丹磺酰化法分析蛋白質N末端氨基酸實驗
實驗方法原理 蛋白質的α-氨基與丹磺酰氯(DNS-Cl 是一種熒光物質) 反應, 生成DNS-蛋白質, 經水解可生成DNS-氨基酸。通過聚酰胺薄膜層析分析DNS-氨基酸, 可確定蛋白質的N-末端氨基酸。此法靈敏度高, 也可用于蛋白質的氨基酸組成的測定。聚酰胺對極性物質的吸附作用是: 它能和被吸附物質間形成氫鍵, 這種氫鍵的強弱決定了被分離物與聚酰胺薄膜之間吸附能力的大小。層析時展層劑與被分離物在聚酰胺膜表面競爭形成氫鍵。因此選擇適當的展層劑使分離物在聚酰胺表面發生吸附、解吸附、再吸附和再解吸附的連續過程, 就能導致分離物達到分離的目的。實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 氨基酸丙酮丹磺酰氯鹽酸碳酸氫鈉甲酸水苯冰醋酸乙酸乙酯甲醇冰乙酸磷酸三鈉乙醇三乙胺儀器、耗材 真空干燥器水解管烘箱紫外分析燈玻璃試管聚酰胺薄膜實驗步驟 1. 標準氨基酸的丹磺酰化 分別稱取2 . 3μmol 層析純的氨基酸, 溶......閱讀全文
丹磺酰化法分析蛋白質－N末端氨基酸實驗
實驗方法原理 蛋白質的α-氨基與丹磺酰氯(DNS-Cl 是一種熒光物質) 反應, 生成DNS-蛋白質, 經水解可生成DNS-氨基酸。通過聚酰胺薄膜層析分析DNS-氨基酸, 可確定蛋白質的N-末端氨基酸。此法靈敏度高, 也可用于蛋白質的氨基酸組成的測定。聚酰胺對極性物質的吸附作用是: 它能和被
丹磺酰化法分析蛋白質－N末端氨基酸實驗
實驗方法原理蛋白質的α-氨基與丹磺酰氯(DNS-Cl 是一種熒光物質) 反應, 生成DNS-蛋白質, 經水解可生成DNS-氨基酸。通過聚酰胺薄膜層析分析DNS-氨基酸, 可確定蛋白質的N-末端氨基酸。此法靈敏度高, 也可用于蛋白質的氨基酸組成的測定。聚酰胺對極性物質的吸附作用是: 它能和被吸附物質間
丹磺酰化法分析蛋白質－N末端氨基酸實驗
丹磺酰化法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 蛋白質的α-氨基與丹磺酰氯(DNS-Cl 是一種熒光物質) 反應, 生成DNS-蛋白質, 經水解可生成DNS-氨基酸。通過聚酰
蛋白質一級結構的測定方法（二）
?? 2)末端分析 其方法較多，這里我們只介紹較常用的幾種。 (1)N-末端測定 A.二硝基氟苯法(FDNB，DNFB)：1945年Sanger提出此方法，是他的重要貢獻之一。 DNP-氨基酸用有機溶劑抽提后，通過層析位置可鑒定它是何種氨基酸。Sanger用此方法測定了胰島素的N末端分別為甘
丹磺酰法的定義和作用
中文名稱丹磺酰法英文名稱dansyl method;DNS method定 義測定氨基酸的一種方法，主要用于蛋白質肽鏈N端氨基酸的測定。用1-二甲氨基-5萘磺酰氯與氨基酸的α氨基反應生成發熒光的丹磺酰氨基酸，可用電泳或層析法分離鑒定是何種氨基酸的衍生物。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方
氨基酸結構和分類（二）
