凝集素顯示糖類細胞化學實驗
凝集素(lectin)是一種無免疫原性糖蛋白,與糖的結合有一定專一性,如伴刀豆凝集素只與葡萄糖、甘露糖結合,麥胚凝集素只與 N-乙酰葡萄糖結合。并且,凝集素還可與標記物結合,如膠體金、辣根過氧化物酶等,因此可將作為檢測糖基的一種簡單而具有選擇性的探針。不過由于糖類的復雜性以及凝集素特異的相對性,凝集素顯示糖類細胞化學結果相對比較粗糙。細胞成熟過程中、腫瘤細胞或細胞發生損傷等情況下,凝集素分布情況都可發生改變。實驗材料組織樣品試劑、試劑盒凝集素-膠體金探針鋨酸實驗步驟1. 制備或購買凝集素-膠體金探針。2. 組織常規固定,游離細胞打散,組織切片切薄。3. 漂洗 3 次。4. 5~25 μg/ml 凝集素-膠體金 15~25℃ 孵育 30~60 min。5. 漂洗、鋨酸固定同常規注意事項1. 凝集素與糖的結合屬于親和細胞化學,因此可參照免疫細胞化學方法。2. 如果凝集素為生物素化的凝集素,可以用 ABC 或親和素金標記顯示。......閱讀全文
凝集素顯示糖類細胞化學實驗
實驗方法原理 實驗材料 組織樣品試劑、試劑盒 凝集素-膠體金探針鋨酸實驗步驟 1. 制備或購買凝集素-膠體金探針。2. 組織常規固定,游離細胞打散,組織切片切薄。3. 漂洗 3 次。4. 5~25 μg/ml 凝集素-膠體金 15~25℃ 孵育 30~60 min。5. 漂洗、鋨酸固定同常規注意事項
凝集素顯示糖類細胞化學實驗
凝集素(lectin)是一種無免疫原性糖蛋白,與糖的結合有一定專一性,如伴刀豆凝集素只與葡萄糖、甘露糖結合,麥胚凝集素只與 N-乙酰葡萄糖結合。并且,凝集素還可與標記物結合,如膠體金、辣根過氧化物酶等,因此可將作為檢測糖基的一種簡單而具有選擇性的探針。不過由于糖類的復雜性以及凝集素特異的相對性,凝集
細胞膜糖類電鏡顯示實驗
實驗方法原理 細胞膜糖類包括糖蛋白和糖脂,其顯示技術較常用的是凝集素細胞化學技術,此外,還有釕紅染色法等。釕紅染色法的原理是釕紅可以與羧基(酸性基)通過靜電結合,電鏡下呈電子密度高染色。實驗材料 組織樣品試劑、試劑盒 釕紅原液戊二醛 二甲胂酸鈉緩沖液鋨酸實驗步驟 1. 釕紅原液配制釕紅溶于雙蒸水,濃
細胞膜糖類電鏡顯示實驗——釕紅染色法
細胞膜糖類 電鏡 顯示技術 免疫組織化學實驗技術及應用 第十四章細胞膜糖類電鏡顯示實驗可以用于:觀察細胞膜上的糖蛋白和糖脂。其顯示技術較常用的是凝集素細胞化學技術,此外,還有釕紅染色法等。實驗方法原理釕紅染色法的原理是釕紅可以與羧基(酸性基)通過靜電結合,電鏡下呈電子密度高染色。實驗材料組織樣品試劑
自由基顯示實驗_細胞化學法
實驗材料組織樣品試劑、試劑盒DABMnCl2TrisCaCl2KClNaOHTris 緩沖液多聚甲醛鋨酸實驗步驟1. 組織取材后,即放入孵育液中,孵育 5 min。孵育液配方如下:DAB 2.5 mmol/L, MnCl2?0.5 mmol/L,Tris 4 mmol/L,CaCl2?2 mmol/
乙酰膽堿受體顯示細胞化學實驗
乙酰膽堿受體分布于神經肌肉接頭等處,蛇毒素可與之緊密結合,并連接過氧化物酶,通過化學反應可在電鏡下觀察到乙酰膽堿受體分布。實驗材料組織樣品試劑、試劑盒磷酸鉀戊二醛KOH蔗糖焦銻酸鉀鋨酸實驗步驟1. 組織切成約 1 mm3?的小塊,用 0.09 mol/L 磷酸鉀(或草酸鉀)-3% 戊二醛(pH 7.
