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一、實驗原理細胞培養可分為原代培養和傳代培養。直接從體內獲取的組織細胞進行首次培養為原代培養；當原代培養的細胞增殖達到一定密度后，則需要做再培養， 即將培養的細胞分散后，從一個容器以1：2或其他比率轉移到另一個或幾個容器中擴大培養，為傳代培養，傳代培養的累積次數就是細胞的代數。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以最大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或DMSO作保護劑，這兩種物質能提高 細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方 法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。二、實驗方法材料：小鼠，生理鹽水，100ml滅菌燒杯，15ml離心管，培養皿，滴管，無菌鑷子、剪刀，篩網，泡沫板，大頭針，酒精燈，培養瓶，培養 液，PBS......閱讀全文
一、實驗原理細胞培養可分為原代培養和傳代培養。直接從體內獲取的組織細胞進行首次培養為原代培養；當原代培養的細胞增殖達到一定密度后，則需要做再培養， 即將培養的細胞分散后，從一個容器以1：2或其他比率轉移到另一個或幾個容器中擴大培養，為傳代培養，傳代培養的累積次數就是細胞的代數。細胞凍存及復蘇的基
一、實驗原理細胞培養可分為原代培養和傳代培養。直接從體內獲取的組織細胞進行首次培養為原代培養；當原代培養的細胞增殖達到一定密度后，則需要做再培養， 即將培養的細胞分散后，從一個容器以1：2或其他比率轉移到另一個或幾個容器中擴大培養，為傳代培養，傳代培養的累積次數就是細胞的代數。細胞凍存及復蘇的基
一、實驗原理細胞培養可分為原代培養和傳代培養。直接從體內獲取的組織細胞進行首次培養為原代培養；當原代培養的細胞增殖達到一定密度后，則需要做再培養， 即將培養的細胞分散后，從一個容器以1：2或其他比率轉移到另一個或幾個容器中擴大培養，為傳代培養，傳代培養的累積次數就是細胞的代數。細胞凍存及復蘇的基本原
人類多能干細胞(hPSCs)因其擁有分化為機體所有類型細胞的能力，使得hPSCs成為研究發育機制以及疾病機理最常用的工具，同時在再生醫學以及疾病治療領域也有非常廣泛應用。人類多能干細胞因其來源不同又可分為胚胎干細胞（Embryonic stem cell，ESCs）和誘導多能干細胞（induced
（二）細胞融合 1．細胞融合前準備 （1）骨髓瘤細胞系的選擇：骨髓瘤細胞應和免疫動物屬于同一品系，這樣雜交融合率高，也便于接種雜交瘤在同一品系小鼠腹腔內產生大量McAb。常用的骨髓瘤細胞系見表2-4。表2-4用于融合試驗的主要骨髓瘤細胞系名 稱來 源耐 受 藥 物Ig鏈H LP3/X63-Ag
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術 實驗方法原理 1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨
實驗方法原理 1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤
實驗方法原理1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。 制備單
下面的方案分成 3 個階段：用 pTet-tTAk 穩定轉染成纖維細胞，穩定轉染可誘導表達 tTA 的 NIH-3T3 細胞，分析轉染細胞中的蛋白表達。穩定轉染細胞系表達反式激活因子和靶基因分為兩個階段。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗
實驗步驟2.3 小 鼠 胚 胎 飼 養 細 胞（MEF) 的 制 備最廣泛地用于支持 h E S 的伺養層細胞來自小鼠胚胎 [丁]^〇 1113 〇 1161&1,， 1998;Reu-binoffetal. ， 2000]，如小鼠胚胎飼養細胞（MEFs) ，盡管它們可能是最原始的間葉細胞的
實驗概要了解小鼠胚胎干細胞的培養方法。主要試劑1. 貯存液 DMEM(高糖) 胎牛血清 L-谷氨酰胺（200mM） MEM NEAA（10mM） HEPES（1M） β-巰基乙醇（55Mm） 轉鐵蛋白50mg/ml 胰島素5mg/ml 亞硒酸鈉300μM 黃體酮（20μM） 腐
實驗材料 pSV2-His 帶有靶基因開放閱讀框的 pTet-Splice 帶有報道基因的 pTet-Spliqe N
實驗概要hESCs的分離及建系主要試劑hESCs培養液、DPBS、0.25%Trypsin、1 mg/mL膠原酶Ⅳ、絲裂霉素C、0.1%明膠、囊胚培養液G2、胚胎凍存液、細胞基礎培養液主要設備35 mm培養皿、4孔培養板、濾器、注射器針頭；2 mL、5 mL、10 mL、15 mL、25 mL、50
1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。 制備單克隆抗體包括動物免疫