二、氨基酸的性質 （一）物理性質 α-氨基酸都是白色晶體，每種氨基酸都有特殊的結晶形狀，可以用來鑒別各種氨基酸。除胱氨酸和酪氨酸外，都能溶于水中。脯氨酸和羥脯氨酸還能溶于乙醇或乙MI中。 除甘氨酸外，α-氨基酸都有旋光性，α-碳原子具有手性。蘇氨酸和異亮氨酸有兩個手性碳原子。從蛋白質水解得到的氨基酸
氨基酸結構和分類（四）
三、一級結構的測定 （一）一級結構 蛋白質的一級結構是指肽鏈的氨基酸組成及其排列順序。氨基酸序列是蛋白質分子結構的基礎，它決定蛋白質的高級結構。一級結構可用氨基酸的三字母符號或單字母符號表示，從N-末端向C-末端書寫。采用三字母符號時，氨基酸之間用連字符（－）隔開。 （二）測定步驟 測定蛋白質的一級
成都生物所發明N亞磺酰基氨基酸酰胺化合物
不對稱有機小分子催化是近年來才發展起來的新型不對稱催化方法，由于其所用的手性有機小分子催化劑具有結構簡單、合成容易、造價低廉、所需生產工藝簡單、環境友好等特點，對該領域的研究引起了人們的高度重視。手性硫原子是一類非常有用的手性源，其已被廣泛用于手性助劑和手性配體，顯示出了非常優良的立體控制能力，
常用多肽修飾方法及過程綜述
多肽是一種由兩個或多個氨基酸通過肽鍵（酰胺鍵）連接而形成的化合物。多肽在調節機體各系統、器官、組織和細胞的功能活動以及在生命活動中發揮重要作用，并且常被應用于功能分析、抗體研究、藥物研發等領域。而通過對多肽進行修飾進而改變多肽的理化性質也是多肽研究中一種常用的手段。多肽修飾種類繁多，從修飾位點不同則
蛋白質測序——Edman降解法
蛋白質測序可用于： （1）鑒定蛋白質； （2）表征蛋白質翻譯后修飾。 （3）分析蛋白質一級結構與功能的關系。實驗方法原理主要有質譜法，利用蛋白質測序儀進行測序以及利用蛋白質對應DNA或mRNA進行間接測序。傳統的蛋白質測序實驗一般包括以下步驟：1.肽鏈的拆開和分離；2.測定蛋白質分子中多肽鏈的數目；
蛋白質測序
Edman降解法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 主要有質譜法，利用蛋白質測序儀進行測序以及利用蛋白質對應DNA或mRNA進行間接測序。傳統的蛋白質測序實驗一般包括以下步驟：1
血紅素結合人細胞質精氨酰tRNA合成酶并抑制其催化活力
10月5日，J. Biol. Chem.在線發表了中科院上海生命科學研究院生化與細胞所王恩多研究組研究論文：血紅素結合人細胞質精氨酰-tRNA合成酶并抑制其催化活力。 人細胞質精氨酰-tRNA合成酶(hcArgRS)催化tRNAArg氨基酰化生成Arg
蛋白質測序
一、概念當前，所謂蛋白質測序，主要指的是蛋白質的一級結構的測定。蛋白質的一級結構(Primary structure)包括組成蛋白質的多肽鏈數目。很多場合多肽和蛋白質可以等同使用。多肽鏈的氨基酸順序，它是蛋白質生物功能的基礎。 蛋白質氨基酸順序的測定是蛋白質化學研究的基礎。自從1953年F.San
蛋白質測序
一、概念當前，所謂蛋白質測序，主要指的是蛋白質的一級結構的測定。蛋白質的一級結構(Primary structure)包括組成蛋白質的多肽鏈數目。很多場合多肽和蛋白質可以等同使用。多肽鏈的氨基酸順序，它是蛋白質生物功能的基礎。 蛋白質氨基酸順序的測定是蛋白質化學研究的基礎。自從1953年F.San
