TRIzol法同時提取RNA、DNA、蛋白質
TRIzol試劑適用于從細胞和組織中快速分離RNA。TRIzol試劑有多組分分離作用，與其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、鹽酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特點是可同時分離一個樣品的RNA\DNA\蛋白質.TRIzol使樣品勻漿化，細胞裂解，溶解細胞內含物，同時因含有RNase抑制劑可保持RNA的完整性。在加入氯仿離心后，溶液分為水相和有機相，RNA在水相中。取出水相用異丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中間層可回收DNA；用異丙醇沉淀有機相可回收蛋白質。TRIzol試劑可用于小量樣品（50～100mg組織、5×106細胞）也適用于大量樣品（≥1g組織、>107細胞）。對人，動物，植物組織，細菌均適用，可同時處理大量不同樣品，整個提取過程在一小時內即可完成。分離的總RNA無蛋白質和DNA污染，可用于Northern Blot，dot blot，ployA篩選，體外翻譯，RNase保護分析和分子克隆。在用于RT-PCR時如......閱讀全文
DNA抽提指南(TRIZOL)
按照RNA 分離操作方案在完全移去水樣層后，勻漿中的DNA 存在于中間層和苯酚層中也可以被分離出來。在沉淀和多次洗脫后，DNA 溶解在8 mM NaOH中。用TRIZOL試劑從組織和培養細胞中完全回收的DNA 可以用來做樣品中DNA 含量的測定。同時抽提的基因組DNA 可以用于對Northern a
TRIzol法同時提取RNA、DNA、蛋白質
TRIzol試劑適用于從細胞和組織中快速分離RNA。TRIzol試劑有多組分分離作用，與其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、鹽酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特點是可同時分離一個樣品的RNA\DNA\蛋白質.TRIzol使樣品勻漿化，細胞裂解，溶解細胞內含物，同時因含有RNase抑制劑可保持RNA
TRIzol法同時提取RNA、DNA、蛋白質
TRIzol試劑適用于從細胞和組織中快速分離RNA。TRIzol試劑有多組分分離作用，與其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、鹽酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特點是可同時分離一個樣品的RNA\DNA\蛋白質.TRIzol使樣品勻漿化，細胞裂解，溶解細胞內含物，同時因含有RNase抑制劑可保持RNA
TRIzol法同時提取RNA、DNA、蛋白質3
DNA污染：A. 樣品勻漿時加的試劑量太少。B.樣品中含有有機溶劑（如乙醇，DMSO等），強緩沖液或堿性溶液。蛋白聚糖和多糖污染：沉淀RNA的過程中作以下改進可去除這些污染，步驟7中，每使用1ml TRIzol在水相中加0.25ml異丙醇和0.25ml高鹽溶液（0.8M檸檬酸鈉和1.2MNaCl）混
TRIzol法同時提取RNA、DNA、蛋白質4
注意事項：1. DNA在中間層和有機相中時可在2～8℃保存過夜。2.DNA沉淀在75%乙醇中2～8℃可保存幾個月。3.DNA在8mM NaOH溶液中4℃可放置過夜，如長期保存需用HEPES調節pH至7～8并且加EDTA至1mM，可置于4℃或-20℃長期保存。常見問題分析：得率低：A.樣品勻漿和裂解的
TRIzol法同時提取RNA、DNA、蛋白質2
5. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。6. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1mlTRIzol加入0
TRIzol法同時提取RNA、DNA、蛋白質（一）
TRIzol試劑適用于從細胞和組織中快速分離RNA。TRIzol試劑有多組分分離作用，與其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、鹽酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特點是可同時分離一個樣品的RNA\DNA\蛋白質.TRIzol使樣品勻漿化，細胞裂解，溶解細胞內含物，同時因含有RNase抑制劑可保持RNA
TRIzol法同時提取RNA、DNA、蛋白質（二）