實驗概要monESCs傳代、凍存及復蘇主要試劑DMEM/F12培養液、monESCs培養液、凍存液C、1 mg/mL膠原酶Ⅳ主要設備15 mL離心管，5 mL、10 mL移液管，凍存管、6孔培養板、倒置顯微鏡實驗步驟傳代前一天首先準備好MEF飼養層細胞，飼養層細胞要求密度為1.2×104～1.5×1
實驗概要hESCs傳代、凍存及復蘇主要試劑KODMEM、0.25%Trypsin、1 mg/mL膠原酶Ⅳ或者Dispase、0.1%明膠、細胞基礎培養液、hESCs培養液、凍存液C主要設備2 mL移液管、5 mL移液管、10 mL移液管、15 mL移液管、25 mL移液管、15 mL離心管、50 m
實驗方法原理目前長時間保存細胞的方法是將細胞低溫凍結保存在液氮中（－196 ℃），保存時間可長達一年甚至幾年，用時解凍，大多數細胞仍能生長繁殖，為妥善起見，細胞凍存一年后應復蘇培養后再凍存。凍存細胞時應加入保護劑，否則，細胞內外的水會結成冰晶，使細胞發生機械損傷。加入保護劑后，可使冰點降低
凍存細胞的復蘇可以用于：（1）在細胞的實驗操作中，凍存的細胞要進行復蘇，再培養傳代。（2）持久地保留細胞系實驗方法原理凍存細胞應在流水中快速融化并加入生長培養液。實驗者應配戴護目鏡和手套，因為曾浸沒在液氮中的凍存管中可能漏人液氮，而當融化凍存液時凍存管中的氣體溫度上升可導致爆炸。實驗材料凍存細胞試劑
感受態細胞的制備(一)制備新鮮或冷凍的大腸桿菌感受態細胞 下述操作方案是由Hanahan(1983)提供的，所制備的大腸桿菌DHl、DH5和ＭＭ249感受態細胞培養物能使每微克超螺旋ＤＮＡ以≥5x108轉化菌落的頻率進行轉化，其他大多數大腸桿菌菌株的最高轉化率大約只有前述菌株的1/10
培養的表皮角質形成細胞可用作：（1）分化模型、器官型培養的理想組織構建物和細胞間相互作用的研究；（2）燒傷或外傷修復的移植物。實驗方法原理用酶消化法將表皮與真皮分開，然后分離角質形成細胞，用無血清培養液培養或在生長停止的飼養層細胞上培養。 實驗材料皮膚組織試劑、試劑盒熱解素胰蛋白酶SKDM
實驗方法原理 用酶消化法將表皮與真皮分開，然后分離角質形成細胞，用無血清培養液培養或在生長停止的飼養層細胞上培養。
腫瘤細胞冷凍與復蘇是細胞培養的常規工作，可以解決細胞因為連續繼代造成的退變或轉化。細胞的原代培養和傳代培養以及細胞凍存和復蘇后都需要細胞計數。那么細胞計數與存活的測試實驗方法有哪些呢？1、原理：（1）計算細胞數目可用血球計數盤或是Coultercounter粒子計數器自動計數。（2）血球計數盤一般有
實驗概要小鼠精原干細胞分離培養主要試劑0.1%明膠、DPBS、0.25%胰蛋白酶、400目細胞篩、精原干細胞培養液、1 mg/mL膠原酶Ⅳ、7 mg/mLDNase、細胞基礎培養液、DMEM-C、精原干細胞凍存液(Kubota et. al., 2004a and 2004b)（4℃條件下可
細胞凍存和復蘇可以：（1）用于生物學保種；（2）用于醫學上干細胞研究；（3）用于傳代培養。實驗方法原理細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以最大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減
實驗概要本實驗介紹了已凍存的HEK293和HeLa細胞的傳代培養，包括細胞復蘇、傳代和凍存。主要試劑細胞培養液成分為RPMI1640基本培養液 10%胎牛血清 1%三抗，PBS，凍存培養液(含10%DMSO或甘油)，Trypsine-EDTA消化液，液氮主要設備水浴鍋，35mm培養皿，37℃培養箱，
實驗概要用于小鼠誘導多能干細胞的逆轉錄病毒的制備及感染主要試劑0.05%Trypsin、Polybrene、細胞基礎培養液、DPBS、凍存液、Lipo LTX、Opti-MEM、Plat-E培養液、0.1%明膠主要設備35 mm、60 mm、100 mm培養皿；1.5 mL、15 mL、50 mL離
骨髓瘤細胞的培養可用一般的培養液，如RPMI1640，DMEM培養基。小牛血清的濃度一般在10%～20%，細胞濃度以104～5×105/ml為宜，最大濃度不得超過106/ml。當細胞處于對數生長的中期時，可按1：3～1：10的比例傳代。每3～5天傳代一次。細胞在傳代過程中，部分細胞可能有返祖現象，
小生剛開始做細胞培養不久，對于一個細胞培養的新手來說，最怕的就是細胞受污染。所以本人翻閱了一些園子里的關于細胞培養過程中的污染問題的貼子，結合平時查閱資料以及這些天的細胞培養的一些心得，整理出一些關于細胞污染的東東與大家一起分享。希望能對剛踏入細胞培養的同仁們有些幫助，也希望各位達人作出補充，大家共
細胞凍存和復蘇細胞凍存后可保存種子細胞，以便隨時取用；減少細胞被微生物污染的危險性；減少細胞之間交叉污染的危險性；減少細胞因傳代培養而引起的遺傳變異和形態改變；避免有限細胞系出現衰老或惡性轉化。凍存細胞前，應對細胞進行鑒定并檢查是否被污染。細胞凍存及復蘇的基本原則是“慢凍快融”，這樣可以最大限度的保
單克隆抗體的制備實驗可以用于：（1）將產生抗體的單個B淋巴細胞同骨髓腫瘤細胞雜交， 獲得既能產生抗體， 又能無限增殖的雜種細胞，并以此生產抗體；（2）該技術是僅由一種類型的細胞制造出來的抗體，對應于多克隆抗體、多株抗體——由多種類型的細胞制造出來的一種抗體。實驗方法原理單克隆抗體技術(monoclo