乙酰膽堿受體顯示細胞化學實驗
實驗材料 組織樣品試劑、試劑盒 磷酸鉀戊二醛KOH蔗糖焦銻酸鉀鋨酸實驗步驟 1. 組織切成約 1 mm3 的小塊,用 0.09 mol/L 磷酸鉀(或草酸鉀)-3% 戊二醛(pH 7.3,用 0.1%~1% KOH 調 pH)固定 4 h 以上,4℃。也有人推薦固定早期用微波照射,以加速固定
糖類染色實驗
實驗方法原理 糖原由多糖衍化而來,是單純的多糖。糖原易溶于水,所以用特殊的 Carnoy 固定液或無水乙醇直接固定才能較好地保存糖原,常用高碘酸(periodic acid)-Shiff 反應(PAS)染色法。實驗材料 石蠟組織切片試劑、試劑盒 高碘酸蒸餾水堿性復紅鹽酸 焦亞硫酸鈉(偏重亞硫酸鈉)雙
細胞化學技術常用顯示方法
1.?金屬沉淀法:利用金屬化合物在反應過程中生成有色沉淀,借以辨認所檢查的物質或酶活性。如磷酸酶分解磷酸酯底物后,反應產物最終生成CoS 或PbS有色沉淀,而顯示出酶活性。2. 偶氮偶聯法:酚類化合物與偶氮染料結合后可以形成耐曬染料。3. Schiff 反應:細胞中的醛基可使Schiff 試劑中的無
糖類的化學分類
糖類物質是多羥基醛或酮,據此可分為醛糖(aldose)和酮糖(ketose)。糖還可根據碳原子數分為丙糖(triose),丁糖(terose),戊糖(pentose)、己糖(hexose)。最簡單的糖類就是丙糖(甘油醛和二羥丙酮)由于絕大多數的糖類化合物都可以用通式Cn(H2O)n表示,所以過去人們
單細胞mRNA差異顯示實驗
實驗方法原理 ##流程圖試劑、試劑盒 溶液和緩沖液儀器、耗材 水浴槽PCR熱循環儀微量離心機塑料制品和濾器實驗步驟 一、RNA 的分離收集對照組和實驗組細胞,放入含 45ul2 mmol/L DTT 的 1.5 ml 微量離心管中。95℃ 水浴熱解 2 min。每管加入以下物質:37℃ 溫育 30
單細胞mRNA差異顯示實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 ##流程圖 試劑、試劑盒 溶液和緩沖液 儀器、耗材
單細胞mRNA差異顯示實驗
目前有幾種方法可以顯示生理刺激下組織樣本中未知基因的表達水平變化。然而, 很多組織內的細胞又存在形態和功能上的異質性,因此常常需要從單個細胞水平研究基因表達的差異。現在,我們介紹一種新方法,它常規用來在單細胞水平考察未知基因的差異性表達。現代神經科學研究技術作者:U.Windhorst?&?H. J
自由基顯示實驗_H2O2細胞化學法
氧自由基主要指 O2-? 、?OH ,H2O2?雖不屬于氧自由基,但與氧自由基有密切關系(如其他氧自由基可轉化為 H2O2,H2O2?也可氧化組織,使其發生損傷),因此討論氧自由基時常把其包括在內。H2O2?可與鈰離子反應形成沉淀:H2O2+Ce3+→Ce(OH)2OOH 或 Ce(OH)3OOH,
糖類的化學性質
