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實驗原理經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。克隆化的陽性雜交瘤細胞，經過一段時期培養之后，也還會因為細胞突變或特定染色體的丟失，使部分細胞喪失產生抗體的能力，所以需要再次或多次克隆化培養。克隆化次數的多少由分泌能力強弱和抗原的免疫性強弱而決定。一般說，免疫性強的抗原克隆次數可少一些，但至少要3～5次克隆才能穩定。實驗步驟1. 有限稀釋法 1) 材料 a. 微量培養盤，盤內各孔于克隆化前一天培養小鼠腹腔細胞(即飼養細胞)每孔2萬～4萬。 b. HT培養基&n......閱讀全文
1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。 制備單克隆抗體包括動物免疫
淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術 實驗方法原理 1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨
實驗方法原理1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。 制備單
實驗方法原理 1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤
檢測抗體的方法應根據抗原的性質、抗體的類型不同，選擇不同的篩選方法，一般以快速、簡便、特異、敏感的方法為原則。 常用的方法有: 1. ELISA用于可溶性抗原蛋白質、細胞和病毒等McAb的檢測。 2. RIA用于可溶性抗原、細胞McAb的檢測。 3. FACS熒光激活細胞分類儀用于檢查細胞
（二）細胞融合 1．細胞融合前準備 （1）骨髓瘤細胞系的選擇：骨髓瘤細胞應和免疫動物屬于同一品系，這樣雜交融合率高，也便于接種雜交瘤在同一品系小鼠腹腔內產生大量McAb。常用的骨髓瘤細胞系見表2-4。表2-4用于融合試驗的主要骨髓瘤細胞系名 稱來 源耐 受 藥 物Ig鏈H LP3/X63-Ag
骨髓瘤細胞的培養可用一般的培養液，如RPMI1640，DMEM培養基。小牛血清的濃度一般在10%～20%，細胞濃度以104～5×105/ml為宜，最大濃度不得超過106/ml。當細胞處于對數生長的中期時，可按1：3～1：10的比例傳代。每3～5天傳代一次。細胞在傳代過程中，部分細胞可能有返祖現象，
基因克隆的常用方法 基因(gene)是遺傳物質的最基本單位,也是所有生命活動的基礎。不論要揭示某個基因的功能,還是要改變某個基因的功能,都必須首先將所要研究的基因克隆出來。特定基因的克隆是整個基因工程或分子生物學的起點。本文就基因克隆的幾種常用方法介紹如下。
1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。 制備單克隆抗體包括動物免疫
單克隆抗體的制備實驗可以用于：（1）將產生抗體的單個B淋巴細胞同骨髓腫瘤細胞雜交， 獲得既能產生抗體， 又能無限增殖的雜種細胞，并以此生產抗體；（2）該技術是僅由一種類型的細胞制造出來的抗體，對應于多克隆抗體、多株抗體——由多種類型的細胞制造出來的一種抗體。實驗方法原理單克隆抗體技術(monoclo
一、 實驗準備1． 標本制備：2． zui小化非特異性結合： 二、凋亡1．凋亡的檢測方法：網站和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法 三、細胞因子1．激活的細胞因子2．CBA 四、血小板
1986年，美國FDA批準了第一個單克隆抗體藥物上市，距今已快30年。目前，全世界共有超過40個治療用抗體藥物被批準上市，每年實現超過600億美元的銷售額。在國際及國內形成了抗體藥物開發熱潮。巨大的市場前景和現存的技術問題及壁壘并存的現實不可避免地引發抗體藥物新一輪技術革命。而其結果又將毫無疑問地改
一.睡眠性陣發性血紅蛋白尿PNH睡眠性陣發性血紅蛋白尿（PNH）是一種獲得性造血干細胞異常，臨床主要表現為骨髓喪失造血功能、血栓、慢性溶血性貧血急性發作。PNH的發病率很低，發病原因不詳，可能與再生障礙性貧血有關系。PNH的臨床表現不一，疾病進程多變，給臨床的診斷治療和疾病研究帶來很多困難。最近15
實驗材料 載體和酵母菌 試劑、試劑盒 緩沖液和溶液 SD