蛋白質測序
一、概念當前，所謂蛋白質測序，主要指的是蛋白質的一級結構的測定。蛋白質的一級結構(Primary structure)包括組成蛋白質的多肽鏈數目。很多場合多肽和蛋白質可以等同使用。多肽鏈的氨基酸順序，它是蛋白質生物功能的基礎。 蛋白質氨基酸順序的測定是蛋白質化學研究的基礎。自從1953年F.San
蛋白質測序的測定步驟
1 多肽鏈的拆分。由多條多肽鏈組成的蛋白質分子，必須先進行拆分。幾條多肽鏈借助非共價鍵連接在一起，稱為寡聚蛋白質，如，血紅蛋白為四聚體，烯醇化酶為二聚體；可用8mol/L尿素或6mol/L鹽酸胍處理，即可分開多肽鏈(亞基).2 測定蛋白質分子中多肽鏈的數目。通過測定末端氨基酸殘基的摩爾數與蛋白質分子
血清載脂蛋白CII測定的檢查過程
末端氨基的分析，是鑒定蛋白質純度的方法之一。一條肽鏈的蛋白質，通過N-末端的定量分析，每克分子蛋白質應當有整數克分子的N-末端氨基酸，少量其他末端氨基酸的存在，常常表示存在有雜質。 分析蛋白質各種氨基酸百分比，也可作為蛋白質各類鑒定的參考值。 最終的純度標準，應當是氨基酸順序的測定。
多肽修飾合成常用策略（二）
4、豆蔻酰化和棕櫚酰化用脂肪酸酰化N末端可以讓多肽或蛋白質與細胞膜結合。N末端上豆蔻酰化的序列可以使Src家族的蛋白激酶和逆轉錄酶Gaq蛋白靶向結合細胞膜。利用標準的偶聯反應即可將豆蔻酸連接到樹脂-多肽的N末端，生成的脂肽可在標準條件下解離并通過RP-HPLC純化。5、糖基化糖肽類如萬古霉素和替考拉
羧肽酶的種類及其特點
根據羧肽酶活性中心含有絲氨酸殘基、金屬離子和半胱氨酸殘基的不同，將羧肽酶分為絲氨酸羧肽酶(EC3.4.16.-).金屬羧肽酶(EC3.4.17.-)和半胱氨酸羧肽酶(EC3.4.18.-)。絲氨酸羧肽酶絲氨酸羧肽酶(Seinecarboxypeptidases,SCP)又稱酸性羧肽酶，是一類真核生物
羧肽酶的種類及其特點
根據羧肽酶活性中心含有絲氨酸殘基、金屬離子和半胱氨酸殘基的不同，將羧肽酶分為絲氨酸羧肽酶(EC3.4.16.-).金屬羧肽酶(EC3.4.17.-)和半胱氨酸羧肽酶(EC3.4.18.-)。絲氨酸羧肽酶絲氨酸羧肽酶(Seinecarboxypeptidases,SCP)又稱酸性羧肽酶，是一類真核生物
干貨分享——揭開糖基化修飾的神秘面紗
相對于磷酸化、乙酰化修飾等相對較為簡單的PTM來講，糖基化修飾稍顯復雜和多樣，各位看官對糖基化修飾的知識了解多少呢？是否又對O糖、N糖傻傻分不清楚呢？沒關系，今天小編帶您一起走進糖的世界，一起揭開糖基化修飾的神秘面紗。 糖基化修飾主要發生在內質網和高爾基體。主要過程是將糖基在糖基轉移酶作用下將
【干貨分享】四大類糖基化修飾
相對于磷酸化、乙酰化修飾等相對較為簡單的PTM來講，糖基化修飾稍顯復雜和多樣，各位看官對糖基化修飾的知識了解多少呢？是否又對O糖、N糖傻傻分不清楚呢？沒關系，今天小編帶您一起走進糖的世界，一起揭開糖基化修飾的神秘面紗。 糖基化修飾主要發生在內質網和高爾基體。主要過程是將糖基在糖基轉移酶作用下將