淀粉的鑒定 1.取2支潔凈的試管,用記號筆在試管上部編號(如A和B)備用。 2.用天平稱取蔗糖和淀粉各2g,分別放入100ml的清水中,溶解后備用。 3.用量筒量取蔗糖溶液和淀粉溶液各3ml,分別滴入等量的稀碘液,觀察并記錄溶液顏色變化情況。 糖類的鑒定 檢驗還原性糖 根據是否具有還
糖類物質的性質實驗
試劑、試劑盒 葡萄糖蔗糖果糖麥芽糖乳糖淀粉費林試劑本尼迪克試劑硝酸銀氨水氫氧化鈉α-萘酚乙醇試劑硫酸間苯二酚-鹽酸試劑鹽酸碘試劑棉花硝酸乙醇乙醚濾紙儀器、耗材 酒精燈試管夾試管表面皿坩堝實驗步驟 1.Molish試驗-α-萘酚試驗出糖在試管中加入1ml 5%葡萄糖,滴入2滴10%α-萘酚和95%乙醇
糖類物質的性質實驗
試劑、試劑盒葡萄糖蔗糖果糖麥芽糖乳糖淀粉費林試劑本尼迪克試劑硝酸銀氨水氫氧化鈉α-萘酚乙醇試劑硫酸間苯二酚-鹽酸試劑鹽酸碘試劑棉花硝酸乙醇乙醚濾紙儀器、耗材酒精燈試管夾試管表面皿坩堝實驗步驟1.Molish試驗-α-萘酚試驗出糖在試管中加入1ml 5%葡萄糖,滴入2滴10% α-萘酚和95%乙醇溶液
糖類染色實驗——糖原染色
實驗方法原理糖原由多糖衍化而來,是單純的多糖。糖原易溶于水,所以用特殊的 Carnoy 固定液或無水乙醇直接固定才能較好地保存糖原,常用高碘酸(periodic acid)-Shiff 反應(PAS)染色法。實驗材料石蠟組織切片試劑、試劑盒高碘酸蒸餾水堿性復紅鹽酸焦亞硫酸鈉(偏重亞硫酸鈉)雙重蒸餾水
糖類染色實驗——黏液物質染色
實驗方法原理在人體和動物體中能夠分泌黏液物質,依其物質中含有的酸基不同,所以分為中性黏液、酸性黏液和混合性黏液,也可被稱為中性黏多糖、酸性黏多糖和混合性黏多糖,常用 Mowry 阿爾辛藍高碘酸 Shiff 反應(ABPAS)染色方法。實驗材料石蠟組織切片試劑、試劑盒阿爾辛藍 8 GS冰醋酸蒸餾水麝香
植物組織和細胞顯微化學染色_顯示細胞壁化學組成方法
實驗方法原理植物體內含有許多種化學物質。在得到植物組織切片之后,可以通過組織化學(顯微化學)染色的方法使不同類型的化學成分在顯微鏡下得以顯示,從而了解這些物質在植物的組織細胞內的空間分布用于組織化學研究的切片,根據研究對象和所要檢測的化學物質的不同,可采用石蠟切片,有時要求新鮮材料采用徒手切片或冰凍
培養細胞染色體顯示法實驗
實驗方法原理 培養細胞有來源易得、細胞分裂率高和制出標本清晰度高等優點,是制備染色體極好的對象。實驗材料 細胞試劑、試劑盒 HanksNaHCO3培養基血清秋水仙素儀器、耗材 酒精燈鑷子培養瓶吸管離心管實驗步驟 1. ?培養細胞取處于指數生長期、用較大瓶皿培養的、80 %~90 %匯合單層培養細胞;
植物組織和細胞顯微化學染色_顯示植物細胞后含物方法
實驗步驟(1) 淀粉:淀粉是植物的主要貯藏物質,它們在各種不同的植物細胞中形成各種形狀小同的顆粒。一般來說,淀粉本身具有特殊的性狀和光學特性,可以不必用專門的顯微化學方法來檢視,由于碘與淀粉作用可形成碘化淀粉而呈藍色反應,用碘-碘化鉀溶液來測試淀粉粒已成為最常用的方法。(2) 蛋白質:植物細胞中的蛋
離子細胞化學實驗