一、對照實驗 1．吸收實驗 應用尚無文獻報告的抗血清/自己制備的抗血清進行ICC染色時，需用相應的抗原吸收抗血清后，再孵育標本，判斷結果的可信性（結果應為陰性）。常用的吸收實驗分固相吸收和液相吸收兩種（見本書第一章 ），對于不能形成沉淀，難以用離心沉降法分離的一些小分子多肽類抗原，以固相吸收為佳
流式細胞儀實驗方法 一、 實驗準備1． 標本制備：2． zui小化非特異性結合： 二、凋亡1．凋亡的檢測方法：和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法 三、細胞因子1．激活的細胞因子2．C
一 . 睡眠性陣發性血紅蛋白尿 PNH睡眠性陣發性血紅蛋白尿（ PNH ）是一種獲得性造血干細胞異常，臨床主要表現為骨髓喪失造血功能、血栓、慢性溶血性貧血急性發作。 PNH 的發病率很低，發病原因不詳，可能與再生障礙性貧血有關系。
融合后的細胞在孔里生長時，一般并不是一個單純的克隆（一般是兩個或者多個克隆，就算肉眼看到的是形成一個完整的克隆，但事實上可能是由兩個或者多個原始的雜交瘤形成的），如果直接將其擴大培養將會產生兩個問題：一是如果有兩個或兩個以上的克隆或一個克隆實際上是由兩個克隆長在一起形成的，并且都分泌抗體，那么就有可
外周血是臨床檢驗中的重要標本。FCM分析外周白細胞的主要目的是了解各種白細胞的數目與分群情況。這些數字的變化與臨床的某些疾病有一定的關系。近年來，由于多種識別白細胞膜表面抗原的單克隆抗體的發現，以及對這些單克隆抗體的直接或間接熒光標記物的出現，使得利用FCM的熒光組織化學分析獲得被測細胞的多指標的更
外周血是臨床檢驗中的重要標本。FCM分析外周白細胞的主要目的是了解各種白細胞的數目與分群情況。這些數字的變化與臨床的某些疾病有一定的關系。近年來，由于多種識別白細胞膜表面抗原的單克隆抗體的發現，以及對這些單克隆抗體的直接或間接熒光標記物的出現，使得利用FCM的熒光組織化學分析獲得被測細胞的多指標的更
檢測結合抗體的方法有以下 3 種：放射化學篩選，生色反應篩選及化學發光反應篩選。3 種方法的優缺點在本章導言中有所論述。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒封閉緩沖液氯仿裂解緩沖液檢測抗原-抗體復合物所用試劑SMTNT 緩沖液洗滌緩
免疫PCR技術（Immuno-PCR） 免疫PCR方法（Immuno-PCR）是Takeshi等1992年將免疫學反應和PCR技術相結合而創建的一種新的檢測技術，具有抗原、抗體反應的特異性和PCR技術的高效性。它運用PCR的高度敏感性來放大抗原抗體反應的特異性，使實驗中只需數百個抗原分子即
1994年到2011年間，《比較神經學》（Comparative Neurology）期刊的主編Clifford Saper經常看到一大堆利用抗體標記神經遞質及其受體位置的論文。2000年前后，基因敲除小鼠在生物領域大受歡迎，但結果令人不安。這提醒了Clifford Saper一個事實：抗體正在
免疫組織化學的概念： 免疫組化是利用抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質)，對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學。 免疫組化實驗所用的抗體有哪些？ 免疫組化實驗中
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被
直接western blot檢測方法在直接檢測方法中，酶直接連接到一抗上(圖1.5)。操作簡單，檢測步驟少。雖然直接檢測是快速和直接的，但它往往比間接檢測的靈敏度低，因為在這個過程中可以發生信號放大的步驟更少。此外，酶直接標記到一抗上可能會造成成本和資源上的限制。間接western blot檢測方法
實驗步驟基 本 方 案 1 多克隆抗磷酸肽抗體的制備材料B S A -瓊 脂 糖 親 和 基 質（Sigma) 填 裝（如輔助方案 2 ) 于柱床體積IOml的層析柱磷酸化酪氨酸親和基質層析柱（IOml 柱床體積；見輔助方案3)磷酸肽-B S A 偶聯物免疫家兔的粗制血清PB S /疊氮鈉.?含有0
試劑、試劑盒 封閉緩沖液 氯仿 裂解緩沖液 檢測抗原-抗體復合物所用試劑 SM T
實驗材料異丙基-β-D-硫代半乳糖苷試劑、試劑盒PP 緩沖液變性裂解緩沖液儀器、耗材微量滴定板實驗步驟3.1 高通量蛋白的表達和純化我們用在 PQE30 表達載體里構建的，可表達帶 N 端 RGS-His6 標記的大腸桿菌 cDNA 表達克隆來生產重組植物蛋白。由于超出本章節的范圍，我們不
實驗材料：異丙基-β-D-硫代半乳糖苷試劑、試劑盒：PP 緩沖液