DNA的分離準備試劑：乙醇0.1M檸檬酸鈉（含10%乙醇）、 75%乙醇、8mM NaOH操作步驟：1. 樣品加氯仿分層后，移去上層水相，用乙醇沉淀中間層和有機相中的DNA。每使用1mlTRIzol加0.3ml無水乙醇混勻，室溫放置3分鐘，2～8℃不超過2000×g離心5分鐘。2. 移去上清，（如需
TRIzol－Prep
Procedure1.? Homogenize cells (10 million) or tissue (50-100 mg) in 1 mL?TRIzol Reagent?(e.g. scrape and pass through 30G needle, dounce homogenize an
TRIzol－RNA提取方法
研究基因的表達和調控時常常要從組織和細胞中分離和純化RNA。TRIzol RNA提取方法：（1）操作簡單的，提取方便，回收率高； （2）提取的RNA的質量高，對cDNA庫，RT-PCR和Northern?Blot等分子生物學實驗起著很重要的影響。實驗方法原理Trizol是一種新型總RNA抽提試劑，采
TRIzol－RNA提取方法
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 Trizol是一種新型總RNA抽提試劑，采用變性劑即內含異硫氰酸胍酚和β-巰基乙醇等變性物質，能迅速破碎細胞，抑制細胞釋放出的核酸酶。異硫氰酸胍屬于解偶劑，是一類強力的蛋白質變性劑，可溶解蛋白質，并使蛋白質二級結構消失，細胞結構
TRIzol－RNA提取方法
（一）試劑準備1．TRIzol試劑。2．氯仿3．異丙醇4．75%乙醇（DEPC H2O配制）5．DEPC H2O（二）操作步驟1． 樣品處理：（1）培養細胞：收獲細胞1-5×107，移入1.5ml離心管中，加入1ml Trizol，混勻，室溫靜置5min。（2）組織：取50-100mg組織（新鮮或-
RNA－extraction－using－trizol/tri
RNA extraction with TRIzol (Invitrogen product name) or the equivalent TRI (Sigma-Aldrich product name) is a common method of total?RNA extraction?fro
總RNA提取（Trizol提取）
在收集到生物材料之后，最好能即刻進行RNA 制備工作。若需暫時儲存，則應以液氮將生物材料急速冷凍后，儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA 時，將儲存于冷凍柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細胞，不可以先行解凍，以避免RNase 的作用。1. 提取組織RNA 時，每50～100mg 組織用1ml
TRIZOL提取注意事項
警告: 有毒物接觸皮膚或者不慎吞服。會導致灼傷。一旦接觸皮膚后立即以大量的洗滌劑和清水清洗。若感不適，看醫生并尋求苯酚和其他成分(JTSRN 80100437-5000p)的正確治療方案。）? TRIZOL在室溫下能穩定保存12個月。盡管如此，為達到最佳效果，我們建議保存在2—8°C的環境下。一般描
使用－Trizol－純化－RNA－實驗
RNA 分離的酚基試劑的生產以 Chomczynski 方案為基礎。這些方案在從富含 RNA 酶的組織如胰腺中獲取 RNA 時最有用。這里介紹的是隨 Invitrogen 的 Trizol 試劑出售的方案的摘要，經 Invitrogen 允許做了修改。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：
使用－Trizol－純化－RNA－實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 磨細的組織 試劑、試劑盒 Trizol 氯仿 異丙醇 乙醇
使用－Trizol－純化－RNA－實驗
實驗材料 磨細的組織試劑、試劑盒 Trizol氯仿異丙醇乙醇DEPC處理過的水實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑Trizol(Invitrogen)氯仿異丙醇乙醇，75%，用焦碳酸二乙酯（DEPC) 處理過的水配制DEPC 處理過的水2. 細胞和組織50~100 mg 已磨細的組織二、方法1
TRIzol有無毒性
TRIzol有毒性，trizol中含有苯酚，苯酚是刺激性氣味。對呼吸道有傷害，聞久了會有暈的感覺。1、TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解細胞，使細胞中的蛋白，核酸物質解聚得到釋放。2、苯酚雖可有效地變性蛋白質，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中還加入了8－羥基喹啉、異硫氰