血清載脂蛋白CII測定的注意事項及檢查過程
注意事項 檢查前禁忌：禁止服用某些藥物（如避孕藥、甲狀腺激素、甾體激素等）可影響血脂水平。 檢查時要求：近期應無急性疾病、損傷或外科手術史。 檢查過程 末端氨基的分析，是鑒定蛋白質純度的方法之一。一條肽鏈的蛋白質，通過N-末端的定量分析，每克分子蛋白質應當有整數克分子的N-末端氨基酸，少
末端分析的概念和產業方法
中文名稱末端分析英文名稱terminal analysis定 義常指蛋白質肽鏈兩端氨基酸的分析。對于N端分析有三種方法：桑格-庫森法、丹璜酰法和埃德曼降解法，后者可連續測入，并可自動化操作；對于C端分析，主要用外肽酶，如一些羧肽酶，將肽鏈的羧基末端氨基酸切下分析。應用學科生物化學與分子生物學（一級
常見5種蛋白質中氨基酸的分析實驗
在生命科學的基礎研究中，分離、提純蛋白質是重要而繁鎖的工作。生物體中各種蛋白質的氨基酸組成（或構筑）不盡相同。鑒定純蛋白的最基本方法之一是測定其氨基酸的組分及含量。幾年來，我們對一些蛋白質樣品（達電泳純）進行氨基酸分析，為鑒定蛋白質的結構與純度提供了一項指標。有些蛋白質是國內首次提取或報道。現將
上海生科院揭示tRNA氨基酸在蛋白質生物合成中的作用
上海生科院揭示了tRNA氨基酸接受末端在蛋白質生物合成及其精確性調控中的作用 7月20日，《核酸研究》(Nucleic Acids Research)在線發表了中科院上海生命科學研究院生化與細胞所王恩多研究組的最新研究成果。該研究揭示了tRNA氨基酸接受末端在蛋白質生物合成及其精確性
多肽修飾合成常用策略（一）
多肽是由多個氨基酸通過肽鍵連接而形成的一類化合物，普遍存在于生物體內，迄今在生物體內發現的多肽已達數萬種。多肽在調節機體各系統、器官、組織和細胞的功能活動以及在生命活動中發揮重要作用，并且常被應用于功能分析、抗體研究、藥物研發等領域。隨著生物技術與多肽合成技術的日臻成熟，越來越多的多肽藥物被開發并應
青霉素結合蛋白的結構介紹
以前是通過細菌提取的羧肽酶的青霉素-肽衍生物的氨基酸序列分析弄清了數種PBPs的活性中心，結果顯示細菌PBP活性中心常是絲氨酸，β-內酰胺類抗生素正是通過其β-內酰胺環中的羧基和細菌相應的PBPs的絲氨酸的羥基共價結合成絲氨酸酯起作用。另外也有研究表明可能存在半胱氨酸-巰基為活性中心的羧肽酶。后
生物素酰化探針的制備實驗——切口平移法
在標準的切口平移實驗體系中，生物素-11-dNTP取代了dNTP，DNA酶I 的濃度調整到可生成長100~500個核苷酸的范圍，其他生物素酰化的核苷酸也可代替生生物素-11-dNTP。實驗材料DNA試劑、試劑盒DNA聚合酶dNTP2-疏基乙醇生物素甘油NaClEDTASDS無水乙醇儀器、耗材注射器電
磷酸氨基酸分析實驗
鑒定蛋白質中磷酸化的氨基酸殘基是很有意義的。磷酸化作用發生在蛋白質的絲氨酸、蘇氨酸和酩氨酸時，通過部分的HCl水解及接著進行雙向薄層電泳，可以便利地鑒定 標記的磷酸氨基酸。實驗方法酸水解法磷酸化蛋白質 印度墨汁 HCl 磷酸氨基酸混合物 電泳緩沖液 茚三酮 PVDF膜 烘箱 離心機 離心管 纖維素薄