實驗方法原理 實驗材料 組織試劑、試劑盒 磷酸鉀戊二醛蔗糖焦銻酸鉀鋨酸實驗步驟 1. 組織切成約 1 mm3 的小塊,用 0.09 mol/L 磷酸鉀(或草酸鉀)-3% 戊二醛(pH 7.3,用 0.1%~1% KOH 調 pH)固定 4 h 以上,4℃。也有人推薦固定早期用微波照射,以加速
細胞組分的化學反應實驗_細胞內過氧化物酶的顯示
實驗方法原理過氧化物酶能把許多胺類氧化為有色化合物,用聯苯胺處理標本,細胞內的過氧化物酶能把聯苯胺氧化為藍色的聯苯胺藍,進而變為棕色產物,因而可以根據顏色反應來判定過氧化物酶的有無或多少。實驗材料小白鼠試劑、試劑盒PBS緩沖液丙酮二甲苯乙醇三氯醋酸固綠硫酸銅聯苯胺混合液番紅過碘酸酒精液Schiff氏
培養細胞染色體顯示法實驗——傳代培養細胞染色體顯示法
實驗方法原理培養細胞有來源易得、細胞分裂率高和制出標本清晰度高等優點,是制備染色體極好的對象。實驗材料細胞試劑、試劑盒HanksNaHCO3培養基血清秋水仙素儀器、耗材酒精燈鑷子培養瓶吸管離心管實驗步驟1. ?培養細胞取處于指數生長期、用較大瓶皿培養的、80 %~90 %匯合單層培養細胞;2. ?加
示蹤細胞化學實驗
由于高電子密度示蹤劑很容易在細胞間隙擴散,并且如果細胞發生損傷,示蹤劑還可進入到細胞中去,因此可利用此方法觀察細胞連接及細胞損傷情況。常用的示蹤劑有鑭、過氧化物酶等。一般采用孵育法,即組織塊在示蹤液中孵育。也有人采用血管灌注法,但基底膜可阻止示蹤劑進入細胞間隙或細胞內,因此一般只是在研究血管通透性改
示蹤細胞化學實驗
實驗方法原理 實驗材料 組織樣品試劑、試劑盒 NaOH戊二醛硝酸鑭鋨酸-二甲胂酸鈉緩沖液實驗步驟 1. 4% 硝酸鑭配制,PH 7.8,用 NaOH 調,邊加邊攪拌,使溶液呈乳白色。2. 15~25℃ 條件下,組織用 1%~1.5% 硝酸鑭、2%~3% 戊二醛-0.1 mol/L 二甲胂酸鈉緩沖液前
電鏡酶細胞化學實驗
實驗方法原理 電鏡酶細胞化學反應分兩步:①細胞內酶在一定條件下與底物進行初級酶反應(形成初級產物);②應用捕捉劑與初級產物反應形成電子致密物質。電鏡酶細胞化學捕捉方法很多,最常用于水解酶類的為金屬鹽沉淀法和應用于氧化還原酶類的為嗜鋨物質形成法。金屬鹽沉淀法原理是酶反應初級產物與重金屬結合形成不溶解的
請問凝集素有哪些特性?
凝集素具有多方面的特性,在此我們僅簡要提及其與免疫細胞化學技術方法應用有關的某些特性。我們知道,生物膜中含有一定量的糖類,主要以糖蛋白和糖脂的形式存在。凝集素最大的特點在于它們能識別糖蛋白和糖肽中,特別是細胞膜中復雜的碳水化合物結構,即細胞膜表面的碳脂化合物決定簇。一種凝集素具有對某一種特異性糖
凝集素基本特性
凝集素具有多方面的特性,在此我們僅簡要提及其與免疫細胞化學技術方法應用有關的某些特性。我們知道,生物膜中含有一定量的糖類,主要以糖蛋白和糖脂的形式存在。凝集素最大的特點在于它們能識別糖蛋白和糖肽中,特別是細胞膜中復雜的碳水化合物結構,即細胞膜表面的碳脂化合物決定簇。一種凝集素具有對某一種特異性糖基專