進行預試驗以確定最短溫育反應時間。凍干兩小份50 μl 的融合蛋白溶液，將其中一份重懸于5050 μl 50 mg/ml CNBr/甲酸中，另一份重懸于50 μl 含CNBr 的7
融合蛋白化學降解實驗
基本方案 備選方案1 備選方案2 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 融合蛋白
融合蛋白化學降解實驗
基本方案 用溴化氰 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 1 mg ml 融合蛋白
融合蛋白化學降解實驗1
實驗材料 融合蛋白 試劑、試劑盒 CNBr甲酸SDS 儀器、耗材 離心機分光光度計水浴鍋 實驗步驟 1. ?進行預試驗以確定最短溫育反應時間。凍干兩小份50 μl 的融合蛋白溶液，將其中一份重懸于5050 μl 50 mg/ml CNBr/甲酸中，另一
融合蛋白化學降解實驗3
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒天冬氨酸脯氨酸甲酸乙酸鹽酸胍儀器、耗材電泳儀離心機水浴鍋實驗步驟1. ?進行預實驗確定最佳的水解條件。準備四個反應混合物：（1）反應1：20 μg 溶解在70%甲酸中的融合蛋白。（2）反應2：20 μg 溶解在70%甲酸/6 mol/l 鹽酸胍中的融合蛋白。（3）反應3：
融合蛋白化學降解實驗2
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒Tris·ClNaCl鹽酸胍羥胺裂解緩沖液SDS儀器、耗材離心機水浴鍋培養箱實驗步驟1. ?進行預試驗以確定最短保溫反應時間。將50 μl 1 mg/ml? 融合蛋白與50 μl 2×羥胺裂解緩沖液混合在1.5 ml 微量離心管中，45℃溫育反應。?2. ?在0、2、4、
融合蛋白化學降解實驗——－用溴化氰
實驗材料1 mg ml 融合蛋白試劑、試劑盒50 mg ml CNBr70%（V V）甲酸1 × SDS 樣品緩沖液實驗步驟1. 進行預試驗以確定最短溫育反應時間。凍干兩小份各 50 μl 的融合蛋白溶液，將其中一份重懸于 50 μl 50 mg/ml CNBr / 70% 甲酸中，另一份重懸于 5
GST－融合蛋白沉降實驗
實驗材料 細胞裂解液其中蛋白質 35S 用標記試劑、試劑盒 裂解緩沖液SDS 聚丙烯酰胺凝膠探針GST 蛋白儀器、耗材 沸水浴翻轉祥品旋轉儀谷胱甘肽瓊脂糖球珠實驗步驟 材料緩沖液和溶液將緩沖液稀釋到適當濃度。裂解緩沖液20 mmol/LTris-Cl(pH8.0)200 mml/L NaCl1 mm
GST－融合蛋白沉降實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞裂解液 其中蛋白質 35S 用標記 試劑、試劑盒 裂解緩沖液 SDS 聚丙烯酰胺凝膠
GST－融合蛋白沉降實驗
GST 沉降實驗與 far western(方案 2) 相比有—個優點：探針蛋白是在更自然的環境下與可能的搭檔蛋白孵育，因而增強了相互作用的有效性。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料細胞裂解液其中蛋白質 35S 用標記試劑、試劑盒裂解
融合蛋白的酶解實驗
實驗材料 融合蛋白試劑、試劑盒 SDS儀器、耗材 水浴鍋培養箱離心機實驗步驟 1. ?準備兩個小量預試驗反應以確定最佳溫育時間：?（1）反應1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室溫下反應（2）反應2：5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白（
融合蛋白的酶解實驗
基本方案 輔助方案 備選方案1 輔助方案 備選方案2 備選方案3 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 融合蛋白
基因置換實驗——構建融合蛋白
實驗材料菌株BY4741質粒PDB118試劑、試劑盒磷酸鹽緩沖液儀器、耗材YPD 平板YPD 液體培養基血球計數板SC-his平板實驗步驟YPD 平板 第 1 天將菌株 7-3 在 YPD 平板上劃單克隆，30°C 下培養兩天。第 3 天挑取單克隆，在 5 mlYPD 液體培養基中培養，30°C 過
融合蛋白的免疫篩選實驗
基本方案 IPTG法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌
融合蛋白的酶解實驗1
實驗材料 融合蛋白 試劑、試劑盒 SDS 儀器、耗材 水浴鍋培養箱離心機 實驗步驟 1. ?準備兩個小量預試驗反應以確定最佳溫育時間： ? （1）反應1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室溫下反應
融合蛋白的酶解實驗2
實驗材料 融合蛋白 試劑、試劑盒 SDS鹽酸胍CaCl2 儀器、耗材 水浴鍋培養箱離心機 實驗步驟 1. ?將融合蛋白在≥10倍體積的20 mmol/l Tris·Cl（pH7.4）/6 mol/l 鹽酸胍中透析4 h，或將鹽酸胍加入融合蛋白中至終濃度