蛋白抽提指南（TRIZOL）
在用酒精沉淀出DNA（DNA抽提中的步驟一）后剩余的苯酚—乙醇上清中可以抽提出蛋白。沉淀的蛋白可通過蛋白[質]印跡法對樣品中某一特殊的蛋白質進行分析。試劑所需，但沒有隨同提供的物品：* 異丙醇* 0.3M鹽酸胍(用95%酒精配制)* 無水乙醇* 1% SDS1.蛋白質的沉淀用異丙醇從苯酚—乙醇上清中
TRIZOL提取注意事項2
實驗所需但試劑未提供的物品：* 氯仿 *異丙醇* 75%乙醇(用DEPC處理過的水配制)*無RNA酶的水或0.5% SDS溶液［配無RNA酶的水，將水加入無RNA酶的玻璃瓶中，加入DEPC至0.01% (v/v)。放置過夜并高壓滅菌。SDS溶液必須用DEPC處理過并經高壓滅菌的水配制。］1.勻漿化作
TRIZOL提取注意事項3
3.臺式離心機最大能達到2,600×g的離心力，如果將離心時間延長到30-60分鐘可以滿足步驟2和步驟3中的操作。疑難解答：RNA抽提每1 mg組織或1×106培養細胞預期的RNA產量1.肝和脾，6—10μg2.腎，3—4μg3.骨骼肌和腦組織，1—1.5μg4.胎盤，1-4μg5.上皮細胞(1×1
RNA抽提指南(TRIZOL法)
RNA抽提指南(TRIZOL法)注意事項：* 全程佩戴一次性手套。皮膚經常帶有細菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成為RNA酶的來源。培養良好的微生物實驗操作習慣預防微生物污染。* 使用滅菌的，一次性的塑料器皿和自動吸管抽提RNA，避免使用公共儀器所導致的RNA酶交叉污染。例如，使用RNA探針的實驗室
TRIZOL提取RNA的詳細步驟
1、在提取組織RNA時，每50～100mg組織用1ml Trizol試劑對組織進行裂解；提取細胞RNA時，先離心沉淀細胞，每5-10╳106個細胞加1ml Trizol后，反復用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細胞。2、將組織或細胞的Trizol裂解液轉入EP管中,在室溫15~30C下放置5分鐘；在EP管中，
總RNA的提取（Trizol法提取）
在收集到生物材料之后，最好能即刻進行RNA制備工作。若需暫時儲存，則應以液氮將生物材料急速冷凍后，儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時，將儲存于冷凍柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細胞，不可以先行解凍，以避免RNase的作用。1.????? 提取組織RNA時，每50～100mg組織用1ml
Trizol法提取總RNA的原理
Trizol試劑的主要成分是苯/酚。苯/酚的主要作用是對細胞進行裂解，從而使細胞當中的蛋白質以及核酸物質解聚而得以釋放。苯/酚雖然可以有效的使蛋白質變性，但它不能完全抑制RNA酶的活性，因此Trizol中還加入了8－羥基喹/啉、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇等來抑制內源和外源RNase（即RNA酶）。Tr
采用Trizol－溶液提取細菌總RNA
實驗概要了解用Trizol 溶液提取細菌總 RNA的方法。實驗原理Trizol主要物質是異硫氰酸胍，它可以破壞細胞使RNA釋放出來的同時，保護RNA的完整性。加入氯仿后離心，樣品分成水樣層和有機層。RNA存在于水樣層中。收集上面的的水樣層后，RNA ?可以通過異丙醇沉淀來還原。無論是人、動物、植物還
TRIzol影響實驗結果？miRNA文章被撤回
韓國首爾大學的科學家Narry Kim(金娜蕊)及其研究小組近日撤回了一篇關于microRNA(miRNA)衰減的文章，因為她們發現，所用的TRIzol試劑會對富含GC的miRNA或具二級結構的miRNA產生不同影響。 這篇文章去年發表于《Molecular Cell》雜志上。研究
動物RNA提取實驗——Trizol試劑提取法
實驗方法原理Trizol試劑是一個包含酚、異硫氰酸胍和SDS的單相酸性溶液，其在裂解細胞的同時抑制RNase的活性，隨后加入氯仿，酚會大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同，造成DNA分布在下層的氯仿酚溶液中，RNA則分布在上層的水相中，最后用異丙醇沉淀水相中的RNA，并用70
trizol試劑提取細胞內總RNA
最好在4度下離心。因為在4度下，RNA酶的活性低，總RNA降解的也就越少。在常溫下離心RNA比4度更容易降解。