融合蛋白的酶解實驗4
實驗材料 融合蛋白 試劑、試劑盒 SDS鹽酸胍CaCl2 儀器、耗材 水浴鍋培養箱離心機 實驗步驟 1. ?將融合蛋白在≥10倍體積的20 mmol/l Tris·Cl（pH7.4）/6 mol/l 鹽酸胍中透析4 h，或將鹽酸胍加入融合蛋白中至終濃度
融合蛋白的酶解實驗5
實驗材料 融合蛋白 試劑、試劑盒 SDSGST清洗緩沖液GST洗脫緩沖液 儀器、耗材 水浴鍋培養箱離心機 實驗步驟 1. ?在20或50 ml 帶球旋蓋的試管中，用20倍體積含1%Triton X-100的PBS液洗滌結合在谷胱甘肽-瓊脂糖珠的GST融
融合蛋白的免疫篩選實驗
實驗材料 大腸桿菌 試劑、試劑盒 LB頂層瓊脂糖疊氮鈉第一抗體 儀器、耗材 硝酸纖維素濾膜 實驗步驟 1. ?在150 ml LB 平板上滴定λgt11 cDNA文庫的滴度，宿主菌為大腸桿菌LE392菌株，每個平板使用7 ml 1%LB頂層瓊脂。 2. ?選擇適當的滴度鋪平板，于
融合蛋白酶解實驗
實驗方法原理 實驗材料?1 mg／ml 融合蛋白試劑、試劑盒?200 μg Xa 因子／ml 反應緩沖液2 × SDS 樣品緩沖液儀器、耗材?沸水浴實驗步驟 準備兩個小量預試驗反應以確定最佳溫育時間。反應 1:20 μl 含有 1 μl 200μg /ml Xa 因子的 1 mg/ml 融合蛋白反應
融合蛋白酶解實驗
基本方案 用 Xa 因子 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 1 mg／ml 融合蛋白
GST融合蛋白的親和純化實驗
實驗方法原理瓊脂糖顆粒和誘餌蛋白復合體在洗滌時并不會損失而且所有反應都含有等量的誘餌蛋白。為了證明在洗滌期間沒有任何材料損失，應使用 1/10 的 GST 融合體加樣做平行 SDS-PAGE 凝膠電泳并染色以便更確切地比較 GST 融合體蛋白帶。另外，融合蛋白的降解可能導致誘餌蛋白的量減少，尤其是當
融合蛋白的酶解實驗3
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒SDS鈉鹽凝血酶裂解液凝血酶儀器、耗材水浴鍋培養箱離心機實驗步驟1. ?準備兩個小量預試驗以確定最佳裂解反應條件：?（1）反應1：20 μl 1 mg/ml 融合蛋白溶液（在合適的緩沖液中）及0.2 μg 凝血酶。（2）反應2：5 μl 1 mg/ml?融合蛋白溶液（模擬
GST融合蛋白的親和純化實驗
GST 共結合純化法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 瓊脂糖顆粒和誘餌蛋白復合體在洗滌時并不會損失而且所有反應都含有等量的誘餌蛋白。為了證明在洗滌期間沒有任何材料損失，應使用
GST融合蛋白的親和純化實驗
實驗方法原理 瓊脂糖顆粒和誘餌蛋白復合體在洗滌時并不會損失而且所有反應都含有等量的誘餌蛋白。為了證明在洗滌期間沒有任何材料損失，應使用 1/10 的 GST 融合體加樣做平行 SDS-PAGE 凝膠電泳并染色以便更確切地比較 GST 融合體蛋白帶。另外，融合蛋白的降解可能導致誘餌蛋白的量減少
融合蛋白的酶解實驗6
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒SDSCaCl2重組牛腸激酶儀器、耗材水浴鍋培養箱離心機實驗步驟1. ?做預試驗監測腸激酶與融合蛋白按不同比例混合后的裂解效率，準備5個反應體系：?（1）反應1至4：20 μl 融合蛋白；0.2 U、0.5 U、1 U和2 U的rEK，加50 mmol/l Tris·Cl
硫氧還原蛋白融合蛋白的表達和純化實驗
實驗材料 融合蛋白試劑、試劑盒 氨芐青霉素甘油色氨酸儀器、耗材 電泳儀培養箱搖床試管實驗步驟 1. ?將編碼目的序列的DNA片段克隆于pTRXFUS或hpTRXFUS質粒上的trxA基因3‘末端，構建符合讀框的融合基因，或者于pALtrxA-781的單一Rsr 2位點上插入短肽編碼序列。2. ?用含
硫氧還原蛋白融合蛋白的表達和純化實驗
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒氨芐青霉素甘油色氨酸儀器、耗材電泳儀培養箱搖床試管實驗步驟1. ?將編碼目的序列的DNA片段克隆于pTRXFUS或hpTRXFUS質粒上的trxA基因3‘末端，構建符合讀框的融合基因，或者于pALtrxA-781的單一Rsr 2位點上插入短肽編碼序列。2. ?用含有重組硫
硫氧還原蛋白融合蛋白的表達和純化實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 融合蛋白 試劑、試劑盒
蛋白共沉淀檢測實驗_備擇－用GST融合蛋白
實驗材料全細胞抽提物試劑、試劑盒谷胱甘肽-瓊脂糖或者谷胱甘肽-瓊脂糖漿抗體免疫共沉淀緩沖液氯化鈉蛋白 A G-瓊脂糖漿2 × 樣品緩沖液（用于 SDS-PAGE 膠）儀器、耗材20 ml 注射器和 18-G 針頭漢密爾頓注射器實驗步驟1. 按照蛋白 A/G-瓊脂糖漿所述的方式準備兩份樣本（見「用蛋白